Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"ABSTRACTThe population of Pterois volitans, has caused significant damage to other fish populations and coral reef ecosystems. Population control of Pterois volitans consumes a considerable cost so that the utilization of these fish needs to be sought so as to be useful along with controlling the population. This fish is known to contain the enzyme phospholipase A2 which can be used as an antibiotic against some bacteria. This study will examine the antibacterial activity of the phospholipase A2 enzyme extracted from Pterois volitans venom to Escherichia coli, Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus bacteria. The method used to isolate the enzyme phospholipase A2 is by using precipitation of ammonium sulfate and precipitation with ethanol. The results of the precipitation will be tested by the Lowry protein concentration test, the Marinetti A2 phospholipase activity test and the identification of the SDS PAGE protein. Agar diffusion disc method is used to test the antibacterial activity. The results obtained from this research is 80 ammonium sulphate precipitation method has the highest protein and enzyme activity with ratio 1.32 times compared to toxic extract. For antibacterial activity test results, an 80 ammonium sulphate sample may inhibit the activity of Staphylococcus aureus bacteria but has no effect on Bacillus subtilis and Escherichia coli.

---

ABSTRACTPopulasi Pterois volitans, telah menyebabkan sejumlah kerusakan besar kepada populasi ikan lain dan ekosistem terumbu karang. Kontrol populasi dari Pterois volitans memakan cost yang tidak sedikit sehingga pemanfaatan dari ikan ini perlu dicari sehingga dapat bermanfaat bersamaan dengan mengontrol populasinya. Ikan ini diketahui memiliki kandungan enzim phospholipase A2 yang dapat dimanfaatkan sebagai antibiotik terhadap beberapa bakteri. Penelitian ini akan menguji aktivitas antibakteri dari enzim phospholipase A2 yang di ekstraksi dari racun duri ikan lepu ayam kepada bakteri Escherichia coli, Bacillus subtilis dan Staphylococcus aureus. Metode yang digunakan untuk mengisolasi enzim phospholipase A2 adalah dengan menggunakan presipitasi ammonium sulfat dan presipitasi dengan etanol. Hasil dari presipitasi akan diuji dengan uji konsentrasi protein Lowry, uji aktivitas phospholipase A2 Marinetti dan identifikasi protein SDS-PAGE. Untuk uji aktivitas antibakteri sendiri menggunakan metode agar disc diffusion. Hasil yang didapat dari penelitian ini adalah metode presipitasi ammonium sulfat 80 memiliki kandungan protein dan aktivitas enzim tertinggi dengan perbandingan 1.32 kali lipat dibanding ekstrak racun. Untuk hasil uji aktivitas antibakteri, sampel ammonium sulfate 80 dapat menghambat aktivitas bakteri Staphylococcus aureus tetapi tidak memiliki efek apapun terhadapa Bacillus subtilis dan Escherichia coli."

"Kanker paru merupakan kanker nomor satu yang paling banyak diderita kaum laki-laki di Indonesia yang umumnya disebabkan oleh rokok dengan penyebaran melalui pembuluh getah bening atau organ lain dalam tubuh. Penanganan kanker paru secara modern menggunakan terapi umum seperti radioterapi dan kemoterapi sering menyebabkan beberapa resiko efek samping. Penggunaan obat yang berasal dari racun ikan dapat digunakan sebagai alternatif dari terapi umum. Beberapa studi menyatakan bahwa racun ikan lepu batu (Synanceia horrida) memiliki komponen bioaktif stonustoxin (SNTX) yang bersifat sitolitik, membentuk pori dan mempunyai potensi sebagai zat antikanker. Racun ikan lepu batu dipanen dengan menggunakan metode milking, setelah itu purifikasi dengan menggunakan FPLC. Selanjutnya dilakukan uji kemurnian dengan SDS PAGE, pengujian kadar protein pada hasil pemurnian guna mendapatkan konsentrasi protein dengan metode Lowry, uji toksisitas dengan metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) dan terakhir MTT Assay terhadap sel A549. Diperoleh hasil bahwa stonustoxin (SNTX) yang berasal dari racun ikan lepu batu (Synanceia horrida) berhasil diisolasi dengan menggunakan FPLC penukar anion pada persentase buffer elusi 40% dan dapat menginhibisi sel kanker paru A549 dengan persentase inhibisi sebesar 67,31% pada konsentrasi 64 ppm. Stonustoxin yang diisolasi dengan FPLC penukar anion memiliki nilai LC50 sebesar 18,150 dan IC50 sebesar 45,076 µg/ml.

