Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"This book will cover primary roles of NKT cells in immunity to cancer, in both mouse tumor models and cancer patients. There are several chapters describing general aspects of NKT cells."

"Latar belakang: Pasien HIV yang mendapatkan terapi antiretroviral (ARV) memiliki risiko yang besar terhadap infeksi CMV dan mencerminkan adanya perubahan kardiovaskular secara sistemik. Genotip dari sel Natural Killer (NK) dan sel imunitas berperan penting terhadap reaktivasi CMV. Namun, polimorfisme dari genotip sel NK dan sel imun pada populasi Indonesia belum banyak diketahui. Peneliti melakukan analisis penilaian terhadap kaliber arteri retina (RAC) sebagai pengukuran non-invasif untuk mengetahui perubahan patologis vaskular dari pasien HIV yang baru menjalani terapi ARV dengan risiko tinggi terhadap reaktivasi CMV serta hubungan antara genotip dari sel NK dan sel imunitas pada pasien HIV dengan seropositif CMV pada populasi IndonesiaTujuan: Untuk mengetahui perubahan dari kaliber arteri retina dan hubungannya terhadap faktor risiko tradisional, faktor inflamasi dan juga pengaruh genotip dari sel NK dan sel imunitas pada pasien HIV dengan seropositif CMV pada populasi IndonesiaMetode: Peneliti melakukan pemeriksaan terhadap 79 pasien HIV yang baru memulai terapi ARV di Jakarta, Indonesia dengan median (rentang) usia 31 (19-48) tahun. RAC diukur menggunakan perangkat lunak Image J dari foto fundus kedua mata, sebelum ART (V0) dan setelah 3-12 bulan (V3-V12). Pemeriksaan juga dilakukan terhadap IgG dan IgG IE anti-CMV. Model multivariabel digunakan untuk menentukan variabel terbaik sebagai prediktor dari RAC pada V12. Pemeriksaan genotip dilakukan menggunakan metode Taqman SNP genotyping assay.Hasil: Pasien HIV memiliki kaliber arteri retina yang lebih sempit dan titer antibodi CMV yang lebih tinggi dibandingkan kontrol sehat. RAC mengecil setelah 12 bulan menggunakan ARV (p<0.0001). RAC kanan berkorelasi dengan IgG IE anti-CMV, sedangkan RAC kiri berkorelasi pada setiap waktu dengan cIMT. Model multivariabel menghubungkan RAC pada V12 dengan HIV Viral load pada V12 dan riwayat mengkonsumsi minuman beralkohol, sementara merokok memiliki sifat protektif. Alel homozigot IL-1A penanda inflamasi berhubungan dengan kaliber arteri retina yang lebih sempit pada mata kanan dibandingkan alel heterozigot sebelum mengkonsumsi ARV. Alel homozigot TNF-308 berhubungan dengan rendahnya IgG IE anti-CMV dibanding heterozigot secara konstan sebelum terapi ARV sampai 12 bulan setelah terapi ARV. Kaliber arteri retina mata kanan pada bulan ke-12 berhubungan dengan subset CD56^lo sebelum terapi ARV. CD56^lo LIR1 sebelum terapi ARV berkorelasi dengan RAC kiri pada bulan ke-12 terapi ARV.Kesimpulan: Penyempitan dari kaliber arteri retina pada pasien HIV dengan seropositif CMV sudah dibuktikan pada penelitian ini, dimana kaliber arteri retina menjadi lebih sempit dibanding kontrol sehat, dan semakin mengecil setelah 12 bulan penggunaan ARV. Faktor risiko tradisional dan infeksi oportunistik tidak berkorelasi dengan perubahan kaliber arteri retina. Penyempitan dari RAC kiri berkorelasi terbalik dengan kadar C-Reactive Protein (CRP) dan cIMT kiri. Pada analisis multivariat, peneliti menemukan bahwa pasien dengan riwayat merokok memiliki RAC yang lebih lebar sementara pasien dengan riwayat mengkonsumsi minuman alkohol memiliki RAC yang lebih sempit. Penyempitan dari RAC kemungkinan disebabkan karena adanya rekativasi CMV dibandingkan infeksi HIV. Genotip dari sel NK dan sel imun tidak berkorelasi dengan RAC, hanya alel homozigot dari IL-1A yang menunjukkan RAC yang lebih sempit dibandingkan alel lain. Penelitian ini juga menunjukkan alel homozigot dari TNF-308 memiliki titer IgG and IgG IE anti-CMV yang lebih rendah.

