Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Virus dengue (DENV) adalah penyebab penyakit infeksi yang endemik di 100 negara di dunia. DENV dapat menyebabkan infeksi primer dan sekunder. Infeksi sekunder diperkirakan lebih berat dan akan menyebabkan menjadi Demam Berdarah Dengue (DBD) dan Sindrom Renjatan Dengue (SRD). Penatalaksanaan yang lebih dini dan tepat akan membantu mengurangi terjadinya kasus berat seperti DBD dan SRD. Teknik diagnostik yang dikembangkan belum ada yang dapat mendeteksi secara cepat dan tepat pada awal infeksi terutama untuk virus dengue strain Indonesia. Tujuan penelitian ini untuk mendapatkan kondisi yang optimal untuk deteksi DENV dan analisis validasi tehnik in house multiplek realtime Reverse Transcriptase-Polimerase Chain Reaction (rRT-PCR) sehingga dapat digunakan untuk deteksi dini dan cepat infeksi DENV. Rancangan penelitian ini adalah penelitian eksperimental laboratorium. Strain standar DENV diisolasi dengan kit Roche® dan spesimen diekstraksi dengan kit Qiagen®. Strain standar DENV digunakan untuk optimasi suhu annealing dan konsentrasi primer masing-masing serotipe DENV dengan metode in house multiplek rRT-PCR berbasis SYBR green. Sebagai pembanding digunakan RT-PCR konvensional dengan menggunakan primer di daerah C-PrM. Primer in house multiplek rRT-PCR didesain di daerah envelope pada masing masing serotipe. Analisis limit of detection (LOD) dilakukan dengan pengenceran titer virus 105, 104, 103, 102, 10 dan 1 FFU/ml (in house multiplek rRT-PCR) pada keempat serotipe. Hasil in house multiplek rRT-PCR dibandingkan dengan hasil RT-PCR konvensional Lanciotti pada pasien dengue yang telah masuk dalam kriteria inklusi dan eksklusi. Suhu annealing optimal didapatkan pada suhu 58oC sedangkan konsentrasi optimal masing-masing primer untuk in house multiplek rRT-PCR adalah 4 pmol. LOD RNA pada DENV-1, DENV-2, DENV-3, DENV-4 adalah 1 FFU/ml, 10 FFU/ml, 104 FFU/ml dan 1 FFU/ml. In house multiplek rRT-PCR dibandingkan RT-PCR konvensional mempunyai sensitivitas sebesar 100%, spesifisitas 94,2 %, nilai prediksi positif 85,7% dan nilai prediksi negatif 100 %. In house multiplek rRT-PCR berbasis SYBR green merupakan metode yang dini, cepat dan tepat untuk deteksi DENV pada awal infeksi dengan sensitivitas dan spesifisitas yang baik sebagai metode diagnostik infeksi dengue dimasa mendatang.

---

Dengue virus (DENV) is an infectious disease that is endemic in 100 countries in the World. Dengue virus infections can cause primary and secondary. Secondary infection is estimated to be more severe DHF and SDD. Developed diagnostic technique that no one has been able to quickly and accurately detect the infection early, especially for the Indonesian strain of dengue virus. The purpose of this study is to obtain optimal conditions for the detection of dengue infection and analysis techniques in-house validation of multiplex real-time Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (rRT-PCR) for the Indonesian strain of dengue virus.

Design of this study is an experimental research laboratory. Standard strains of dengue virus was isolated with a kit Roche® and the specimen was extracted with Qiagen® kit. Standard strains of dengue virus is used for optimization primer annealing temperature and the concentration primers of each serotype dengue virus by multiplex rRT-PCR method based on SYBR green. Primers for RT-PCR conventional based lanciotii et al while rRT-PCR primer was designed in the envelope gen at each serotype. Limit of detection (LOD) by diluting the virus titer 105, 104, 103, 102 FFU /ml performed by rRTPCR in all four serotypes.

The results of multiplex rRT-PCR compared with results of conventional RT-PCR in patients with dengue lanciotti superbly into the criteria inclusion and exclusion. Optimal annealing temperature results obtained at a temperature of 58oC and optimal primer concentration of 4 pmol of each primer for 25 ul total reaction. LOD RNA in DENV-1, DENV-2, DENV-3 and DENV-4 at titer of 1 FFU / ml, 10 FFU/ml, 104 FFU/ml and 1 FFU/ml. .In house multiplex rRT-PCR compared with RT-PCR has a sensitivity of 100%, specificity 95,2%, positive predictive value 85,7% and negative predictive value of 100%. In-house multiplex rRT-PCR with SYBR green-based research is a method that is rapid and precise detection of dengue virus in early infection with good sensitivity and specificity compared to RT-PCR as a diagnostic method in the future dengue infection."