---

Lung cancer is the most common type of cancer that affects men in Indonesia that is generally caused by smoking and spreading throuht lymph nodes or other organs in the body. Modern treatment of lung cancer using therapies such as radiotherapy and chemotherapy often causes several side effects. The use of medicines from fish venoms can be used as an alternative to general therapy. Some studies state that stonefish (Synanceia horrida) venom contain bioactive component Stonustoxin (SNTX) which has cycolytic properties, pore forming and as an anti lung cancer potentital. Crude venom will be taken using milking method and after that purified by FPLC. Furthermore, protein purity test with SDS PAGE , testing of proteins concentration in the purification results with Lowry method and continued with toxicity test with BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) method, and finally MTT Assay on A549 cell. Based on the result of the research, stonuxtoxin (SNTX) derived from stonefish (Synanceia horrida) venom successfully isolated using FPLC anion exchange method with elution buffer percentage 40% and can inhibit A549 lung cancer cells with inhibition percentage of 67,31% at 64 ppm. Stonustoxin isolated with FPLC anion exchange has LC50 at 18,150 ppm and IC50 at 45,076 µg/ml."

"ABSTRACTPterois volitans, atau yang biasa disebut dengan lionfish, merupakan spesies ikan yang berasal dari perairan Indo-Pasifik namun menjadi invasif di peraian lain seperti Karibia dan Atlantis. Berbagai macam upaya pengurangan jumlah lionfish saat ini telah dilakukan dan salah satunya adalah dengan memanfaatkan racun yang ada pada durinya. Ekstraksi racun dari duri P. volitans dilakukan secara mekanik menggunakan sonikasi dan sentrifugasi kemudian isolasi protein dilakukan dengan menggunakan garam. Aktivitas koagulan dari ekstrak crude venom dan isolat protein racun lionfish dilakukan dengan menghitung prothrombin time dan activated partial thromboplastin time-nya yang menghasilkan bahwa crude venom dan isolat protein dari lionfish dapat mempercepat pembekuan darah prokoagulan masing-masing hingga 8,5 detik dan 6 detik. Identifikasi protein yang berperan pada aktivitas tersebut dimulai dengan pemisahan protein menggunakan SDS-PAGE, dimana diperoleh rentang berat molekul protein yang terkandung dalam crude venom dan isolat proteinnya masing- masing ialah 35,8 sampai 210 kD dan 6 sampai 210 kD. Kemudian analisis dengan menggunakan perangkat LC-MS/MS dilakukan. Analisis LC-MS/MS menunjukkan bahwa isolat protein dari racun lionfish mengandung senyawa Nomega-Nitro-L-arginine methyl ester L-NAME yang diketahui memiliki efek prokoagulan. Dari serangkaian pengujian tersebut dapat disimpulkan bahwa racun P volitans memiliki aktivitas prokoagulan dan salah satu senyawa yang bertanggung jawab atas hal tersebut ialah L-NAME.

---

ABSTRACTPterois volitans, or commonly referred to as lionfish, are fish species originating from Indo Pacific waters but are becoming invasive in other regions such as the Caribbean and Atlantis. Various efforts to reduce the number of lionfish has now been done and one of them is by exploiting the existing poison on the spine. The venom extraction of P. volitans spines is done mechanically using sonication and centrifugation and then protein isolation is carried out using salt. Coagulant activity from extract crude venom and lionfish venom protein isolate was done by counting PT prothrombin time and aPTT activated partial thromboplastin time which resulted that the crude venom and protein isolate of lionfish venom can accelerate blood clot procoagulant respectively up to 8.5 seconds and 6 seconds. Identification of proteins that play a role in the activity begins with the separation of proteins using SDS PAGE, which obtained the weight range of protein molecules stacked in the crude venom and protein isolate are 35.8 to 210 kD and 6 to 210 kD, respectively. Then the analysis using LC MS MS device is done. The LC MS MS analysis showed that the protein isolate of lionfish venom contains Nomega Nitro L arginine methyl ester L NAME compounds known to have procoagulant effects. From a series of tests mentioned, it can be concluded that P volitans venom have procoagulant activity and one of the compounds responsible for it is L NAME."

