Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Penyakit Alzheimer adalah penyakit neurodegeneratif progresif yang menjadi penyebab utama demensia pada populasi lanjut usia. Plak Amyloid-β (Aβ) dan Neurofibrillary Tangles (NFT) merupakan karakteristik utama penyakit ini, dengan Aβ42 sebagai peptida neurotoksik yang berperan penting dalam patogenesis. Terapi berbasis human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells (hUC-MSC) memberikan harapan baru untuk pengobatan Alzheimer melalui produksi sekretom yang mengandung enzim Neprilysin (CD10) yang mampu mendegradasi Aβ42, sitokin anti-inflamasi yang mampu mengurangi peradangan, dan faktor pertumbuhan yang mampu mendorong proliferasi dan diferensiasi sel punca endogen.Penelitian ini bertujuan mengembangkan sekretom hUC-MSC yang diprekondisi untuk menghasilkan lebih banyak Neprilysin dan komponen terapeutik lainnya, seperti faktor pertumbuhan dan sitokin anti-inflamasi. Prekondisi ini dilakukan menggunakan Tumor Necrosis Factor-α (TNFα) dan/atau Interferon-γ (IFNγ). Efektivitas sekretom diuji secara in vitro menggunakan model sel saraf Alzheimer, yang dibuat dari diferensiasi sel neuroblastoma SH-SY5Y dengan Retinoic Acid menjadi sel mirip neuron dan kemudian dipapar dengan Aβ42.Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa prekondisi hUC-MSC in vitro dengan IFNg dapat menghasilkan sekretom yang mengandung lebih banyak CD10 (NEP). Namun, meskipun terjadi peningkatan ekspresi CD10 di permukaan sel, penelitian ini tidak menemukan peningkatan signifikan pada pelepasan Neprilysin terlarut (sNEP) dalam sekretom, dan ini menunjukkan bahwa diperlukan kondisi tambahan untuk memicu pelepasan CD10, seperti aktivasi Matrix Metalloproteinases (MMP) atau pengkondisian inkubasi secara hipoksia.Hasil uji viabilitas menunjukkan bahwa sekretom yang diprekondisi dengan IFNγ pada dosis 10% dan 20% memberikan hasil peningkatan viabilitas sel yang paling signifikan setelah 72 jam pasca terapi, dengan peningkatan yang konsisten dari waktu ke waktu. Prekondisi dengan kombinasi TNFα+IFNγ juga menunjukkan peningkatan yang sinergis, terutama pada dosis 5% dan 10%, dengan efek terbaik pada 72 jam pasca terapi.Kesimpulan penelitian ini menunjukkan bahwa sekretom hUC-MSC yang diprekondisi, terutama dengan kombinasi IFNγ+TNFα, memiliki potensi besar untuk digunakan sebagai terapi penyakit Alzheimer dengan meningkatkan viabilitas sel saraf dan menyediakan lingkungan mikro yang lebih kondusif bagi regenerasi neuron. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk mengoptimalkan pelepasan sNEP, peningkatan sitokin anti-inflamasi peningkatan faktor pertumbuhan, dan menguji efektivitas terapi ini pada model in vivo.

---

Alzheimer's disease is a progressive neurological disorder and the primary cause of dementia in the elderly. Amyloid-β (Aβ) plaques and Neurofibrillary Tangles (NFT) are the primary hallmarks of this disease, with Aβ42 serving as the neurotoxic peptide that significantly contributes to its etiology. Therapy utilizing human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells (hUC-MSC) presents a promising avenue for Alzheimer's treatment by generating a secretome that includes the enzyme Neprilysin (CD10) which degrades Aβ42, anti-inflammatory cytokines that mitigate inflammation, and growth factors that enhance the proliferation and differentiation of endogenous stem cells.

This research seeks to enhance the preconditioned hUC-MSC secretome to increase the production of Neprilysin and other therapeutic elements, including growth factors and anti-inflammatory cytokines. The preconditioning is conducted utilizing Tumor Necrosis Factor-α (TNFα) and/or Interferon-γ (IFNγ). The efficacy of the secretome was evaluated in vitro utilizing an Alzheimer's neuronal cell model, developed from the differentiation of SH-SY5Y neuroblastoma cells with Retinoic Acid into neuron-like cells, subsequently subjected to Aβ42 exposure.

This study's results demonstrated that in vitro preconditioning of hUC-MSC with IFNγ yielded a secretome that was enriched in CD10 (NEP). Nonetheless, despite the elevated expression of CD10 on the cell surface, this study did not observe a significant increase in the secretion of soluble Neprilysin (sNEP) in the secretome, indicating that further conditions, such as the activation of Matrix Metalloproteinases (MMP) or hypoxic incubation, are required to stimulate CD10 release.

Viability assessments indicated that secretomes that were preconditioned with IFNγ at dosage of 10% and 20% produced the most substantial enhancement in cell viability after 72 hours post-therapy, demonstrating consistent improvement over time. Preconditioning with the combination of TNFα and IFNγ demonstrated synergistic enhancements, particularly at dosages of 5% and 10%, with optimal effects noted 72 hours post-therapy.