---

Background: HIV patients responding to antiretroviral therapy (ART) have a high burden of Cytomegalovirus (CMV) and display accelerated cardiovascular change assessed systemically. Genotype of Natural Killer (NK) cells and immune-related cells are important in CMV reactivation. However, polymorphism in genotype of NK cells and immune-related cells in Indonesia population was not well defined. Hereby, we assessed retinal arteries calibers (RAC) as a non-invasive measure of vascular pathology in HIV patients beginning ART with a high burden of CMV and the relationship between genotype of NK cells and immune-related cells in Seropositive CMV HIV patients in Indonesian population.Objective: To observe changing of retinal artery caliber and its relation with traditional risk factor, inflammatory risk factor and genotype of NK cells and immune-related cells in Seropositive CMV HIV patients in Indonesian population.Method: We analyzed 79 HIV patients beginning ART in Jakarta, Indonesia, with a median (range) age of 31 (19-48) years. RAC was assessed using Image J software from fundus photos of both eyes, before ART (V0) and after 3-12 months (V3-V12). CMV DNA and antibodies were assessed. Multivariable models assessed which variables best predicted RAC values at V12. Genotype were assessed used Taqman SNP genotyping assay method.Result: HIV patients had narrower retinal arteries and higher levels of CMV antibodies than healthy controls. RAC decreased over 12 months of ART (p<0.0001). Right RAC correlated with CMV IE-1 antibody, whilst the left RAC at V# correlated with cIMT. Multivariable models linked RAC at V12 with detectable HIV RNA at V12 and declared use of alcoholic drinks, whilst a smoking habit was protective. Homozygous allele of IL-1A inflammatory marker associated with narrower retinal artery caliber in right eye compared to heterozygous before ART but similar association was not found in the left eye. Homozygous allele of TNF-308 associated with lower CMV-IE1 compared to its heterozygous constantly before ART until 12 months of ART. Right retinal artery caliber in 12 months was correlated with CD56^lo subset before ART. CD56^lo LIR1 before ART was correlated with left retinal artery caliber in 12 months of ART.Conclusion: Narrowing of retinal artery caliber in HIV patients with CMV seropositive has been demonstrated in this study, which retinal artery caliber was narrower than healthy controls, and still narrowing until 12 months of ART. Traditional risk factors and opportunistic infections did not show any correlation with retinal artery caliber changes. Narrowing of left retinal artery caliber had inverse correlation with CRP level and left cIMT. On multivariable analysis, we found that those who admitted smoking had larger retinal artery caliber whilst those who consumed alcohol had narrower retinal artery caliber. Narrowing of retinal artery caliber was more likely occur as a result of CMV reactivation than HIV infection itself. The NK-related genotypes and immune-mediate genotypes did not correlate with retinal artery caliber, only homozygous allele of IL1A had a narrower retinal artery caliber than other alleles. This study also found that homozygous allele of TNF-308 had lower CMV lysate antibody and CMV IE antibody level."

"ABSTRAKLatar Belakang: Persistensi infeksi HPV onkogenik merupakan penyebab kanker serviks. Retinol sebagai mikronutrien antioksidan memiliki peran esensial dalam sistem imun mencegah persistensi. Retinol memodulasi sel T CD4+/CD8+ serta produksi sitokin. Tumor Necrosis Factor-Alpha (TNF-) adalah sitokin pro-inflamasi yang mampu mengendalikan HPV, namun pada infeksi persisten TNF- justru memicu karsinogenesis. Rasio sel T CD4+:CD8+ dan TNF- yang adekuat di awal infeksi HPV merupakan titik kunci klirens. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui tingkat kecukupan deposit retinol, ekspresi TNF-, dan rasio sel T CD4+:CD8+ pada kelompok serviks normal, infeksi subklinis HPV klirens, persisten, dan kanker serviks.Metode: Tingkat kecukupan deposit retinol diketahui berdasarkan pemeriksaan darah perifer dengan metode ELISA. Stimulasi spesifik epitop E6 HPV tipe 16 dilakukan pada sel sekret servikovaginal yang telah diinkubasi 24 jam, diamati ekspresi TNF- secara semikuantitatif dengan metode ELISpot. Pemeriksaan sel T CD4+ dan CD8+ dari sekret servikovaginal secara kuantitatif dengan metode flowsitometri.Hasil: Deposit retinol yang cukup pada kelompok serviks normal, infeksi subklinis HPV klirens, persisten, dan kanker serviks berturut-turut adalah 85%, 75% (OR 1,89), 33,3% (OR 11,33), dan 75% (OR 1,89). Ekspresi TNF- pada kelompok serviks normal adalah 10%, sedangkan kanker serviks 75% (OR 27,00; p<0,001). Tidak tampak ekspresi TNF- pada kelompok infeksi subklinis HPV klirens dan persisten. Rasio sel T CD4+:CD8+ yang tinggi pada kelompok serviks normal adalah 10% dan kanker serviks 25% (OR 0,33). Tidak terdapat rasio sel T CD4+:CD8+ yang tinggi pada kelompok infeksi subklinis HPV klirens (OR 1,22) dan persisten (OR 0,95). Tidak terdapat hubungan bermakna antara tingkat kecukupan deposit retinol dengan ekspresi TNF- (p=0,147), tingkat kecukupan deposit retinol dengan rasio sel T CD4+:CD8+ (p=0,726), dan rasio sel T CD4+:CD8+ dengan ekspresi TNF- (p=0,690).Kesimpulan: Penelitian ini mampu membuktikan bahwa tingkat kecukupan deposit retinol tertinggi dijumpai pada kelompok serviks normal dan ekspresi TNF- tertinggi pada kelompok kanker serviks (OR 27,00; p<0,001). Tingkat kecukupan deposit retinol terendah bukan pada kelompok kanker serviks, melainkan pada infeksi subklinis HPV persisten (OR 11,33). Tidak terdapat perbedaan bermakna pada tingkat kecukupan deposit retinol dan rasio sel T CD4+:CD8+. Terdapat perbedaan bermakna pada ekspresi TNF- antara kelompok kanker serviks dengan serviks normal (p<0,001), kanker serviks dengan infeksi HPV subklinis klirens (p=0,024), dan klirens dengan persisten (p=0,007). Tidak terdapat perbedaan bermakna ekspresi TNF- antara kelompok kanker serviks dengan infeksi HPV subklinis persisten (p=0,058). Tidak bermaknanya beberapa hasil terkait imunitas masih mungkin dikarenakan tingkat kecukupan deposit retinol kelompok kanker serviks pada penelitian ini sangat baik dimana bertentangan dengan kepustakaan.