"ABSTRACTIkan lepu ayam Pterois volitans yang lebih dikenal dengan lionfish merupakan ikan tropis asli dari perairan Indo-Pasifik yang bersifat invasif terhadap ekosistem laut karena pertumbuhannya yang cepat dan sbersifat predator, sehingga menurunkan populasi ikan dan karang di perairan. Saat ini antioksidan alami dari sumber biota laut telah banyak dikembangkan sebagai pencegah penyakit kanker dan kardiovaskular. Crude Venom CV diekstraksi menggunakan metode sonikasi dan diendapkan menggunakan etanol dan Amonium Sulfat AS dengan saturasi 20, 40, 60, dan 80. Konsentrasi protein dari masing-masing sampel dideteksi menggunakan metode Lowry dan untuk mengetahui berat molekul protein menggunakan SDS-PAGE. Analisis toksisitas dilakukan untuk menentukan nilai Lethal Concentration LC50 dengan metode Brine Shrimp Lethality Test BSLT dan aktivitas antioksidan diuji menggunakan metode 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil DPPH untuk menentukan nilai Inhibitor Concentration IC50. AS 80 memiliki nilai konsentrasi protein yang paling tinggi 361,76 ppm. Hasil uji menunjukkan nilai LC50 AS 80 101,93 ppm. Analisis antioksidan menunjukkan AS 80 memiliki nilai penghambatan lebih tinggi 57,08 dengan IC50 1,56 mg/mL. Analisis SDS-PAGE menunjukkan bahwa AS 80 memiliki pita protein pada 7,9 , 46,2 dan 52,7 kD yang memiliki potensi sebagai antioksidan. Penelitian ini menunjukkan bahwa AS 80 memiliki potensi tertinggi sebagai senyawa antioksidan karena kemampuannya untuk menghambat radikal bebas.

---

ABSTRACTLionfish Pterois volitans is a native tropical fish from Indo Pacific Ocean and has invaded on marine ecosystem due to its rapid growth and predatory properties that highly affecting fish and coral populations. Recent studies shows the importance of natural antioxidants especially in the prevention of cancer and cardiovascular disease. Crude Venom CV was extracted using sonicator and precipitated using ethanol and Ammonium Sulfate AS with 20, 40, 60, and 80 saturation. Protein concentration of each samples detected using Lowrys method and SDS PAGE was done to find out the Molecular Weight MW of protein samples. Toxicity analysis to determine Lethal Concentration LC50 value was done using Brine Shrimp Lethality Test BSLT and antioxidant activity tested using 2,2 diphenyl 1 picrylhydrazyl DPPH method to determined Inhibitor Concentration IC50 value. AS 80 had the higher value of protein concentration 361,76 ppm. SDS PAGE analysis showed that AS 80 had protein band at 7,9, 46,2 and 52,7 kD which supposed to be protein that had antioxidant activity. The test showed the LC50 of AS 80 101,93 ppm. Antioxidant analysis showed AS 80 had the higher value of inhibition 57,08 with IC50 1,56 mg mL. This research showed that AS 80 has the highest potential as an antioxidant compound due to its ability to inhibit free radicals. "

