Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Gen cobU Pseudomonas denitriflcans merupakan salah satu gen yang berperan dalam tahap akhir sintesis vitamin B12. Gen cobU menyandi enzim nicotinate nucleotide: dimethylbenzimidazole phosphoribosyltransferase (NN: DMB1 PRT). Gen cobU Pseudomonas denitriflcans Schlegel BioMCC B12 F942/288 telah diamplifikasi menggunakan PCR dengan primer-primer spesifik, cobU5 (23 mer) dan cobU6 (23 mer). Kedua primer tersebut memiliki suhu leleli 54° C dan kandungan GC sebesar 56%. Primer-primer didisain berdasarkan publikasi Cameron dkk. (1991). DNA diisolasi dari Pseudomonas denitriflcans Schlegel BioMCC B12 F942/288 menggunakan Wizard Genomic DNA Purification Kit*. Kondisi amplifikasi dioptimasi pada suhu annealing, pada kisaran 50?55° C, suhu optimal yang diperoleh adalah 52° C. Produk amplifikasi dianalisis dengan teknik elektroforesis gel agarosa 1%. Hasil amplifikasi menunjukkan bahwa proses amplifikasi berjalan kurang spesifik, terdapat pita gen cobU dengan ukuran yang diharapkan( 1.124 pb) dan pita-pita lainnya. Hasil tersebut kemudian dipuriflkasi untuk digunakan dalam pengklonaan gen cobU."

"Penelitian yang bertujuan menghasilkan klona gen NS1 virus denguepada vektor ekspresi pGEX-6P1 dalam Escherichia coli BL21 Star™(DE3)telah dilakukan di Laboratorium Biologi Molekular, LAPTIAB, BPPT, Serpongselama Januari--November 2008. Gen NS1 dengue diamplifikasi denganprimer spesifik d3-2336sbam (forward) dan d3-NS1-1056c (reverse). ProdukPCR gen NS1 (1.160 pb) yang telah dipurifikasi, didigesti dengan enzimBamHI-XhoI (double digestion) kemudian diligasikan pada vektor ekspresipGEX-6P1. Reaksi ligasi ditransformasikan ke dalam sel kompeten E. coliBL21 Star™(DE3). Sebanyak 19 koloni diisolasi secara acak dari 162 koloniyang tumbuh pada medium seleksi ampisilin. Hasil verifikasi dengan digestidan PCR menunjukkan koloni 1b3 sebagai koloni positif rekombinan. Hasilsequencing terhadap 356 basa pertama gen NS1 menggunakan primerspesifik d3-2716c, menunjukkan bahwa plasmid rekombinan 1b3mengandung gen NS1. Analisis BLASTN terhadap database DNA padaGenBank menunjukkan homologi 96% dengan sekuen DEN-3 strain KJ71(accession number AY858044.2). Kloning gen NS1 dengue pada vektorpGEX-6P1 dalam E. coli BL21 Star™(DE3) berhasil dilakukan."