Penelitian subcloning daerah imunodominan gen env HIV-1 ke dalam
vektor ekspresi pMETαC telah dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi FK UI
dari Januari--September 2008. Tujuan penelitian menghasilkan subklona
daerah imunodominan gen env HIV-1 pada vektor ekspresi pMETαC.
Daerah imunodominan gen env HIV-1 (505 pb) diperoleh dari hasil PCR
dengan primer forward pIMUDMT dan reverse IMUDMTc1. Daerah
imunodominan gen env HIV-1 diligasi dengan vektor ekspresi pMETαC yang
didigesti dengan BamHI dan SalI. Hasil ligasi ditransformasi ke dalam
Escherichia coli TOP10 dan ditumbuhkan pada medium LB padat
(+ampisilin). Koloni tumbuh sebanyak 32 dan 10 di antaranya diisolasi.
Sepuluh koloni tersebut didigesti dengan EcoRI dan SacII. Sebanyak 3
koloni menunjukkan pita DNA berukuran 552 pb (DNA sisipan) dan 7.953 pb
(vektor). Selanjutnya dilakukan PCR terhadap 3 koloni tersebut dan
menghasilkan pita DNA berukuran 505 pb. Analisis BLASTN menunjukkan
bahwa sekuen sisipan (187 pb) memiliki persentase kemiripan (identity) 98%
(185/187) dengan human immunodeficiency virus type 1, NY5/BRU (LAV-1)
recombinant clone pNL4-3 [Acc. No. M19921.1]. Hasil tersebut menunjukkan
telah diperoleh subklona daerah imunodominan gen env HIV-1 di dalam
vektor ekspresi pMETαC. Akan tetapi, perlu dilakukan sequencing ulang
guna mengetahui seluruh basa DNA sisipan agar hasilnya dapat lebih
dipercaya.
S31538-Delta Fermikuri Akbar.pdf :: Unduh