This study concludes that the preconditioned hUC-MSC secretome, especially when combined with IFNγ and TNFα, holds significant potential as a therapeutic intervention for Alzheimer's disease by improving neuronal cell viability and fostering a more favorable microenvironment for neuronal regeneration. Additional study is required to optimize sNEP release, augment anti-inflammatory cytokines, elevate growth factors, and evaluate the efficacy of this therapy in in vivo models."

"Sel punca adiposa (SPA) telah menjadi sumber pengobatan terkini yang menjanjikan. Penelitian terbaru menunjukkan bahwa mekanisme yang mendasari manfaat sel punca sebagai pengobatan berhubungan dengan efek modulasi parakrin daripada pemberian sel punca itu sendiri. Beberapa penelitian tentang SPA telah melaporkan adanya perubahan dalam jumlah, proliferasi, dan potensi diferensiasi, serta adanya penurunan sitokin dan growth factor pada SPA sehubungan dengan usia donor. Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki perubahan sekretom berdasarkan kelompok usia tua dan muda serta dampaknya terhadap sel fibroblas yang diinduksi UVB. Sel punca adiposa dari donor usia tua dan muda dikultur dan diisolasi untuk diambil sekretomnya. Sel fibroblas yang diinduksi UVB kemudian diinkubasi dengan sekretom sel punca adiposa tersebut. Parameter seperti viabilitas sel dan konsentrasi TGF-β1 pada sekretom sel punca adiposa serta presentase apoptosis, sel mati, ekpresi gen MMP-3 dan COL1A pada sel fibroblas yang diinduksi UVB dan diberikan sekretom usia donor berbeda dievaluasi untuk menilai efek perbedaan usia donor tersebut. Hasil penelitian menunjukan bahwa sekretom sel punca adiposa dengan usia donor berbeda memberikan dampak yang berbeda pada sel fibroblas yang diinduksi UVB. Konsentrasi TGF-β1 pada sekretom SPA asal donor usia muda lebih tinggi dibandingkan dengan SPA donor tua. Persentase apoptosis, sel mati dan ekpresi gen MMP-3 terhadap GAPDH lebih tinggi pada sel fibroblas yang diinduksi UVB dan diberi sekretom SPA donor tua dibandingkan dengan yang diberi sekretom SPA donor muda. Ekpresi gen COL1A lebih rendah pada pada sel fibroblas yang diinduksi UVB dan diberikan sekretom SPA donor tua dibandingkan diberikan sekretom SPA donor muda. Oleh sebab itu, dapat disimpulkan adanya penurunan kemampuan sekretom sel punca adiposa usia donor tua dalam memperbaiki penuaan pada sel fibroblas yang dipajan dengan UVB, berdasarkan morfologi sel, presentase sel apoptosis dan sel mati serta ekpresi MMP-3 dan COL1A terhadap GAPDH.

---

Adipose stem cells (ASC) have become a promising source of current treatment. Recent research suggests that the mechanisms underlying the benefits of stem cells as a treatment relate to paracrine modulatory effects rather than the administration of stem cells themselves. Several studies on ASC have reported changes in the number, proliferation and differentiation potential, as well as a decrease in cytokines and growth factors in ASC in relation to donor age. This study aims to investigate secretome changes based on young and old age groups and their impact on UVB- induced fibroblast cells. Adipose stem cells from young and old donors were cultured and isolated for secretome collection. The UVB-induced fibroblast cells were then incubated with the secretome of the adipose stem cells. Parameters such as cell viability and TGF-β1 concentration in the secretome of adipose stem cells as well as the percentage of apoptosis, dead cells, MMP-3 and COL1A gene expression in fibroblast cells induced by UVB and given the secretome of different donor ages were evaluated to assess the effect of differences in donor age. The results showed that the secretome of adipose stem cells with different donor ages had different impacts on UVB-induced fibroblast cells. The concentration of TGF-β1 in the secretome of SPA from young donors was higher compared to ASC from old donors. The percentage of apoptosis, cell death and expression of the MMP-3 gene against GAPDH was higher in fibroblast cells induced by UVB and given the SPA secretome of old donors compared to those given the ASC secretome of young donors. COL1A gene expression was lower in fibroblast cells induced by UVB and given the ASC secretome of old donors compared to those given the ASC secretome of young donors. Therefore, it can be concluded that there is a decrease in the ability of the secretome of adipose stem cells from old donors to improve aging in fibroblast cells exposed to UVB, based on cell morphology, the percentage of apoptotic cells and dead cells as well as the expression of MMP-3 and COL1A against GAPDH."

