Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

Abstrak :
Karsinoma hepatoselular memiliki prognosis yang buruk akibat keterbatasan terapi seperti terlambat diagnosis, kurangnya biomarker spesifik, dan ketidakpekaan terhadap agen tumor ini. Imunoterapi berbasis sel NK autologus dengan stimulasi eksosom menjadi modalitas pengembangan imunoterapi berbasis sel NK untuk pasien karsinoma hepatoseluler. Sel NK pasien karsinoma hepatoseluler diisolasi dari darah vena perifer dan eksosom diisolasi dari serum darah donor sehat. Karakterisasi eksosom dengan particle size analyzer dan flow cytometry. Stimulasi eksosom ke sel NK selama 24 jam kemudian evaluasi ekspresi reseptor NKp44, NKp46, NKp30, NKG2D, KIR2D, dan NKG2A serta ekspresi perforin dan granzyme B. Visualisasi interaksi sel NK dengan fraksi sel mononuklear lainnya (CD4, CD8, CD11c, dan CD19) dengan imunofluorens. Ukuran partikel < 100 nm, muatan listrik negatif dan CD63+CD81+ (positif ganda) hasil isolasi eksosom. Terjadi peningkatan ekspresi reseptor NKp44, NKp46, NKp30, NKG2D, penurunan ekspresi NKG2A, serta peningkatan ekspresi perforin dan granzyme B pada sel NK terinduksi eksosom. Tidak ada interaksi sel berupa sinapsis imun antara sel NK terstimulasi eksosom dengan fraksi sel mononuklear lain pasien karsinoma hepatoseluler. Stimulasi eksosom ke sel NK pasien karsinoma hepatoseluler memulihkan kemampuan sitotoksik sel NK. ......Hepatocellular carcinoma has a poor prognosis due to limitations of therapy such as late diagnosis, lack of specific biomarkers, and insensitivity to this tumor agent. Autologous NK cell-based immunotherapy with exosome stimulation is a modality for developing NK cell-based immunotherapy for hepatocellular carcinoma patients. NK cells from hepatocellular carcinoma patients were isolated from peripheral venous blood, and exosomes were isolated from the blood serum of healthy donors. Exosome characterization with a particle size analyzer and flow cytometry. Stimulation of exosomes on NK cells for 24 hours, then evaluation of expression of NKp44, NKp46, NKp30, NKG2D, KIR2D, and NKG2A receptors, as well as perforin and granzyme B expression. Visualization of interactions of NK cells with other mononuclear cell fractions (CD4, CD8, CD11c, and CD19) by immunofluorescence. Particle size < 100 nm, negative electric charge, and CD63+CD81+ (double positive) exosome isolated results. There was increased expression of receptors NKp44, NKp46, NKp30, NKG2D, decreased expression of NKG2A, and increased expression of perforin and granzyme B in exosome-induced NK cells. There was no cell interaction in the form of immune synapses between exosome-stimulated NK cells and other mononuclear cell fractions in hepatocellular carcinoma patients. Stimulation of exosomes into NK cells of hepatocellular carcinoma patients restores the cytotoxic ability of NK cells.

Abstrak :
Karsinoma hepatoseluler (KHS) adalah kanker primer liver dan penyebab kedua kematian akibat kanker. Eksosom pada lingkungan mikro KHS berfungsi untuk komunikasi antar sel dan bila endositosis ke sel NK dapat menyebabkan perubahan pada sel NK. Penelitian ini bertujuan menganalisis eksosom dari darah pasien KHS, perubahan fenotipe sel NK, dan uji pewarnaan histologi (peroksidase, toluidine blue) untuk mengamati perubahan granula azurofilik sel NK akibat endositosis eksosom. Metode penelitian meliputi isolasi sel NK dari donor sehat dan eksosom darah pasien KHS, karakterisasi eksosom dengan PSA, stimulasi sel NK dengan eksosom, flow cytometry reseptor pada sel NK dan CD81+ pada eksosom, imunofluoresens endositosis eksosom ke sel NK, pewarnaan toluidine blue dan peroksidase.Hasil menunjukkan eksosom berukuran 34,7 nm, bermuatan -4,33 mV dan positif CD81+. Perubahan reseptor sel NK sehat yang dipaparkan eksosom KHS tidak signifikan (P>0,05). Imunofluoresens memperlihatkan endositosis eksosom ke sel NK. Pewarnaan sel NK toluidine blue menunjukkan metakromasia dan peroksidase negatif. Sel NK+eksosom mengalami perubahan hasil pewarnaan. Peneliti menyimpulkan bahwa eksosom dari darah pasien KHS sesuai kriteria MISEV 2018.Tidak terjadi perubahan fenotipe sel NK sehat yang dipaparkan eksosom dari darah pasien KHS. Pewarnaan peroksidase dan toluidine blue dapat digunakan sebagai metode pengamatan endositosis eksosom ke sel NK. ......Hepatocellular carcinoma (HCC) is the primary liver cancer and the second leading cause of death from cancer. Exosomes in the HCC microenvironment function for communication between cells and when endocytosed to NK cells can cause changes in NK cells. This study aims to analyze exosomes from the blood of HCC patients, changes in NK cell phenotype, and histological staining tests (peroxidase, toluidine blue) to observe changes in NK cell azurophilic granules due to exosome endocytosis. NK cells from healthy donors and blood exosomes of KHS patients were isolated, exosomes characterized by PSA, stimulation of NK cells with exosomes, and flow cytometry of receptors on NK cells and CD81+ on exosomes were done. Endocytosis of exosomes onto NK cells were observed through immunofluorescence, then metacromasia and azurofilic granules of NK cells were observed after toluidine blue and peroxidase staining. Results showed The exosome is 34.7 nm in size, has a charge of -4.33 mV and is CD81+ positive. Changes in healthy NK cell receptors exposed to HCC exosomes were not significant (P>0.05). Immunofluorescence demonstrates exosome endocytosis in NK cells. Toluidine blue NK cell staining showed negative metachromasia and peroxidase. In NK cell+exosome there is a change in staining results. We concluded exosomes from the blood of HCC patients comply with MISEV 2018 criteria. There is no change in the phenotype of healthy NK cells exposed to exosomes from the blood of HCC patients. Peroxidase and toluidine blue staining can be used as a method of observing exosome endocytosis in NK cells.