---

ABSTRACT

Background: Persistency of oncogenic-HPV infection is the cause of cervical cancer. Retinol is one of antioxidant micronutrients that plays essential roles in immune system to prevent the persistency by modulating CD4+ and CD8+T cells and cytokines production. Tumor Necrosis Factor-Alpha (TNF-) is an acute pro-inflammatory cytokine which has many crucial roles in controlling HPV. In contrast, when persistent infection occurs, TNF- induces carcinogenesis. Ratio of CD4+:CD8+ T cells and adequate TNF- production in acute HPV infection are keypoints for clearance. The aim of this research is to analyze sufficency level of retinol deposit, expression of TNF-, and ratio of CD4+:CD8+ T cells in normal cervix, clearance and persistent HPV subclinical infection, and cervical cancer group.

Methods : Sufficiency level of retinol deposit was analyzed from peripheral blood by ELISA method. The cervicovaginal secretions which had 24 hours incubated were stimulated specifically by E6 epitope HPV type-16, measuring TNF- expression semiquantitatively by ELISpot method and CD4+/CD8+ T cells quantitatively by flowcytometry method.

Results: Sufficient level of retinol deposit in normal cervix, clearance HPV subclinical infection, persistent, and cervical cancer group was 85%, 75% (OR 1.89), 33.3% (OR 11.33), and 75% (OR 1.89), respectively. The expression of TNF- in normal cervix group was 10%, while in cervical cancer was 75% (OR 27.00; p<0.001). There were no expression in clearance and persistent HPV subclinical infection groups. High ratio of CD4+:CD8+ T cells in normal cervix and cervical cancer group was 10% and 25% (OR 0.33). There were no high ratio of CD4+:CD8+ T cells in clearance (OR 1,22) and persistent (OR 0.95) HPV subclinical infection groups. There was no significant correlation between sufficiency level of retinol deposit and TNF- expression (p=0.147), sufficiency level of retinol deposit and ratio of CD4+:CD8+ T cells (p=0.726), ratio of CD4+:CD8+ T cells and TNF- expression (p=0.690).

Conclusions: This study was able to prove that normal cervix group has the highest retinol deposit sufficiency level and cervical cancer group has the highest TNF- expression (OR 27,00; p<0,001). The lowest of retinol deposit sufficiency level was not in cervical cancer, but in persistent HPV subclinical infection group (OR 11.33). There was no significant correlation in sufficiency level of retinol deposit and ratio of CD4+:CD8+ T cells. There was significant correlation in TNF- expression between cervical cancer and normal cervix (p<0.001), cervical cancer and clearance subclinical HPV infection (p=0.024), and between clearance and persistent group (p=0.007). There was no significant correlation in TNF- expression between cervical cancer and persistent subclinical HPV infection group (p=0.058). Not significant some results related immunity that might be due to retinol deposit sufficiency level in cervical cancer group in this study was very good, which conflicted with literatures."