"Pengembangan pengobatan regeneratif berbasis sel punca banyak dikembangkan karena sel tersebut dapat memproduksi Sekretom. Mayoritas produk berbasis sel dan gen yang telah dijual berbentuk sediaan injeksi rute parenteral yang memiliki berbagai kekurangan sehingga diperlukan rute alternatif seperti rute indtradermal dengan bentuk sediaan Microneedle yang dapat menembus penghalang stratum corneum. Penelitian ini berfokus pada pengembangan sediaan dissolving microneedle (DMN) untuk penghantaran sekretom dari sel punca mesenkimal dan dilakukan evaluasi secara in vitro, ex vivo dan in vivo sebagai salah satu alternatif terapi regeneratif. DMN dibuat menggunakan metode two-step casting dan tersusun dari dua kombinasi polimer yakni Poli(vinil pirolidon) (PVP) dengan Poli(vinil alkohol) (PVA) dan PVP dengan sodium hialuronat (SH). Evaluasi morfologi, kekuatan mekanis, pelarutan sediaan, kandungan protein dalam sediaan, permeasi, iritasi kulit dan stabilitas dilakukan pada DMN yang telah dibuat. Pada evaluasi morfologi dan kekuatan mekanis diperoleh 2 formula yang memenuhi kriteria penerimaan dan dapat larut dalam waktu kurang dari 10 menit pada kulit porcine. Pada uji kandungan protein kedua formula diketahui bahwa F12 (kombinasi eksipien PVP-SH) mengandung protein lebih banyak daripada F5 (kombinasi PVP-PVA). F5 dapat menghantarkan protein sebesar 100,84% ± 0,88 dan F12 sebesar 99,63% ± 9,21 dalam 24 jam berdasarkan uji permeasi secara in vitro. Selama 4 hari pengamatan uji iritasi kulit tikus Sprague-Drawley, terlihat tidak adanya tanda iritasi seperti edema dan kemerahan setelah aplikasi kedua formula. Berdasarkan uji stabilitas selama 14 hari, terdapat penurunan kemampuan mekanis yang diketahui dari uji kompresi. Kombinasi eksipien PVP-PVA dan PVP-SH dapat membentuk sediaan DMN tidak menimbulkan iritasi pada kulit dan dapat menghantarkan sekretom.

---

Development of regenerative therapy based on stem cells is being developed since these cells can produce Secretome. Majority of marketed cellular and gen therapy products are parenteral injectable dosage forms, leading to several limitations that required alternative route such as intradermal route with Microneedle as dosage form which penetrates stratum corneum barrier. This research focused on the development of dissolving microneedles (DMN) for secretome mesenchymal stem cell delivery and have been evaluated by in vitro, ex vivo, and in vivo models as an alternative for regenerative therapy. DMN was made by two-step casting method and composed of two polymer combinations: Poly(vinyl pyrrolidone) (PVP) with Poly(vinyl alcohol) (PVA) and PVP with sodium hyalrunate (SH). Morphology, mechanical strength, dossage dissolution, protein content in dossage form, permeation, skin irritation, and stability evaluation were carried out on the DMN. On morphology and mechanical strength evalation, 2 formulas met the acceptance criteria and dissolved less than 10 minutes in porcine skin. Evaluation of protein content showed that F12 (combination of PVP-SH) have higher protein content than F5 (combination of PVP-PVA). F5 could deliver protein by 100.84% ± 0.88, while F12 by 99.63% ± 9.21 in 24 hours based on in vitro permeation study. After 4 days observation on Sprague-Drawley rat’s skin, there were no signs of irritation such as edema and redness after application of both formulas. Based on stability study after 14 days, mechanical strength of both formulas showed a decline as determined by compression. Combinations of PVP-PVA and PVP-SH were safe to be used as excipients of DMN secretome delivery."

"Sel punca perinatal saat ini menjadi alternatif yang potensial bagi ketersediaan sel punca, baik dalam bidang riset maupun klinis. Salah satu yang diharapkan adalah Wharton's Jelly dari persalinan preterm yang merupakan sumber sel punca mesenkim. Karakteristik dan ekspresi antigen permukaan HLA-ABC dan HLA-G pada sel punca mesenkim Wharton's Jelly persalinan preterm belum banyak diketahui. Kedua molekul imunomodulator ini turut berperan dalam menentukan sifat supresi imun pada sel mesenkim, yang sangat dibutuhkan pada transplantasi allogenik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui ekspresi antigen permukaan HLA-ABC dan HLA-G sel punca mesenkim WJ dari persalinan preterm dan dibandingkan pada berbagai suplemen medium kultur. SPM-WJ dikultur dalam medium DMEM 10 FBS, DMEM 10 PRP dan Mesencult. Sel yang telah konfluens dipanen, dan ditumbuhkan kembali pada wadah yang baru pasase dengan medium yang sama. Pada pasase 3 dan 5 dilakukan uji karakteristik antigen permukaan HLA-ABC dan HLA-G dengan menggunakan flowcytometry. Ekspresi HLA-ABC dan HLA-G sampel preterm Wharton's Jelly menunjukkan kecenderungan lebih hypoimmunogenic daripada sampel aterm dan lebih sesuai pada suplemen medium kultur PRP.Sel punca mesenkim WJ dari persalinan preterm dapat digunakan sebagai salah satu alternatif sumber sel punca mesenkim untuk aplikasi terapi regeneratif.