"ABSTRAKLionfish (Pterois volitans) merupakan spesies asli ikan di samudra Indonesia-Pasifik. Spesies ini Lionfish (Pterois volitans) merupakan spesies invasive yang berasal dari perairan Indo-Pasifik. Pertumbuhan yang cepat serta ketiadaan predator menjadikan keberadaan Lionfish terus berkembang pesat. Selain itu sifat alamiahya sebagai predator membuat populasi ikan dan karang di perairan menurun drastis serta merugikan daerah yang terkena invasifnya baik secara ekonomi maupun ekosistem. Oleh karenanya, penelitian terakit spesies invafis Lionfish harus terus digencarkan untuk mendapatkan kebermanfaatan dari hewan tersebut. Studi yang pernah ada menyatakan bahwa ekstrak racun duri lionfish memiliki potensi untuk menjadi zat antikanker serviks. Untuk mengetahui potensi tersebut, crude venom yang dihasilkan dari ekstraksi racun duri Lionfish akan dilakukan pemanasan dengan durasi temperartur yang berbeda untuk mendapatkan kemurnian yang optimal, selanjutnya dilakukan purifikasi dengan pengendapan ammonium sulfat, kemudian dianalisis Uji Lowry untuk mendapatkan konsentrasi protein optimal serta dilakukan uji toksisitas dengan BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) dan MTT Assay terhadap sel HeLa. Tahap terakhir adalah identifikasi kemurnian protein dengan SDS PAGE. Pada penelitian ini didapatkan persentase inhibisi antikanker serviks yang diujikan dengan sel HeLa menunjukkan ekstrak racun lionfish pada konsentrasi 750 ppm yang diujikan dengan variabel suhu pemanasan crude venom 70 derajat C dengan saturasi ammonium sulfat 80 persen berpotensi menginhibisi aktivitas antikanker sebesar 37.79 persen. Hasil ini menunjukkan bahwa crude venom yang telah melalui proses pemurnian dengan merode pemanasan adalah metode yang efektif untuk meningkatkan kemurnian hasil ekstrak crude venom lionfish yang dapat digunakan sebagai antikanker serviks.

---

ABSTRACTLionfish (Pterois volitans) is an invasive species from Indo-Pacific ocean. The rapid growth and lack of predators have made Lionfishs presence grow rapidly. Besides that, lionfish as a predator makes the population of small fish and coral in the waters drop dramatically and cause the negative effect for economic and ecosystem. Therefore, the study of the Lionfish must be intensified to obtain the usefulness of these animals. The previous studies about lionfish explain that the extract of lionfish venom spines has the potential to become an anticancer agent of the cervix. To find out these potential, the crude venom produced from extraction of Lionfish thorn poison will be warmed up with different temperature and has purified by precipitation of ammonium sulfate to obtain optimal purity. The concentration were analyzed by Lowry Test method and to analyzed toxicity identification were used BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) and MTT Assay Method. And the last step, to identify of protein were used SDS PAGE method.. The percentage of anticancer inhibition of cervix tested with HeLa cells showed that the extract of lionfish venom at a concentration of 750 ppm was tested with a variable heating temperature of 70 derajat C and presipitation of 80 persen ammonium sulfate saturation potentially inhibiting anticancer activity around 37.79 persen. These results indicate that crude venom that has undergone a purification process by heating method is an effective method for increasing the purity of the crude venom lionfish extract that can be used as an anticancer cervix."

"Bakteriosin adalah peptida hasil produksi bakteri yang saat ini banyak diteliti karena aktivitasnya yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Resistensi terhadap antibiotik yang semakin nyata menyebabkan bakteriosin dianggap cocok menjadi salah satu kandidat API (active pharmaceutical ingredients) yang dapat dimanfaatkan sebagai komplemen antibiotik. Salah satu bakteri yang memproduksi peptida bakteriosin adalah S. macedonicus MBF10-2 yang menghasilkan senyawa bakteriosin lantibiotik dan non-lantibiotik. Tujuan penelitian ini adalah memperoleh cara fraksinasi dan fraksi peptida bakteriosin dari S. macedonicus MBF10-2 yang aktivitasnya optimal dengan metode centrifugal filtration dan presipitasi amonium sulfat, serta profil metabolit umumnya. Konfirmasi cara fraksinasi dengan aktivitas optimal dilakukan dengan uji hambat. Profil komposisi metabolit ekstrak kasar dianalisis dengan LC-ESI-QTOF-MS/MS. Cara fraksinasi yang optimal adalah dengan centrifugal filtration. Hasilnya menunjukkan bahwa fraksi ≥ 30kDa dan ≥ 3kDa mengandung peptida bakteriosin yang memberikan penghambatan paling kuat terhadap Leuconostoc mesenteroides TISTR120, namun tidak memberikan penghambatan yang kuat terhadap Micrococcus luteus T18. Analisis metabolit ekstraseluler tak tertarget dari ekstrak kasar memberikan hasil profil kombinasi fragmen asam amino, serta adanya kandungan asam laktat dan malat yang sesuai dengan prediksi hasil metabolit bakteri asam laktat pada umumnya. Analisis metabolit ekstraseluler perlu dilakukan konfirmasi dengan analisis metabolit ekstraseluler tertarget untuk menghasilkan profil yang lebih komprehensif terhadap bakteri S. macedonicus MBF10-2.