"Karsinoma hepatoseluler (KHS) adalah kanker primer liver dan penyebab kedua kematian akibat kanker. Eksosom pada lingkungan mikro KHS berfungsi untuk komunikasi antar sel dan bila endositosis ke sel NK dapat menyebabkan perubahan pada sel NK. Penelitian ini bertujuan menganalisis eksosom dari darah pasien KHS, perubahan fenotipe sel NK, dan uji pewarnaan histologi (peroksidase, toluidine blue) untuk mengamati perubahan granula azurofilik sel NK akibat endositosis eksosom. Metode penelitian meliputi isolasi sel NK dari donor sehat dan eksosom darah pasien KHS, karakterisasi eksosom dengan PSA, stimulasi sel NK dengan eksosom, flow cytometry reseptor pada sel NK dan CD81+ pada eksosom, imunofluoresens endositosis eksosom ke sel NK, pewarnaan toluidine blue dan peroksidase.Hasil menunjukkan eksosom berukuran 34,7 nm, bermuatan -4,33 mV dan positif CD81+. Perubahan reseptor sel NK sehat yang dipaparkan eksosom KHS tidak signifikan (P>0,05). Imunofluoresens memperlihatkan endositosis eksosom ke sel NK. Pewarnaan sel NK toluidine blue menunjukkan metakromasia dan peroksidase negatif. Sel NK+eksosom mengalami perubahan hasil pewarnaan. Peneliti menyimpulkan bahwa eksosom dari darah pasien KHS sesuai kriteria MISEV 2018.Tidak terjadi perubahan fenotipe sel NK sehat yang dipaparkan eksosom dari darah pasien KHS. Pewarnaan peroksidase dan toluidine blue dapat digunakan sebagai metode pengamatan endositosis eksosom ke sel NK.

---

Hepatocellular carcinoma (HCC) is the primary liver cancer and the second leading cause of death from cancer. Exosomes in the HCC microenvironment function for communication between cells and when endocytosed to NK cells can cause changes in NK cells. This study aims to analyze exosomes from the blood of HCC patients, changes in NK cell phenotype, and histological staining tests (peroxidase, toluidine blue) to observe changes in NK cell azurophilic granules due to exosome endocytosis. NK cells from healthy donors and blood exosomes of KHS patients were isolated, exosomes characterized by PSA, stimulation of NK cells with exosomes, and flow cytometry of receptors on NK cells and CD81+ on exosomes were done. Endocytosis of exosomes onto NK cells were observed through immunofluorescence, then metacromasia and azurofilic granules of NK cells were observed after toluidine blue and peroxidase staining. Results showed The exosome is 34.7 nm in size, has a charge of -4.33 mV and is CD81+ positive. Changes in healthy NK cell receptors exposed to HCC exosomes were not significant (P>0.05). Immunofluorescence demonstrates exosome endocytosis in NK cells. Toluidine blue NK cell staining showed negative metachromasia and peroxidase. In NK cell+exosome there is a change in staining results. We concluded exosomes from the blood of HCC patients comply with MISEV 2018 criteria. There is no change in the phenotype of healthy NK cells exposed to exosomes from the blood of HCC patients. Peroxidase and toluidine blue staining can be used as a method of observing exosome endocytosis in NK cells."

"This thesis presents the first report of the comprehensive and quantitative analysis of the effects of tumor-derived mutations on the tetrameric structure of tumor suppressor protein p53, which plays a central role in maintaining genomic integrity. Inactivation of p53 via mutation of its gene is a key step in tumorigenesis. Biophysical analyses revealed that the stability of the mutant peptides varied widely. Formation of a tetrameric structure is to be critical for protein–protein interactions, DNA binding, and the post-translational modification of p53. A small destabilization of the tetrameric structure therefore could result in dysfunction of tumor suppressor activity. This work suggests that the threshold for loss of tumor suppressor activity, in terms of the disruption of p53’s tetrameric structure, could be extremely low. Furthermore, functional control of p53 via tetramer formation was demonstrated, based on the structure–function analysis of mutant p53. The results disclosed that relatively small changes in tetramer formation, induced by the stabilization or inhibition of homo-tetramerization, could control p53 function."