---

Perinatal stem cells is an potential alternative to the availability of stem cell, both in the research and clinical field. One would have expected is Wharton's Jelly from preterm delivery that is the source of mesenchymal stem cells. Characteristics and expression of surface antigen HLA ABC and HLA G on mesenchymal stem cells derived Wharton's Jelly from preterm delivery little has been known. Both of these immunomodulatory molecules play a role in determining the nature of immune suppression in mesenchymal stem cells, which are needed on the allogenic transplantation. This study aims to determine the expression of surface antigen HLA ABC and HLA G WJ mesenchymal stem cells from preterm delivery and compared on different culture media supplements. WJ MSC was cultured with the followings media DMEM 10 FBS, DMEM 10 PRP and Mesencult. Cells reaching confluence were harvested and regrown in different containers, but with the same media. Cell passaging was carried out until the fifth passage, and the characterization of HLA ABC and HLA G surface antigens were performed on the third and fifth passages. The expression of HLA ABC and HLA G at the Wharton's Jelly preterm samples tends more hypoimmunogenic than the term sample and more appropriate to the culture medium supplement PRP. Mesenchymal stem cells derived Wharton's Jelly from preterm delivery can be used as an alternative source of mesenchymal stem cells for regenerative therapy applications."

"Pendahuluan. Sel punca mesenkimal merupakan jawaban untuk berbagai penyakit, termasuk orthopedi. Meskipun jumlah terbatas, prosedur invasif, nyeri, dan sel yang relatif sedikit, sumsum tulang masih menjadi sumber utama. Adiposa menjadi alternatif menjanjikan dengan kemampuan sebanding. Dengan meningkatnya harapan hidup, jumlah pasien tua meningkat dan menjadi sangat potensial untuk aplikasi sel punca. Namun, timbul kontroversi mengenai kualitas sel punca pada penuaan. Metode Penelitian. Penelitian dilakukan di Unit Pelayanan Terpadu Teknologi Kedokteran Sel Punca Rumah Sakit Cipto Mangunkusumo-Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta sejak Oktober 2015 - Maret 2016. 12 subjek dibagi menjadi tiga kelompok usia; 15-30 tahun, 31-40 tahun, dan 41-55 tahun dan dilakukan pengambilan sumsum tulang krista iliaka posterior dan adiposa, kemudian dilakukan isolasi dan kultur sel punca mesenkimal. Peneliti melakukan analisis karakteristik biologis, waktu penggandaan populasi, diferensiasi osteogenik, dan pewarnaan Alizarin. Seluruh data dianalisis dengan SPSS 20. Temuan Penelitian. Karakteristik biologis dan pewarnaan Alizarin Red menunjukkan tidak ada perbedaan bermakna sel punca mesenkimal sumsum tulang dan adiposa pada kelompok usia sama(p>0,05). Waktu penggandaan populasi menunjukkan adanya perbedaan signifikan sel punca mesenkimal sumsum tulang dan adiposa pada kelompok 31-40 tahun(p=0,028) dan 41-55 tahun(p=0,035). Kesimpulan. Sel punca mesenkimal adiposa menunjukkan karakteristik biologis, waktu penggandaan populasi, dan diferensiasi osteogenik yang konstan. Sel punca mesenkimal sumsum tulang menunjukkan waktu penggandaan populasi yang menurun seiring usia, berbeda dengan karakteristik biologis dan diferensiasi osteogenik. Adiposa dapat menjadi pilihan sumber sel punca mesenkimal pada setiap golongan usia.

---

Introduction. Mesenchymal stem cell is the answer of many medicine problems, including orthopaedic. Bone marrow is still the main source. Because of limited source, invasive procedure, pain, and relative less cell, adipose will be promising source with equal regenerating and differentiating ability. Along with increasing life expectancy, geriatric population is increasing as well as the potential need for stem cell application. Yet there is still controversy about stem cell quality in aging.

Methods. This study was conducted in Stem Cell Medical Technology Integrated Service Unit Cipto Mangunkusumo General Hospital-Faculty of Medicine Universitas Indonesia, Jakarta, October 2015 - March 2016. 12 patients were divided into 3 age group; 15-30 year, 31-40 year, and 41-55 year. Bone marrow from posterior iliac crest and adipose tissue were collected, mesenchymal stem cell isolation and culture were done subsequently. Biological characterization, Population Doubling Time, osteogenic differentiation, and alizarin red assay were carried out. All data was analyzed using SPSS 20.

Results. No significant difference was observed in biological characteristic and Alizrin red assay of bone marrow and adipose mesenchymal stem cell among age group (p>0.05). There is significant difference in Population Doubling time in 31- 40 year group(p=0.000) and 41-55 year group(p=0.000).

Conclusions. Adipose mesenchymal stem cell had steady biological characteristic, Population Doubling Time, and osteosteogenic differentiation. Bone marrow mesenchymal stem cell had increasing population doubling time in increasing age, apart from biological characteristic and osteogenic differentiation. Adipose could be the source of choice in harvesting mesenchymal stem cell at any age."