---

Bacteriocins are peptides produced by bacteria that are being developed because of their activities that can inhibit the growth of bacteria. Resistance to antibiotics that is increasingly real causes bacteriocins to be considered suitable to be one of the API (active pharmaceutical ingredients) candidates that can be used as an antibiotic complement. One of the bacteria that produces bacteriocin peptides is S. macedonicus MBF10-2 which produces lantibiotic and non-lantibiotic bacteriocin compounds. The purpose of this study is to obtain optimal fractionation and fractionation methods as well as metabolite profiles generally by centrifugal filtration and ammonium sulfate precipitation methods. Confirmation of the method of fractionation and fractionation is carried out by inhibition test. The metabolite composition profile of the crude extract was analyzed with LC-ESI-QTOF-MS/MS. Results showed that the ≥ fractions of 30kDa and ≥ 3kDa contained bacteriocin peptides that inhibit Leuconostoc mesenteroides TISTR120 significantly whereas against Micrococcus luteus T18 does not give strong inhibition results. The results of the analysis of untargeted extracellular metabolites of crude extracts provided the results of a combination profile of amino acid fragments and detected lactic and malic acid content in accordance with the prediction of the results of metabolites of lactic acid bacteria in general. Analysis of extracellular metabolites needs to be confirmed by analysis of displaced extracellular metabolites to produce a more comprehensive profile against S. macedonicus MBF10-2 bacteria."

"Bakteriosin adalah peptida hasil produksi bakteri yang saat ini banyak diteliti karena aktivitasnya yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Resistensi terhadap antibiotik yang semakin nyata menyebabkan bakteriosin dianggap cocok menjadi salah satu kandidat API (active pharmaceutical ingredients) yang dapat dimanfaatkan sebagai komplemen antibiotik. Salah satu bakteri yang memproduksi peptida bakteriosin adalah S. macedonicus MBF10-2 yang menghasilkan senyawa bakteriosin lantibiotik dan non-lantibiotik. Tujuan penelitian ini adalah memperoleh cara fraksinasi dan fraksi peptida bakteriosin dari S. macedonicus MBF10-2 yang aktivitasnya optimal dengan metode centrifugal filtration dan presipitasi amonium sulfat, serta profil metabolit umumnya. Konfirmasi cara fraksinasi dengan aktivitas optimal dilakukan dengan uji hambat. Profil komposisi metabolit ekstrak kasar dianalisis dengan LC-ESI-QTOF-MS/MS. Cara fraksinasi yang optimal adalah dengan centrifugal filtration. Hasilnya menunjukkan bahwa fraksi ≥ 30kDa dan ≥ 3kDa mengandung peptida bakteriosin yang memberikan penghambatan paling kuat terhadap Leuconostoc mesenteroides TISTR120, namun tidak memberikan penghambatan yang kuat terhadap Micrococcus luteus T18. Analisis metabolit ekstraseluler tak tertarget dari ekstrak kasar memberikan hasil profil kombinasi fragmen asam amino, serta adanya kandungan asam laktat dan malat yang sesuai dengan prediksi hasil metabolit bakteri asam laktat pada umumnya. Analisis metabolit ekstraseluler perlu dilakukan konfirmasi dengan analisis metabolit ekstraseluler tertarget untuk menghasilkan profil yang lebih komprehensif terhadap bakteri S. macedonicus MBF10-2.

