ABSTRAK6-Merkaptopurin (6-MP) merupakan agen kemoterapi kanker yang termasuk dalam
golongan antimetabolit antagonis purin. 6-Merkaptopurin harus melalui jalur
metabolisme oleh tiopurin S-metiltransferase (TPMT) untuk menjadi metabolit
inaktifnya, yaitu 6-metilmerkaptopurin (6-MMP) untuk mengurangi efek sitotoksik
dari 6-MP yang dapat menyebabkan mielosupresi. Penelitian ini bertujuan untuk
memperoleh metode optimum dan tervalidasi dalam menganalisis 6-MP dan 6-
MMP secara simultan dalam sampel Dried Blood Spot menggunakan kromatografi
cair kinerja ultra tinggi tandem spektrometri massa. Larutan kontrol kualitas dan
kurva kalibrasi dibuat dengan menotolkan masing-masing sebanyak 40 μL pada
kertas CAMAG DBS dan dikeringkan selama 3 jam. Kertas DBS dipotong dengan
diameter 8 mm dan diekstraksi dengan larutan asetonitril-metanol (1:3) yang
mengandung baku 5-fluorourasil (5-FU). Pemisahan dilakukan dengan kolom
Waters Acquity UPLC Class BEH C18 1,7 μm (2,1 x 100 mm) dengan fase gerak
berupa asam format 0,1% dalam air ? asam format 0,1% dalam asetonitril dengan
gradient elusi dan laju alir 0,2 mL/menit. Deteksi massa dilakukan dengan Waters
Xevo TQD dengan Electrospray Ionization (ESI) positif untuk 6-MP dan 6-MMP
dan ESI negative untuk 5-FU pada mode Multiple Reaction Monitoring. Deteksi 6-
MP, 6-MMP, 5-FU berturut-turut adalah 153,09 > 119,09; 167,17 > 126,03; 129,09
> 42,05. Metode ini linear dalam rentang 26 ? 1000 ng/mL untuk 6-MP dan 13 ?
500 ng/mL untuk 6-MMP dengan r berturut-turut adalah ≥ 0,998 dan ≥ 0,999. Nilai
% diff dan koefisien variasi (KV) untuk akurasi dan presisi intra hari dan antar hari
tidak lebih dari 15% dan tidak lebih dari 20% pada konsentrasi LLOQ. Metode ini
memenuhi persyaratan selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, carry-over, dan efek
matriks yang mengacu pada EMEA Guidelines.
ABSTRACT6-Mercaptopurine (6-MP) is a cancer chemotherapeutic agent that belongs to a class
of purine antagonist antimetabolite. 6-Mercaptopurine has to go through the
metabolic pathway by thiopurine S-methyltransferase (TPMT) to become its
inactive metabolite, 6-methylmercaptopurine (6-MMP) to reduce the cytotoxic
effect of 6-MP which can cause myelosuppression. This study aimed to obtain an
optimum and validated method in analyzing 6-MP and 6-MMP simultaneously in
Dried Blood Spot samples using ultra high-performance liquid chromatography
tandem mass spectrometry. The quality control and calibration curves solutions
were made by respectively spot 40 μL at DBS CAMAG paper and dried for 3 hours.
DBS papers were cut with a diameter of 8 mm and extracted with acetonitrilemethanol
(1:3) containing internal standard 5-fluorouracil (5-FU). Separation was
performed with Waters Acquity UPLC BEH C18 column Class 1.7 μm (2.1 x 100
mm) with a mobile phase consists of 0.1% formic acid in water ? 0.1% formic acid
in acetonitrile with gradient elution and flow rate 0.2 mL/minute. Mass detection
was done using Waters Xevo TQD with positive electrospray ionization (ESI) for
6-MP and 6-MMP and negative ESI for 5-FU in Multiple Reaction Monitoring
mode. Detection of 6-MP, 6-MMP, 5-FU respectively was 153.09> 119.09;
167.17> 126.03; 129.09> 42.05. This method is linear with the range 26-1000 ng /
mL for 6-MP and 13 to 500 ng / mL for 6-MMP with consecutive r value is ≥ 0,998
and ≥ 0,999. % Diff value and coefficient of variation (CV) for accuracy and
precision of intra-day and inter-day are not more than 15% and not more than 20%
at a concentration LLOQ. This method fulfilled the requirements of selectivity,
linearity, accuracy, precision, carry-over, and matrix effects which refers to the
EMEA Guidelines.
S64281-Marlina Ika.pdf :: Unduh