Abstrak :
Kanker ovarium adalah salah satu jenis kanker dengan angka kematian tinggi bila dibandingkan dengan kanker organ reproduksi wanita lainnya. Imunoterapi menggunakan sel natural killer (NK) merupakan alternatif pengobatan terapi kanker ovarium. Akan tetapi keberhasilan penggunaan sel NK terbatas pada kanker hematologis dikarenakan lingkungan mikro tumor kanker ovarium melemahkan kinerja sel NK. Hal yang dapat dilakukan adalah menginduksi sel NK kanker ovarium dengan lisat hasil ultrasentrifugasi jaringan ovarium. Penelitian ini bertujuan menganalisis pengaruh induksi lisat hasil ultrasentrifugasi jaringan ovarium terhadap sitotoksisitas sel NK kanker ovarium terhadap sel kanker ovarium manusia (SKOV-3) serta marka fenotipe (CD56+CD3-), reseptor aktivasi (NKp46, NKp30, NKp44, dan NKG2D), dan inhibisi (NKG2A dan KIR2D) sel NK. Sel NK diisolasi dari sampel darah perifer enam pasien kanker ovarium kemudian sel NK diinduksi oleh lisat hasil ultrasentrifugasi jaringan ovarium selama 24 jam. Sel NK yang telah diinduksi kemudian dikokultur dengan SKOV-3 selama 24 jam dan dianalis dengan flow cytometry. Hasil flow cytometry sel NK yang diinduksi dengan pelet menunjukkan kenaikan pada ekspresi marka fenotipe CD56, reseptor aktivasi NKp46, NKp30, NKG2D, dan reseptor inhibisi KIR2D dan penurunan pada ekspresi marka fenotipe CD3, reseptor aktivasi NKp44, dan reseptor inhibisi NKG2A dibandingkan dengan sel NK tanpa induksi dan yang diinduksi IL-2. Hasil analisis flow cytometry uji sitotoksisitas sel NK yang diinduksi dengan pelet menunjukkan peningkatan kematian SKOV-3 hingga 45,3% dari 4,82% di sel NK tanpa induksi. Hal tersebut menunjukkan bahwa induksi lisat hasil ultrasentrifugasi jaringan ovarium memengaruhi ekspresi marka fenotipe, reseptor aktivasi, reseptor inhibisi pada sel NK, juga meningkatkan kemampuan sitotoksisitas sel NK. ......Ovarian cancer is considered to have a high death rate on women among other types of gynecologic cancer. Imunotherapy using natural killer (NK) cells can be used to treat ovarian cancer. However, positive results on NK cells usage on hematologic cancer are limited due to the microtumor environment weakened the function of NK cells. The solution to this problem is to induce cancer ovarium NK cells with ultracentrifuged ovarian tissue lysate. This study was conducted to analyze the effect of ultracentrifuged ovarian tissue lysate induction towards human ovarian cancer NK cells’ cytotoxicity on human cancer cell line, SKOV-3 also its phenotype marker (CD56+CD3-), activating receptors (NKp46, NKp30, NKp44 dan NKG2D), and inhibitory receptors (NKG2A dan KIR2D). NK cells were isolated from six ovarian cancer patients’ peripheral blood then inducted with ultracentrifuged ovarian tissue lysate for 24 hours. Inducted NK cells then cocultured with SKOV-3 for another 24 hours then analyzed with flow cytometry. Flow cytometry’s result showed that ultracentrifuged ovarian tissue lysate induction increases NK cell phenotype marker CD56, activating receptors NKp46, NKp30, NKG2D, and inhibitory receptors KIR2D expression and decrease phenotype marker CD3, activating receptor NKp44, and inhibitory receptor NKG2A expression. It is also showed that the stimulation increases ovarian cancer’s NK cells cytotocicty compared to unstimulated NK cells (45,3% from 4,82%). Therefore, the results showed that peptide stimulation affect the expression of NK cells’ phenotype and receptors also increases NK cells’ cytotoxicity.