---

Bacteriocins are peptides produced by bacteria that are being developed because of their activities that can inhibit the growth of bacteria. Resistance to antibiotics that is increasingly real causes bacteriocins to be considered suitable to be one of the API (active pharmaceutical ingredients) candidates that can be used as an antibiotic complement. One of the bacteria that produces bacteriocin peptides is S. macedonicus MBF10-2 which produces lantibiotic and non-lantibiotic bacteriocin compounds. The purpose of this study is to obtain optimal fractionation and fractionation methods as well as metabolite profiles generally by centrifugal filtration and ammonium sulfate precipitation methods. Confirmation of the method of fractionation and fractionation is carried out by inhibition test. The metabolite composition profile of the crude extract was analyzed with LC-ESI-QTOF-MS/MS. Results showed that the ≥ fractions of 30kDa and ≥ 3kDa contained bacteriocin peptides that inhibit Leuconostoc mesenteroides TISTR120 significantly whereas against Micrococcus luteus T18 does not give strong inhibition results. The results of the analysis of untargeted extracellular metabolites of crude extracts provided the results of a combination profile of amino acid fragments and detected lactic and malic acid content in accordance with the prediction of the results of metabolites of lactic acid bacteria in general. Analysis of extracellular metabolites needs to be confirmed by analysis of displaced extracellular metabolites to produce a more comprehensive profile against S. macedonicus MBF10-2 bacteria."

"ABSTRAKResistensi antibiotik merupakan salah satu masalah kesehatan yang membuat efektivitas pencegahan dan pengobatan berbagai infeksi menjadi berkurang. Peptida antimikroba seperti bakteriosin dapat menjadi kontributor penting dalam mengatasi permasalahan resistensi antibiotik sebagai agen antimikroba baru. Weissella confusa MBF8-1 diketahui menghasilkan tiga jenis bakteriosin yaitu Bac1, Bac2, dan Bac3 dengan sekuens DNA lengkap yang telah dilaporkan (A.N KR350502). Selain diproduksi melalui ekspresi galur produsen asalnya, bakteriosin dari W. confusa MBF8-1 sudah diproduksi melalui rekayasa genetika sehingga didapat bentuk rekombinannya pada inang B. subtilis DB403 dan disintesis secara kimia. Penelitian ini bertujuan untuk mengkarakterisasi aktivitas antimikroba serta efek sinergis dengan Ampisilin dari bakteriosin rekombinan dan sintetik Bac1, Bac2, dan Bac3 menggunakan metode difusi sumur agar pada Leuconostoc mesenteroides kemudian dilanjutkan dengan uji Konsetrasi Hambat Minimum (KHM) pada L. mesenteroides, Micrococcus luteus, Lactococcus lactis, Staphylococcus aureus, dan Escherichia coli. Hasil menunjukkan peptida sintetik memberikan zona hambat pada L.mesenteroides hanya dengan keberadaan Bac1. Peptida rekombinan tidak menunjukkan adanya inhibisi pada berbagai bentuk kombinasi. Peptida sintetik memiliki efek sinergis jika dikombinasikan dengan Ampisilin terhadap lima bakteri indikator, sedangkan peptida rekombinan tidak menunjukkan adanya efek sinergis. Efek sinergis terbaik yang teramati pada uji KHM dari peptida sintetik dicapai oleh Bac1, diikuti dengan bentuk campuran Bac1, Bac2, dan Bac3 (B1,2,3).

---

ABSTRACTAntibiotic resistance is one of health problems that could decrease the effectiveness of infection treatment and prevention. Antimicrobial peptide like bacteriocin could be an important contributor to overcome antibiotic resistance as new antimicrobial agent. Weissella confusa MBF8-1 has been known to produce three types of bacteriocins, Bac1, Bac2, and Bac3, with their complete DNA sequences was reported previously (A.N KR350502). Besides produced through expression of origin producer strain, bacteriocin from W. confusa MBF8-1 has been produced through genetic engineering by recombinatorial process in B. subtilis DB403 and also by chemically synthesized. This study aimed to characterize the antimicrobial activity and the synergystic effect of those three recombinant peptides as well as their synthetic one with Ampicillin. Well-diffusion assay was performed using indicator bacteria Leuconostoc mesenteroides while Minimum Inhibitory Concentration (MIC) assay was performed using indicator bacteria L. mesenteroides, Micrococcus luteus, Lactococcus lactis, Staphylococcus aureus, and Escherichia coli. Result showed that synthetic peptides inhibited growth of L. mesenteroides when combined with Bac1. Recombinant peptides didn?t show any inhibition in various forms of combination. Synthetic peptides showed synergistic effect with Ampicilin against all indicator bacteria, while recombinant peptides showed no synergistic effect. The best synergistic effect with Ampicillin was showed by Bac1 synthetic peptide alone, followed by Bac1, Bac2, and Bac3 in combination (B1,2,3) by performing MIC test."