"Tulang normal mampu mengalami tahapan regenerasi kompleks dalam penyembuhan fraktur secara alami. Akan tetapi, terdapat beberapa kasus fraktur yang tidak dapat mengandalkan perbaikan tulang secara alami sehingga terjadi kegagalan penyatuan tulang. Berbagai pendekatan klinis dilakukan untuk meningkatkan regenerasi tulang dalam penyembuhan fraktur namun masih terbatas dan memiliki berbagai kekurangan. Sel punca mesenkimal (SPM) dan bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) merupakan faktor yang berperan penting dalam regenerasi dan perbaikan tulang, terutama dalam proses osteogenesis. Salah satu alternatif pengobatan tulang yang banyak dikembangkan adalah mengkombinasikan kedua faktor tersebut untuk meningkatkan kemampuan osteogenesis SPM. Penelitian ini berfokus pada pengembangan rekombinan BMP-2 pada sekretom SPM melalui rekayasa genetik dengan vektor lentivirus. Plasmid konstruksi vektor lentivirus pembawa gen BMP-2 yang dipakai terdiri dari plasmid transfer, plasmid packaging, plasmid regulatory dan plasmid envelope, yang merupakan kombinasi lentivirus generasi kedua ke ketiga. Titer vektor lentivirus yang berhasil diproduksi pada sel HEK293T sebesar 5.48×1010 copies/mL pada hari ke-2 dan 1.42×1010 copies/mL pada hari ke-4. SPM transduksi vektor lentivirus mengalami peningkatan ekspresi gen BMP-2 dengan hasil transduksi 100 MOI (4,23±0,22) lebih tinggi daripada 50 MOI (2,49±0,07). Sistem ekspresi gen inducible tet-off pada SPM dapat menekan ekspresi gen BMP-2 dengan pemberian doxycycline 100 ng/mL dan terjadi upregulasi ekspresi gen pasca penghilangan doxycycline. Rekombinan BMP-2 pada SPM terproduksi pada intraseluler (50 MOI: 1015,2±36 pg/mL dan 100 MOI: 992,5±33,9 pg/mL) namun sangat sedikit yang dapat tersekresi pada ekstraseluler, yaitu 84,5±6,9 pg/mL dan 75,8±3,4 pg/mL berturut-turut pada perlakuan 50 dan 100 MOI pada CM jika dibandingkan dengan NT. Rekombinan BMP-2 dalam sekretom SPM tidak memberikan efek signifikan dalam peningkatan diferensiasi osteogenik dibandingkan dengan medium induksi diferensiasi osteogenik komersial terstandar. Perlu dilakukan studi lanjutan terkait kapabilitas sekresi rekombinan BMP-2 yang juga berhubungan dengan fungsionalitas rekombinan BMP-2 secara biologis.

---

Normal bones can do complex regeneration stages in natural fracture healing. However, some fracture cases cannot rely on natural bone repair, failing bone union. Various clinical approaches have been used to increase bone regeneration in fracture healing. However, there are still many limitations and various shortcomings. Mesenchymal stem cells (MSCs) and bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) play an important role in bone regeneration and repair, especially in osteogenesis. One alternative bone treatment that has been developed is to combine these two factors to increase the osteogenesis ability of MSCs. This research focuses on developing recombinant BMP-2 in the SPM secretome through genetic engineering by lentivirus vectors. The construction of the lentivirus vector plasmid carrying the BMP-2 gene consists of a transfer plasmid, a packaging plasmid, a regulatory plasmid, and an envelope plasmid, which is classified into a second to third-generation lentivirus transition. The lentivirus vector titer that was successfully produced in HEK293T cells was 5.48×1010 copies/mL on day 2 and 1.42×1010 copies/mL on day 4. Lentivirus vector transduced SPM experienced an increase in BMP-2 gene expression with transduction results of 100 MOI (4.23 ± 0.22) higher than 50 MOI (2.49 ± 0.07). The inducible tet-off gene expression system in SPM can suppress BMP-2 gene expression by administering 100 ng/mL doxycycline and upregulation of gene expression occurs after removing doxycycline. Recombinant BMP-2 in MSCs was produced intracellularly (50 MOI: 1015.2 ± 36 pg/mL and 100 MOI: 992.5 ± 33.9 pg/mL) but secreted extracellularly in low quantity, yaitu 84,5±6,9 pg/mL dan 75,8±3,4 pg/mL in 50 and 100 MOI group respectively. Recombinant BMP-2 in the SPM secretome did not significantly increase osteogenic differentiation compared with standard commercial osteogenic differentiation induction media. Further studies are needed regarding the secretion capability of recombinant BMP-2 which is also related to the biological functionality of recombinant BMP-2"

"Pendahuluan: Sekretom sel punca mesenkimal dipercaya mengandung faktor pertumbuhan yang bekerja melalui mekanisme parakrin di situs cedera. Di antara banyaknya faktor-faktor pertumbuhan, beberapa disinyalir memiliki efek osteogenik antara lain bone morphogenetic protein-2 (BMP-2), epidermal growth factor (EGF), dan vascular endothelial growth factor (VEGF).Tujuan: Tujuan penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi kuantitas BMP-2, EGF dan VEGF pada sekretom sel punca mesenkimal jaringan adiposa dan tali pusat.Metode: Sampel sekretom dari sel punca mesenkimal jaringan adiposa dan tali pusat dibedakan berdasarkan perlakuan pemberian serum atau non serum dan waktu pengambilan saat penggantian medium terakhir atau saat panen, dan dianalisa dengan metode ELISA sandwich assay menggunakan Human BMP-2, VEGF, and EGF ELISA Kits.Hasil: Sebaran nilai BMP-2 tersentrasi pada nilai 0 pada sekretom jaringan adiposa maupun tali pusat. Kadar EGF dan VEGF memiliki perbedaan bermakna pada sampel jaringan adiposa yang berbeda (p<0,009 dan p<0,005). Kadar EGF dan VEGF pada jaringan adiposa adalah 2,67 (0-22,53) dan 1473,5 (136,1-5335) sedangkan pada jaringan tali pusat adalah 2,67 (0-13,29) dan 0 (0-1675).Kesimpulan: Sekretom jaringan adiposa dan tali pusat kemungkinan hanya mengandung BMP-2 dalam nilai yang sangat rendah. Baik jaringan adiposa maupun jaringan tali pusat mengandung EGF dalam jumlah yang moderat. Kadar VEGF pada jaringan adiposa secara signifikan lebih tinggi.

