Siklofosfamid merupakan salah satu obat golongan agen pengalkilasi nitrogen mustaryang sering digunakan dalam kemoterapi kanker. Namun demikian, penggunaansiklofosfamid dengan dosis yang tinggi dan jangka waktu yang panjang telah terbuktidapat meningkatkan risiko terjadinya kanker sekunder. Hal ini dapat ditandai denganterbentuknya DNA adduct yang mutagen, seperti N5-Nitrogen mustarformamidopirimidin(NM-Fapy-G). Oleh karena itu, adduct tersebut dapat dijadikansalah satu biomarker terjadinya kanker sekunder pada pasien yang menerimasiklofosfamid. Beberapa peneliti telah mengembangkan metode untuk menganalisis NMFapy-G dengan menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Ultra Tinggi – TandemSpektrometri Massa (KCKUT-SM/SM). Namun demikian, seluruh penelitian tersebutmasih menggunakan sel atau jaringan sebagai biospesimennya sehingga tidak aplikatifapabila ingin diimplementasikan kepada pasien. Oleh karena itu, tulisan ini dibuat untukmemaparkan gagasan terkait kesesuaian penggunaan Dried Blood Spot (DBS) sebagaimetode biosampling darah; metode ekstraksi dan hidrolisis DNA yang tepat untukmemperoleh adduct NM-Fapy-G; dan metode analisis yang sesuai untuk menganalisisNM-Fapy-G. Berdasarkan studi literatur yang telah dilakukan, maka DBS telah terbuktidapat digunakan dalam penelitian ini; QIAamp DNA Mini Kit dapat digunakan untukmengekstraksi DNA dari kertas DBS; metode yang telah dikembangkan oleh Gruppi etal., (2015) dapat digunakan untuk hidrolisis DNA; dan analisis dapat dilakukan denganmenggunakan kondisi analisis yang telah dikembangkan Chen et al., (2020) dengansedikit modifikasi. Metode yang diajukan diharapkan dapat digunakan dalam penelitianNM-Fapy-G selanjutnya. Apabila hasil yang didapatkan positif, diharapkan dapat segeradiimplementasikan untuk menganalisis NM-Fapy-G pada pasien kanker yang menerimasiklofosfamid sehingga kemungkinan tejadinya kanker sekunder dapat diprediksi

---

Cyclophosphamide is one of the alkylating nitrogen mustard agents that is frequently used

for cancer chemotherapy. Nevertheless, long-term use of high dosage cyclophosphamide

has been proven to increase the risk of secondary cancer. This can be traced by the

mutagenic DNA adduct formation, for instance, N5-Nitrogen mustardformamidopyrimidine

(NM-Fapy-G). Consequently, it may serve as one of the secondary

cancer biomarkers in cancer patients who are receiving cyclophosphamide treatment.

There are already several NM-Fapy-G analysis methods employing Liquid

Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) developed by experts.

However, cells and tissues are still utilized as the biospecimens, thus it is discovered not

applicative and hard to be performed in patients. Therefore, this summary is presented to

emphasize the idea of adopting Dried Blood Spot as the blood's biosampling method;

DNA extraction and hydrolysis method that is suitable for enriching NM-Fapy-

G adduct; and method that is proper for NM-Fapy-G analysis. Based on the literature

study, DBS has been proven beneficial for this analysis; DNA can be extracted from the

DBS cards by using QIAamp DNA Mini Kit; DNA hydrolysis can be executed according

to the method that has been developed by Gruppi et al., (2015); and method from Chen

et al., (2020) research with a little bit of adjustment can be applied for NM-Fapy-G

analysis. Hopefully, the proposed idea will be accepted in future NM-Fapy-G analysis,

so it can soon be implemented for NM-Fapy-G analysis in cancer patients who have been

administered cyclophosphamide. Hence, the possibility of secondary cancer may be

predicted.