"ABSTRAKRuang lingkup dan Cara penelitian :Pemberian interleukin-2 (IL-2) pada sel killer tidak selalu menghasilkan peningkatan daya sitotoksiknya terhadap sel tumor. Keberhasilan aktivasi IL-2 in vitro sangat dipengaruhi oleh sifat intrinsik balk sel killer sebagai sel efektor imunologik maupun sel tumor sebagai sel sasaran. Untuk melihat pengaruh beberapa faktor seperti pengayaan limfosit T, asal sel efektor dan perbedaan sifat genetik yang terkait pada sal killer akibat pemberian IL-2, pada penelitian ini digunakan 2 strain mencit yaitu C3H dan GR sebagai sumber limfosit dan sel tumor kelenjar susu, baik dalam kombinasi sigenik maupun alogenik.Efektor imun yang dipakai berasal dari limpa dan kelenjar getah bening (KGB) mencit normal dan bertumor baik terlebih dahulu mengalami pengayaan limfosit T dengan nylon-wool maupun tidak sebelum mengalami aktivasi dengan rIL-2. Aktivasi limfosit dengan IL-2 rekombinan (rIL-2) dilakukan dengan menambahkan 250 UI/ml, 1000 UI/ml, 1500 UI/ml rIL-2 pada kultur sel efektor dan diinkubasi dalam inkubator CO2 selama 72 jam.Sedangkan sel sasaran yang dipakai dalam kombinasi singenik dan alogenik untuk menguji daya sitotoksik sel killer, berupa biakan in vitro sel tumor kelenjar susu. Pengukuran daya sitotoksik dilakukan dengan menghitung persentase sel hidup dari sekurang-kurangnya 200 sel menggunakan pewarna eksklusi trypan blue. Daya sitotoksik absolut merupakan perbandingan antara selisih persentase sel hidup dalam mikrowell kontrol dan mikrowell sampei dengan persentase sel hidup dalam mikrowell kontrol, sedangkan daya sitotoksik relatif merupakan perbandingan antara selisih persentase sel sasaran hidup pada efektor mencit normal dan bertumor dengan persentase sel sasaran hidup pada efektor mencit normal. Hasil dan kesimpulan:Daya sitotoksik sel killer teraktivasi rIL-2 berasal dari organ limpa berbeda bermakna dengan efektor berasal dari kelenjar getah bening. Dengan menggunakan sel sasaran singenik, daya sitotoksik efektor berasal dari kelenjar getah bening mencit C3H yang tidak mengalami pengayaan, lebih tinggi dibandingkan efektor berasal dari limpa. Pada mencit GR terjadi sebaliknya, dengan kondisi yang sama, efektor berasal dari KGB lebih rendah daya sitotoksiknya dibandingkan efektor berasal dari limpa. Sedangkan daya sitotoksik, efektor berasal dari KGB terhadap sel sasaran alogenik tetap lebih tinggi dibandingkan efektor berasal dari limpa pada mencit C3H, dan hampir sama pada mencit GR.Pengayaan limfosit T, tidak menunjukkan pengaruh terhadap daya sitotoksik sel killer baik berasal dari limpa maupun KGB mencit C3H kecuali daya sitotoksik efektor berasal dari KGB terhadap sel sasaran alogenik. Sebaliknya pada efektor berasal dari mencit GR, pengayaan limfosit T berpengaruh baik terhadap sel sasaran singenik maupun alogenik.Penelitian ini juga menunjukkan pengaruh rIL-2 terhadap daya sitotoksik sel killer yang tinggi, umumnya dicapai dengan dosis pemberian 1000 UI/ml dengan pengujian FJT 2511 dan 50/1. Pemberian rIL-2 dengan dosis 250 UI/ml dan 1500 UI/ml juga dapat meningkatkan daya sitotoksik sel killer baik efektor berasal dari limpa maupun KGB mencit C3H dan GR terhadap sel sasaran singenik dan alogenik.

---

ABSTRACT

Analysis Of Interleukin-2 Activated Killer Cells Cytotoxicity Of C3H And Gr Mice Against Syngenic and Allogenic Mice Mammary Tumor CellsScope and methods of study: Interleukin-2 (IL-2) treatment on killer cells has not always result in increased cytotoxicity against tumor cells. The result of IL-2 in vitro activation is influenced by an intrinsic factor, both the killer cells as immunological effector and the tumor cells as target cells. In order to analyze the effect of several factors namely T lymphocytes enrichment, the origin of effector cells and the major histocompatibility complex (MHC) restriction, in this study we use two strains of mice, C3H and GR as the source of effector cells and mammary tumor cells, both in syngenic and allogenic combination.

The immune effector used were both spleen cells and lymph node cells derived from normal and tumor-bearing mice, with or without T lymphocytes enrichment through nylon-wool column, prior activation by recombinant IL-2 (A-2). Lymphocytes were activated by 250, 1000 and 1500 IU/ml rIL-2 for 72 hours in CO2 incubator.

In vitro culture of mammary tumor cells were used as target cells for testing the killer cells cytotoxicity both in syngenic and allogenic combination. The cytotoxicity was assesed by counting the reduction of living cells enumerated from at least 200 cells using trypan blue exclusion method. The absolute cytotoxicity was determined by the ratio between the difference of the percentage of living target cells in control and sample with percentage of living target cells in control. While the relative cytotoxicity was determined by the ratio between the difference the percentage living target cells in normal and tumor-bearing mice effector cells with the percentage of living target cells in normal mice effector cells.

Result and conclusion: The cytotoxicity of IL-2 activated killer cells derived from spleen showed a significant difference from the killer cells derived from lymph node. The cytotoxicity against singenic target cells of C3H mice effector derived from lymph node without T lymphocytes enrichment was higher than the effector derived from the spleen. In contrast, the cytotoxicity of effector cells derived from GR mice lymph node showed a lower cytotoxicity than effector cells derived from the spleen. While the cytotoxicity against allogenic combinations, effector derived from the lymph node remained higher as compared to the effector derived from the spleen of C3H mice, almost similar with the GR mice.

T lymphocytes enrichment did not influence the cytotoxicity of killer cells both derived from spleen and lymph node against allogenic target cells. On the other hand, T lymphocytes enrichment of effector derived from GR mice caused elevation of the cytotoxicity both in syngenic or allogenic combination.