---

Background: The secretome derived from mesenchymal stem cells has been suggested contain growth factors that works via a paracrine mechanism in the injured area. Of these factors, some are thought to have an osteogenic effect, including bone morphogenetic protein-2 (BMP-2), epidermal growth factor (EGF), and vascular endothelial growth factor (VEGF).

Objective: The aim of this study is to identify the quantity of BMP-2, EGF, VEGF in secretome from adipose tissue (AT-MSC) and umbilical cord-derived mesenchymal stem cells (UC-MSC).

Methods: Secretome samples from AT-MSC and UC-MSC were grouped based on serum administration and harvesting time, and were analyzed with an ELISA sandwich assay method using Human BMP-2, VEGF, and EGF ELISA Kits. This study aims to identify whether BMP-2 is contained in the secretome of AT-MSC and UC-MSC, which has never been reported before, and to measure the level of EGF and VEGF within the secretome.

Results: The distribution of value for BMP-2 was nearly zero in the secretome of AT-MSC and UC-MSC. The level of EGF and VEGF were significantly different between different donor samples of AT-MSC (p<0,009 and p<0,005). The level of EGF and VEGF of AT-MSC are 2,67 (0-22,53) and 1473,5 (136,1-5335) compare to 2,67 (0-13,29) and 0 (0-1675) of UC-MSC.

Conclusion: The secretome of AT-MSC and UC-MSC may contain BMP-2 in a very low level. Both AT-MSC and UC-MSC contain EGF in moderate amount. VEGF is significantly higher in of AT-MSC."

"Penelitian ini bertujuan untuk melihat efek pemberian sel punca mesenkim (SPM) asal tali pusat yang diduga dapat menurunkan TGF- β1 dan meningkatkan interleukin-10 serta menurunkan derajat fibrosis hati dengan skoring fibrosis NAFLD, menggunakan blok parafin hati tikus dari penelitian sebelumnya. Tikus diberi 2AAF/CCl4 untuk menimbulkan model fibrosis, dosis CCl4 2mg/kgBB, 2AAF 10mg/kgBB dan SPM 1x106. Kelompok dibagi menjadi tiga yaitu kelompok I kontrol tidak diberi perlakuan, kelompok II diberikan 2AAF/CCl4, dan kelompok III diberikan 2AAF/CCl4 serta SPM asal tali pusat manusia. Ekspresi sitokin interleukin-10 dan TGF- β1 diperiksa dengan menggunakan pulasan imunohistokimia. Kuantifikasi pemeriksaan imunohistokimia dengan menghitung jumlah sel kupffer positif warna coklat pada sinusoid lalu dibagi dengan jumlah keseluruhan sel kemudian dikali seratus persen pada sepuluh lapang pandang. Terdapat perbedaan signifikan ekspresi TGF- β1 antara kelompok tanpa SPM dibanding dengan kelompok kontrol (p=0.02) dan kelompok SPM (p=0.04). Terdapat peningkatan bermakna ekspresi interleukin-10 antara kelompok SPM dengan kelompok kontrol (p=< 0.00) dan tanpa kelompok SPM (p=0.005). Terdapat korelasi positif TGF- β1 dengan peningkatan skoring NAFLD (r=0.39,p=0.035) dan tidak ada korelasi IL-10 dengan skoring NAFLD. Pemberian SPM dapat menurunkan ekspresi TGF-β1 dan meningkatkan ekspresi interleukin-10 pada jaringan hati tikus yang diinduksi oleh 2-AAF/CCl4 dan memperbaiki fibrosis dengan menurunkan skoring NAFLD.

