Spons merupakan invertebrata multiselular paling primitif tanpa jaringan nyata yang hidup dengan baik pada daerah terumbu karang. Spons sebagai salah satu biota laut merupakan suatu sumber senyawa-senyawa baru yang mempunyai kemampuan biosintetik berskala lebih luas dibandingkan invertebrata lainnya. Penelitian ini bertujuan sebagai skrining tingkat toksisitas ekstrak spons Callyspongia sp. dari Kepulauan Seribu dengan metode BSLT serta memperoleh pola kromatogram fraksi aktifnya. Uji BSLT terhadap fraksi etil asetat hasil fraksinasi cair-cair ternyata memiliki toksisitas paling tinggi (LC50 0,879 μg/ml) dibandingkan fraksi n-butanol dan air. Pemisahan komponen dilakukan pada fraksi etil asetat dengan kromatografi kolom menghasilkan lima fraksi gabungan. Fraksi I menunjukkan sifat paling aktif terhadap larva Artemia salina (LC50 11,888 μg/ml). Profil kromatogram fraksi I dengan eluen metanol-amonium hidroksida menghasilkan satu bercak dengan hRf 67.