This study also showed the effect of IL-2 in increasing the cytotoxicity of killer cells, which was usually achieved by the 1000 IU/ml dosage in E/T 25/1 and 50/1 ratio. However the 250 and 1500 IU/ml dosage also showed the effect of IL-2 in increasing the cytotoxicity of killer cells derived from spleen or lymph node of C3H and GR mice against both syngenic and allogenic target cells."

"Latar BelakangKarsinoma Hepatoseluler (KSH) merupakan kanker yang umum terjadi dengan angka kejadian tinggi. Sel Natural Killer (NK) memiliki kemampuan sitotoksisitas terhadap sel kanker, namun efektivitasnya dapat dipengaruhi oleh eksosom. Eksosom dari serum sehat diduga mampu meningkatkan aktivitas sitotoksisitas sel NK. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis sitotoksisitas sel HepG2 oleh sel NK yang diinduksi eksosom serum sehat.MetodePenelitian ini merupakan studi in vitro menggunakan flow cytometry untuk menganalisis persentase sitotoksisitas HepG2 oleh sel NK yang diinduksi eksosom serum sehat. Tiga kelompok perlakuan diuji, yaitu NK tanpa induksi, NK diinduksi eksosom, dan NK diinduksi IL-2. Setiap kelompok perlakuan memiliki 1 kelompok data yang terdiri dari 8 well (n = 24). Analisis data menggunakan GraphPad Prism, menggunakan uji Normalitas dan homogenitas, uji One-Way Anova, dan uji t-test untuk melihat signifikansi setiap kelompok uji.HasilHasil persentase rata-rata sitotoksisitas HepG2 oleh sel NK yang diinduksi eksosom serum sehat adalah 14,6% ± 1,1%. Persentase sitotoksisitas kelompok kontrol induksi adalah 14% ± 1,7%. Tidak terdapat peningkatan persentase sitotoksisitas HepG2 oleh sel NK yang diinduksi eksosom serum sehat. Perbandingan rerata sitotoksisitas HepG2 antar kedua kelompok tidak signifikan secara statistik (P > 0,05)KesimpulanTidak terdapat peningkatan signifikan dalam sitotoksisitas sel NK terhadap sel HepG2 yang diinduksi oleh eksosom serum sehat dibandingkan dengan kontrol tanpa induksi.

---

Introduction

Hepatocellular Carcinoma (HCC) is a commonly cancer with a high incidence rate. Natural killer cells have the ability to kill cancer cells, but their affectiveness may be affected by exosome. Exosomes from healthy serum have the potential to increase the cytotoxicity of NK cells. This study aims to analyze the cytotoxic effect of HepG2 cells by Natural Killer (NK) induced by healthy serum.

Method

This study is an in vitro investigation utilizing flow cytometry to analyze the percentage of cytotoxicity of HepG2 cells by Natural Killer (NK) cells induced by healthy serum exosomes. Three experimental groups were evaluated: NK cells without induction, NK cells induced by exosomes, and NK cells induced by IL-2. Each experimental group consisted of one dataset comprising 8 wells (n = 24). Data analysis was performed using GraphPad Prism, which included normatily and homogeneity tests, One-Way ANOVA, and t-tests to assess the significance of differences among the experimental groups. Results

The average percentage of cytotoxicity of HepG2 cells by NK cell induced by healthy serum exosome was 14,6% ± 1,1%. The percentage of cytotoxicity in the control group was 14% ± 1,7%. There was no increase in percentage of cytotoxicity HepG2 cells by NK cell induced by healthy serum exosome. Comparisone between mean of the two groups was not statistically significant (P > 0,05)

Conclusion

There was no significant increase in the cytotoxicity of NK cells agains HepG2 cells induced by healthy serum exosome compared to the non-induced control group."