---

This study aims to look at the effect of mesenchymal stem cell (SPM) originating from the umbilical cord which is thought to reduce TGF-β1 and increase interleukin-10 and reduce the degree of liver fibrosis by scoring NAFLD fibrosis, using rat liver paraffin blocks from previous studies. Mice were given 2AAF / CCl4 to cause fibrosis model, 2 mg / kgBB of CCl4 dose, 2AAF 10mg / kgBB and 1x106 SPM. The group was divided into three namely control group I was not given treatment, group II was given 2AAF / CCl4, and group III was given 2AAF / CCl4 and SPM from human umbilical cord. Interleukin-10 and TGF-β1 cytokine expressions were examined using immunohistochemical smear. Quantification of immunohistochemical examination by counting the number of brown positive kupffer cells in sinusoids and then divided by the total number of cells and then multiplied one hundred percent in ten fields of view. There was a significant difference in TGF-β1 expression between the groups without SPM compared to the control group (p = 0.02) and the SPM group (p = 0.04). There was a significant increase in the expression of interleukin-10 between the SPM group and the control group (p = <0.00) and without the SPM group (p = 0.005). There was a positive correlation of TGF-β1 with increased NAFLD scoring (r = 0.39, p = 0.035) and there was no IL-10 correlation with NAFLD scoring. Giving SPM can reduce TGF-β1 expression and increase the expression of interleukin-10 in rat liver tissue induced by 2-AAF / CCl4 and improve fibrosis by decreasing NAFLD scoring."

"Diferensiasi osteogenik dari Sel punca mesenkim (MSC) menjadi osteoblas memiliki signifikansi klinis yang sangat penting untuk mengobati cedera tulang. Berbagai penelitian telah dilakukan untuk meneliti faktor-faktor yang dapat meningkatkan diferensiasi osteogenik, termasuk pengembangan perancah untuk kultur MSC. Perancah Polivinil Alkohol (PVA)/ Fibroblast-derived Matrix (hFDM) asal manusia menjadi salah satu kandidat perancah yang diduga dapat mendukung diferensiasi osteogenik MSC. Keberadaan matriks ekstraseluler (ECM) pada perancah dapat meregulasi berbagai aktivitas seluler melalui komponen protein matriks yang terdapat pada ECM. Protein matriks berperan sebagai sekuesterasi berbagai faktor pertumbuhan. Faktor pertumbuhan seperti BMP2 dan chordin diketahui dapat meregulasi diferensiasi osteogenik. Proses terjadinya diferensiasi osteogenik dapat diamati melalui akumulasi mineral kalsium yang terdeposit pada matriks ekstraseluler. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui metode optimum dalam pembuatan perancah PVA/hFDM, danmengetahui peran perancah PVA/hFDM dalam mempengaruhi diferensiasi osteogenik MSC dengan mengukur ekspresi gen BMP2, dan chordin, serta ekspresi kadar kalsium relatif pada matriks ekstraseluler. Optimasi pembuatan perancah PVA hFDM dimulai dengan optimasi medium kultur, waktu kultur, preparasi, dan teknik deselulerisasi. hFDM dikarakterisasi menggunakan pewarnaan Hematoxylin, Masson Trichrome, dan Imunohistokimia untuk mengetahui keberadaan protein matriks. MSC dikultur pada perancah PVA/hFDM untuk uji diferensiasi osteogenik selama 21 hari. Sampel RNA diisolasi pada hari ke-7,14, dan 21. Ekspresi gen BMP2 dan chordin dianalisis menggunakan metode qRT-PCR. Adapun ekspresi kadar kalsium relatif dianalisis dengan uji kualitatif dan kuantitatif pewarnaan Alizarin Red. Hasil penelitian ini menunjukkan protokol pembuatan perancah PVA/hFDM telah dioptimasi, dan karakterisasi hFDM memperlihatkan keberadaan protein matriks berupa kolagen dan biglycan. Ekspresi gen BMP2 menurun pada kelompok MSC yang dikultur pada perancah PVA/hFDM baik di hari ke-7, 14, dan 21. Sedangkan ekspresi gen chordin meningkat pada kelompok MSC yang dikultur pada perancah PVA/hFDM di hari ke 7, dan 14, kembali menurun di hari ke-21. Ekspresi kadar kalsium relatif cenderung meningkat pada kelompok MSC yang dikultur pada perancah PVA/hFDM dengan gambaran mikroskopis berupa bercak merah pada permukaan perancah. Kesimpulan dari penelitian ini adalah perancah PVA/hFDM cenderung dapat mendukung diferensiasi osteogenik MSC. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penggunaan perancah PVA/hFDM dapat menurunkan ekspresi gen BMP2, dan meningkatkan ekspresi gen chordin, serta cenderung meningkatkan ekspresi kadar kalsium relatif yang terdeposit pada matriks ekstraseluler.