"Latar Belakang : Indonesia adalah daerah endemik penyebaran virus dengue (DENV), demam tifoid, malaria, leptospirosis dan arbovirus lain. Sehingga terjadinya infeksi yang bersamaan sangat mungkin terjadi. Koinfeksi Salmonella typhi yang terjadi dapat menyebabkan manifestasi yang lebih berat, atau menyebabkan diagnosis yang salah atau tertunda. Tujuan penelitian ini adalah untuk menganalisis kejadian koinfeksi Salmonella typhi di Bengkulu dan juga melihat bagaimana peran respon imun dalam proses imunopatogenesis pada berbagai tingkat keparahan.Metode: Subjek penelitian ini adalah usia 16-60 tahun yang memiliki gejala demam kurang atau sama dengan 3 hari dan memiliki 2 gejala minimal dari kriteria WHO 1997. Infeksi DENV dikonfirmasi dengan pemeriksaan antigen NS1 dan serotipe dengan Reverse Transcriptase-PCR (RT-PCR). Keparahan penyakit DENV diklasifikasikan menjadi Demam Dengue (DD) dan Demam Berdarah Dengue (DBD). Tubex TF digunakan untuk menegakkan diagnosis infeksi Salmonella typhi. Pemeriksaan TNF-α, IL-6, TLR-4 dan TLR-6 dilakukan dengan metode ELISA. Penentuan Genotipe DENV pada penelitian ini dilakukan pada gen-E menggunakan software Mega dan Bioedit.Hasil: Subjek yang memenuhi kriteria penelitian sebanyak 63 orang dan DENV-2 merupakan serotipe dominan. Kasus monoinfeksi dan koinfeksi sebanyak 24 subjek dan 39 subjek secara berurutan. Kadar IL-6, TLR-4 dan TLR-6 pada kelompok monoinfeksi dan koinfeksi menunjukkan perbedaan yang bermakna. Sedangkan berdasarkan kelompok DD dan DBD, kadar TNF-α dan IL-6 terdapat perbedaan yang bermakna. Analisis genotiping menunjukkan DENV-1 masuk dalam genotipe-I, DENV-2 masuk dalam genotipe cosmopolitan, sedangkan DENV-3 masuk dalam genotipe-I dan DENV-4 termasuk dalam genotipe-II.Kesimpulan: Koinfeksi dapat menyebabkan peningkatan IL-6, TLR-4 dan TLR-6 plasma, sedangkan jika dilihat dari keparahan penyakit TNF-α dan IL-6 mengindikasikan derajat keparahan penyakit yang lebih berat. Genotipe DENV dalam penelitian ini sama dengan genotype yang beredar di tempat lain di Indonesia.

---

Background: Indonesia is an endemic area of dengue virus (DENV), typhoid, malaria, leptospirosis and other arboviruses. Therefore, the possibility of coinfection in DENV patients can occur. Co-infections may lead to severe manifestations, missed or delayed diagnosis and treatment of DENV infection. The aim of this study is to define incidence of coinfection in DENV patients with Salmonella typhi in Bengkulu, Sumatera, Indonesia 2020. In addition, we also evaluated characteristics of immune responses in coinfection DENV patients with different disease severities.

Method: Adult subjects more than 16 years old with fever and other clinical symptoms of DENV less than 3 days were included in this study. DENV infection was confirmed by NS1 antigen test and RT-PCR. DENV disease severity was classified into DD and DHF based on hematocrite value. Tubex TF were conducted to confirm Salmonella typhi infection in the convalescent phase. The examination of TNF-α, IL-6, TLR-4, and TLR-6 was performed by ELISA method. xty-three subjects met the study criteria and DENV-2 was the most dominant serotype. Monoinfection and coinfection cases were found in 24 subjects and 39 subjects respectively. The levels of IL-6, TLR-4, and TLR-6 in the monoinfected and coinfected groups showed significant differences. Meanwhile, based on the DF and DHF groups, there were significant differences in the levels of TNF-α and IL-6.

Conclusion: Coinfection caused an increasing in plasma IL-6, TLR-4, and TLR-6, whereas TNF-α and IL-6 caused more severe disease in DENV patients."