"Sel Natural Killer (NK) adalah sel pelepas granul sitotoksik yang melisis patogen intracytoplasmic (yaitu infeksi virus atau bakteri) dan sel tumor/kanker sebagai bagian dari imunitas bawaan. Sel NK berasal dari diferensiasi sel punca hematopoietik (SPH) di jalur Common Lymphoid Progenitor (CLP). SPH diperoleh dari darah tali pusat, dengan jumlah SPH yang lebih tinggi daripada sumsum tulang. Berbagai protokol diferensiasi telah dilaporkan dengan jumlah sel NK dan fenotipe yang berbeda. Studi perbandingan efektivitas diferensiasi sel NK dengan sampel SPH yang dikultur dan SPH yang baru diisolasi masih minim. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan tahapan maturasi diferensiasi sel NK yang dihasilkan antara sampel SPH yang dikultur dan baru diisolasi menggunakan modifikasi protokol Dezell dkk. dengan menggunakan interleukin-2 (IL-2) tanpa keberadaan feeder cell. Kultur SPH dilakukan selama dua minggu sebelum diferensiasi untuk sampel SPH yang dikultur. Hasil kultur diferensiasi selama lima minggu dianalisis menggunakan flow cytometry untuk mengetahui keberadaan reseptor NKp46, pengamatan Giemsa untuk mengetahui tahapan maturasi sel NK, dan qRT-PCR untuk mengetahui ekspresi gen perforin dan granzyme B. Hasil penelitian menunjukkan bahwa sampel SPH yang dikultur menghasilkan jumlah sel NK di tahap dewasa (tahap 5) yang lebih tinggi dibandingkan sampel SPH yang diisolasi melalui pengamatan Giemsa. Hasil flow cytometry menunjukkan nilai MFI NKp46 yang berbeda signifikan pada kedua sampel, dengan keberadaan reseptor aktivasi NKp46 yang lebih tinggi dijumpai pada sampel isolasi di hari ke-35. Hal ini disebabkan oleh aktivitas ROS pada kultur SPH dan regulasi mikroRNA. Oleh karena itu, sampel SPH yang dikultur dan sampel SPH yang baru diisolasi mampu menghasilkan populasi sel NK yang dewasa.

---

Natural Killer (NK) cells are cytotoxic-granule-releasing cells which lysis intracytoplasmic pathogens (ie. virus or bacteria infection) and tumor/ cancer cells as part of innate immunity. NK cells originate from differentiation of hematopoietic stem cells (HSCs) in the Common Lymphoid Progenitor (CLP) pathway. HSCs can be obtained from umbilical cord blood, with a higher number of HSCs than bone marrow. Various differentiation protocols have been reported with different NK cell yields and phenotypes obtained. Comparative studies on the effectiveness of NK cell differentiation with cultured HSC samples and freshly isolated HSC are still minimal. The aim of this study was to compare the different stages of NK cell differentiation maturation produced between cultured and newly isolated SPH samples using a modified protocol of Dezell et al. using interleukin-2 (IL-2) in the absence of feeder cells. For expanded HSC samples, cultures were carried out for two weeks before differentiation. The results of the differentiation culture for five weeks were then analyzed using flow cytometry to determine the presence of NKp46 receptors, Giemsa observations to determine the stages of NK cell maturation, and qRT-PCR to determine the expression of perforin and granzyme B genes. The results show that cultured HSC samples can produce a higher number of NK cells with a more mature stage than freshly isolated HSC samples by Giemsa's observations which showed the presence of NK cells at stages 5. The results of flow cytometry showed that the MFI NKp46 values ​​were significantly different in the two samples, with a higher NKp46 activation receptor found in the isolated samples on day 35. This is due to ROS activity on SPH culture and microRNA regulation. Therefore, the cultured HSC samples and freshly isolated HSC samples were able to produce mature NK cell populations."

"Diagnosis kanker ovarium stadium lanjut memberikan kontribusi terbesar terhadap tingginya kasus kematian. Imunoterapi sebagai alternatif pengobatan diharapkan dapat mengobati pasien dengan kanker ovarium secara lebih cepat menggunakan sel imun bawaan yang dapat membunuh sel kanker secara permanen. Studi imunoterapi pada penelitian ini dilakukan dengan memanfaatkan interaksi antara ligan di dalam lingkungan mikro tumor dan reseptor sel NK. Reseptor NKP44 merupakan satu-satunya reseptor dengan dua mekanisme persinyalan berbeda yang secara aktif berperan penting dalam fungsi sel NK teraktivasi. Salah satu ligan potensial yang dapat meningkatkan fungsi pengenalan sel tumor melalui reseptor NKP44 adalah Nidogen-1 (NID1). Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan studi imunoterapi pasien dengan kanker ovarium serta mempelajari pengaruh interaksi ligan NID1 dengan reseptor NKP44 terhadap aktivitas sel NK. Metode penelitian yang dilakukan mencakup analisis ekspresi granul sitotoksik, analisis ekspresi NID1, uji keberhasilan ikatan ligan NID1 dengan sel NK, hingga analisis ekspresi NKP44. Hasil menunjukkan bahwa kelompok sel NK terinduksi memiliki aktivitas sitotoksik yang lebih baik dibandingkan kelompok sel NK tidak terinduksi melalui peningkatan ekspresi granul sitotoksik. Terdapat ekspresi NID1 meskipun dalam jumlah yang sedikit dan terkonfirmasi berhasil berikatan dengan sel NK. Namun, terjadi penurunan ekspresi NKP44 pada kelompok sel NK terinduksi sehingga perlu dilakukan analisis lanjutan penyebab penurunan ekspresi NKP44.