---

Osteogenic differentiation from Mesenchymal Stem Cell (MSC) to osteoblasts has great clinical significance for treating bone injury. Various studies have been conducted to investigate factors that can enhance osteogenic differentiation, including scaffold development for MSC culture. Scaffold Polyvinyl Alcohol (PVA) / human Fibroblast-derived Matrix (hFDM) is a scaffold candidate assumed to support osteogenic differentiation of MSCs. The extracellular matrix (ECM) presence on the scaffold can regulate various cellular activities through the matrix protein components contained in the ECM. Matrix protein plays a role in sequestering multiple growth factors. Growth factors such as BMP-2 and chordin are to regulate osteogenic differentiation. The process of osteogenic differentiation can be observed by accumulating calcium minerals in the extracellular matrix. The purpose of this study was to determine the optimal method for making PVA / hFDM scaffold and to determine the role of the PVA / hFDM scaffold in affecting MSC osteogenic differentiation by measuring the expression of BMP2 and chordin genes, as well as the expression of relative calcium levels in the extracellular matrix. Optimization of making hFDM PVA scaffold begins with the optimization of culture medium, culture time, preparation, and decellularization techniques. hFDM was characterized using Hematoxylin, Masson Trichrome, and Immunohistochemical staining to determine matrix proteins' presence. MSCs were cultured on the PVA / hFDM scaffold for osteogenic differentiation assay for 21 days. RNA samples were isolated on day 7,14 and 21. Expression of BMP2 and chordin genes were analyzed using the qRT-PCR method. The expression of relative calcium levels was analyzed by qualitative and quantitative tests of Alizarin Red staining. The results of this study indicate that the PVA / hFDM scaffold preparation protocol has been optimized, and the hFDM characterization shows the presence of matrix proteins in the form of collagen and biglycan. BMP-2 gene expression decreased in the MSC group cultured on the PVA / hFDM scaffold on days 7, 14, and 21. In contrast, the chordin gene expression increased in the MSC group cultured on the PVA / hFDM scaffold on days 7, and 14, back down on day 21. The expression of relative calcium levels tended to increase in the MSC group cultured on the PVA / hFDM scaffold with a microscopic appearance of red spots on the scaffold surface. This study concludes that Scaffold PVA / hFDM tends to support osteogenic differentiation of MSCs. The results showed that the use of the PVA / hFDM scaffold could decrease the expression of the BMP2 gene, and increase the expression of the chordin gene, and tended to increase the expression of the relative calcium levels deposited in the extracellular matrix.

"

"

Laminoplasti merupakan teknik dekompresi medulla spinalis dengan rekonstruksi lamina. Beberapa teknik telah diusulkan untuk mengisi defek lamina dengan menggunakan spacer. Perancah dirancang tiga dimensi sebagai pengisi celah/spacer untuk mengurangi potensi penolakan jaringan atau transmisi penyakit seperti pada penggunaan allograft serta mengurangi morbiditas yang ditimbulkan akibat pengambilan donor jaringan dari tempat lain di tubuh pasien (autograft). Penelitian pendahuluan telah dilakukan oleh peneliti dengan hasil perancah dari PLA terbukti biokompatibel secara invitro. Penelitian ini bertujuan untuk melanjutkan uji biokompatibilitas in vivo pada perancah PLA dan mengetahui pengaruh terhadap penambahan injeksi HA/Alginat serta seeding sel punca mesenkimal (SPM). Penelitian ini merupakan studi eksperimental dengan desain pre-test dan post-test control group untuk mengetahui efek aplikasi dari perancah menggunakan uji biokompatibilitas perancah in vivo pada hewan coba. Model laminoplasti dibuat pada 15 kelinci yang dibagi menjadi 5 kelompok berdasarkan jenis perancah yang dipakai untuk mengisi defek laminoplasti: Autograft, PLA, PLA+HA/alginat, PLA+ SPM, PLA+HA/Alginat+SPM. Secara umum tidak ditemui tanda inflamasi (derajat 1) pada sebagian besar sampel (47%) serta tidak ada sampel (0%) dengan area nekrosis (derajat 5). Penilaian mikroarsitektur perancah dengan Scanning Electrone Microscope menunjukkan integrasi jaringan yang baik ke dalam perancah. Tidak ada perbedaan bermakna pada hasil penilaian mikroskopis histopatologi dan mikrostruktur antara kelima kelompok. Hal ini menunjukan perancah sintetis sama baiknya dengan penggunaan autograft dan dapat direkomendasikan untuk penelitian translasional ke manusia agar seterusnya dapat diaplikasikan sebagai biomaterial yang biokompatibel untuk mengisi defek tulang.

 

Kata Kunci:  Perancah, PLA, Sel Punca Mesenkimal, Laminoplasti, Biokompatibilitas

 

---

Laminoplasty is a spinal decompression technique by lamina reconstruction. Several techniques have been proposed to fill the bone gap and maintaining widened canal by using spacers.  A 3-dimensional perancah is used as spacer to reduce the potential for tissue rejection or disease transmission as in the use of allograft and reduce the risk of donor site morbidity as seen in autograft. A preliminary study has been conducted by author to prove the PLA biocompatibility in vitro. This study aims to evaluate biocompatibility of PLA scaffold in vivo and see whether the addition of alginate / HA and mesenchymal stem cell (MSCs)injections can improve the biocompatibility and tissue-perancah integration in vivo. This study is an experimental study with a pre-test and post-test control group design. A total of 15 laminoplasty rabbit model were divided into 5 groups based on type of spacer used: Autograft, PLA, PLA+HA/alginate, PLA+ MSc, PLA+HA/Alginate+MSc. perancah. In general, there were no signs of inflammation (grade 1) in most samples (47%) and there were no samples (0%) with areas of necrosis (grade 5). From the microarchitectural study using Scanning Electrone Microscope (SEM) most sample shown a decrease in porosity which indicates a good tissue-perancah integration. There were no significant differences in the histopathological results and microstructural assessment between the five groups. This result showed that synthetic scaffold has similar tissue reaction and tissue integration profile as autograft. Thus, we can recommend for further translational study to human so that this biocompatible fabricated perancah can be used to fill bone defect. 

 

"