ABSTRAK
Sifilis merupakan penyakit multistadium kronik yang disebabkan oleh bakteriTreponema pallidum dan ditularkan dari lesi aktif pasangan seksual atau dari ibuhamil yang terinfeksi pada janin yang dikandungnya. Saat ini telah terjadipeningkatan kasus T. pallidum resisten azitromisin akibat mutasi titik A2058Gdan A2059G pada gen 23S rRNA. Di Indonesia belum ada data terkait resistensiT. pallidum terhadap azitromisin sehingga penelitian ini bertujuan untukmendapatkan metode nested multipleks PCR untuk deteksi kedua mutasi yangmenyebabkan resistensi. Tiga pasang primer digunakan pada reaksi nested PCR.Untuk mendapatkan kondisi uji yang optimal dilakukan optimasi parameter yangpenting pada proses PCR. Uji nested multipleks PCR dapat mendeteksi 22.000jumlah copy DNA/ml dan tidak bereaksi silang terhadap mikroorganisme yangpotensial menyebabkan hasil positif palsu. Uji awal 45 sampel klinis darahditemukan 13 sampel positif T. pallidum dan tidak ditemukan mutasi baikA2058G maupun A2059G. Dua sampel positif dikonfirmasi dengan DNAsekuensing dan menunjukkan tidak ada mutasi titik. Uji nested multipleks PCRyang telah dikembangkan pada penelitian ini dapat digunakan untuk deteksimutasi gen 23S rRNA T. pallidum yang menyebabkan resistensi azitromisin pada sampel klinis darah.

---

ABSTRACT
Syphilis is a chronic, multi-stage infectious disease caused by Treponemapallidum that is usually transmitted sexually by contact with an active lesion of a partner or congenitally from an infected pregnant woman to her fetus.Azithromycin-resistant strains of T. pallidum is associated with a single pointmutation (either A2058G or A2059G) in both copies of the 23S rRNA gene of T.pallidum. These strains are now prevalent in many countries but there is no dataavailable about it in Indonesia. Therefore, in this study we developed a nestedmultiplex PCR to detect A2058G and A2059G 23S rRNA gene point mutations ofT. pallidum. Three primer sets were designed for nested PCR reactions. To obtainoptimal PCR reaction, all parameters were optimized. The assay could detect atleast 22000 DNA copy number/ml and showed no cross reaction with othermicroorganisms that potentially cause false positive result. A total 13 of 45 wholeblood specimens were PCR positive for T. pallidum and no single point mutation(either A2058G or A2059G) were detected by PCR. Two positive specimens wereconfirmed by DNA sequencing and showed no mutation. Thus, nested multiplexPCR developed in this study is potential to detect azithromycin-resistant T.pallidum in whole blood samples.