---

Diagnosis of advanced ovarian cancer provides the largest contribution to the high number of deaths. Immunotherapy as an alternative treatment is expected to treat patients with ovarian cancer more quickly using innate immune cells that can permanently kill cancer cells. The development of immunotherapy in this study was carried out by utilizing the interaction between ligands in the tumor microenvironment and NK cell receptors. NKP44 is the only receptor with two different signaling mechanisms that actively play the most important role in the function of activated NK cells. One of the potential ligands that can improve tumor cell recognition function through the NKP44 receptor is Nidogen-1 (NID1). This research is aimed to develop immunotherapy studies for patients with ovarian cancer and to study the effect of the interaction of the NID1 ligand with the NKP44 receptor on NK cell activity. The research methods carried out included analysis of cytotoxic granule expression, analysis of NID1 expression, success test of NID1 ligand bonding with NK cells, and NKP44 expression analysis. The results showed that the induced NK cell group had better cytotoxic activity than the uninduced NK cell group through increased cytotoxic granule expression. There is expression of NID1 even in small numbers and it is confirmed that it binds successfully to NK cells. However, there was a decrease in the expression of NKP44 in the induced NK cell group so that further analysis needs to be carried out on the causes of the decrease in NKP44 expression."

"Kanker ovarium adalah salah satu jenis kanker dengan angka kematian tinggi bila dibandingkan dengan kanker organ reproduksi wanita lainnya. Imunoterapi menggunakan sel natural killer (NK) merupakan alternatif pengobatan terapi kanker ovarium. Akan tetapi keberhasilan penggunaan sel NK terbatas pada kanker hematologis dikarenakan lingkungan mikro tumor kanker ovarium melemahkan kinerja sel NK. Halyang dapat dilakukan adalah menginduksi sel NK kanker ovarium dengan lisat hasil ultrasentrifugasi jaringan ovarium. Penelitian ini bertujuan menganalisis pengaruhinduksi lisat hasil ultrasentrifugasi jaringan ovarium terhadap sitotoksisitas sel NK kanker ovarium terhadap sel kanker ovarium manusia (SKOV-3) serta marka fenotipe (CD56+CD3-), reseptor aktivasi (NKp46, NKp30, NKp44, dan NKG2D), dan inhibisi (NKG2A dan KIR2D) sel NK. Sel NK diisolasi dari sampel darah perifer enam pasien kanker ovarium kemudian sel NK diinduksi oleh lisat hasil ultrasentrifugasi jaringan ovarium selama 24 jam. Sel NK yang telah diinduksi kemudian dikokultur dengan SKOV-3 selama 24 jam dan dianalis dengan flow cytometry. Hasil flow cytometry sel NK yang diinduksi dengan pelet menunjukkan kenaikan pada ekspresi marka fenotipe CD56, reseptor aktivasi NKp46, NKp30, NKG2D, dan reseptor inhibisi KIR2D dan penurunan pada ekspresi marka fenotipe CD3, reseptor aktivasi NKp44, dan reseptor inhibisi NKG2A dibandingkan dengan sel NK tanpa induksi dan yang diinduksi IL-2. Hasil analisis flow cytometry uji sitotoksisitas sel NK yang diinduksi dengan pelet menunjukkan peningkatan kematian SKOV-3 hingga 45,3% dari 4,82% di sel NK tanpa induksi. Hal tersebut menunjukkan bahwa induksi lisat hasil ultrasentrifugasi jaringan ovarium memengaruhi ekspresi marka fenotipe, reseptor aktivasi, reseptor inhibisi pada sel NK, juga meningkatkan kemampuan sitotoksisitas sel NK.

---

Ovarian cancer is considered to have a high death rate on women among other types of gynecologic cancer. Imunotherapy using natural killer (NK) cells can be used to treat ovarian cancer. However, positive results on NK cells usage on hematologic cancer are limited due to the microtumor environment weakened the function of NK cells. The solution to this problem is to induce cancer ovarium NK cells with ultracentrifuged ovarian tissue lysate. This study was conducted to analyze the effect of ultracentrifuged ovarian tissue lysate induction towards human ovarian cancer NK cells’ cytotoxicity on human cancer cell line, SKOV-3 also its phenotype marker (CD56+CD3-), activating receptors (NKp46, NKp30, NKp44 dan NKG2D), and inhibitory receptors (NKG2A dan KIR2D). NK cells were isolated from six ovarian cancer patients’ peripheral blood then inducted with ultracentrifuged ovarian tissue lysate for 24 hours. Inducted NK cells then

cocultured with SKOV-3 for another 24 hours then analyzed with flow cytometry. Flow cytometry’s result showed that ultracentrifuged ovarian tissue lysate induction increases

NK cell phenotype marker CD56, activating receptors NKp46, NKp30, NKG2D, and inhibitory receptors KIR2D expression and decrease phenotype marker CD3, activating receptor NKp44, and inhibitory receptor NKG2A expression. It is also showed that the stimulation increases ovarian cancer’s NK cells cytotocicty compared to unstimulated NK

cells (45,3% from 4,82%). Therefore, the results showed that peptide stimulation affect the expression of NK cells’ phenotype and receptors also increases NK cells’ cytotoxicity."