Aspergillus flavus mampu memproduksi berbagai metabolit sekunder,salah satunya adalah asam kojat, yang mempunyai kegunaan yang luasdalam berbagai bidang. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh galurmutan A. flavus yang dapat menghasilkan asam kojat dengan kadar yanglebih besar dibandingkan galur mutan A. flavus 40C10. Galur mutandiperoleh melalui mutasi yang di induksi dengan menggunakan mutagenNTG(1000 ppm) dan iradiasi sinar gamma dengan dosis 0,5 – 5 KGy.Analisis kuantitatif dan kualitatif asam kojat dan aflatoksin dilakukan secaraKLT densitometri menggunakan fase diam silika gel F254 dan fase geraktoluen, etil asetat dan asam formiat (3: 6: 1). Hasil penelitian menunjukkanmutagenesis dengan NTG secara berulang dapat meningkatkan produksiasam kojat., sedangkan iradiasi dengan sinar gamma tidak. Dari tiga kalimutagenesis dengan NTG diperoleh galur mutan M3B7F7E8 yangmenghasilkan asam kojat 9,123 g/L atau 1,5 kali lebih besar dibandingkan A.flavus 40C10. Galur mutan M3B7F7E8 ini masih menghasilkan aflatoksinyang teridentifikasi pada nilai Rf 0,61 dengan kadar 0,730 mg/L