Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"ABSTRAK Pendahuluan. Kesulitan dalam tatalaksana defek tulang yang luas merupakan salah satu tantangan dewasa ini. Selain tatalaksananya yang kompleks juga dapat memberikan dampak jangka panjang negatif yang berat. Penggunaan BMP-2 dalam tatalaksana fraktur dengan defek tulang yang luas memegang peranan penting. BMP-2 berperan pada proses osteogenesis dan chondrogenesis dan menghambat osteoclastogenesis melalui RANKL signaling. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek dari perbedaan dosis BMP-2 terhadap penyembuhan fraktur dengan defek tulang yang luas. Metode. Penelitian dilakukan di Laboratorium Animal Gizi di FKUI dan Laboratorium Patologi Anatomi FKUI-RSCM, pada bulan Juli hingga September 2015. Desain penelitian adalah randomized post test control group. Sejumlah 25 ekor tikus putih Sprague Dawley dengan usia 3-4 bulan dan berat badan antara 250 ? 350 gram, dibagi secara acak menjadi kelompok kontrol hidroksiapatit (HA) saja dan kelompok kombinasi HA + BMP-2 1 μg/ml, HA + BMP-2 5 μg/ml, HA + BMP-2 10 μg/ml, HA + BMP-2 20 µg/ml. Tiap kelompok dilakukan tindakan berupa frakturisasi dengan defek tulang 10mm pada femur kanan dan dilakukan fiksasi interna dengan menggunakan intramedullary k-wire ukuran 1,4 mm secara retrograd. Setelah 6 minggu dilakukan penilaian secara histomorfometri, radiologis dan Scanning Electron Microscope (SEM). Hasil. Berdasarkan hasil penelitian secara histomorfometri ditemukan terdapat perbedaan rerata total area kalus yang bermakna diantara kelompok penelitian (p<0,001),terdapat perbedaan bermakna rerata area penulangan antara kelompok kontrol dengan kelompok 1 μg/ml, 5 μg/ml, 10 μg/ml, 20 μg/ml (masing-masing p=0,009, p=0,016, p=0,009 dan p=0,016), terdapat perbedaan bermakna rerata area kartilago antara kelompok kontrol dengan kelompok 1 μg/ml, 5 μg/ml, 10 μg/ml, 20 μg/ml (masing-masing p=0,009, p=0,009, p=0,009 dan p=0,028), terdapat perbedaan bermakna rerata area fibrosis antara kelompok kontrol dengan kelompok 1 μg/ml dengan kelompok kontrol dan 10 μg/ml(masing-masing p=0,047 dan p=0,009).Secara radiologis dengan RUST score didapatkan perbedaan bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok 1 μg/ml, 5 μg/ml, 10 μg/ml, 20 μg/ml (masing-masing p=0,005, p=0,006, p=0,005 dan p=0,006). Dengan SEM didapatkan gambaran kalus yang lebih homogen dan padat pada kelompok 10μg/ml dibandingkan dengan 5 μg/ml dan 20 μg/ml. Kesimpulan: Pemberian BMP-2 dapat menstimulasi proses penyembuhan fraktur pada defek tulang luas (critical bone defect) yang bermakna secara statistik, histomorfometri, radiologis maupun secara kualitatif dengan SEM. Terdapat dosis optimal dalam pemberian BMP-2.ABSTRACT Introduction: Difficulties in the management of extensive bone defects is one of today's challenges. It is not only complex treatment but also can provide long-term negative severe effects. The use of BMP-2 in the treatment of fractures with extensive bone defect plays an important role. BMP-2 plays a role in the process of osteogenesis and chondrogenesis and inhibits osteoclastogenesis via the RANKL signaling. This study aims to determine the effect of differences in doses of BMP-2 on the healing of the fracture with extensive bone defects. Methods: The study was conducted at the Laboratory of Animal Nutrition at the Faculty of Medicine University of Indonesia (FMUI) in July until September 2015. The study design was randomized posttest control group. A number of 25 Sprague Dawley rats aged 3-4 months and bodyweight between 250-350 grams, were randomly divided into a control group of hydroxyapatite (HA) alone and HA+BMP-2 1 µg / ml, HA+BMP -2 5 ug / ml, HA + BMP-2 10 µg / ml, HA + BMP-2 20 ug / ml. Each group carried out fracturization with 10mm bone defect in right femur and internal fixation by using intramedullary K-wire size of 1.4 mm retrograde. After 6 weeks we did histomorfometri assessment, radiological and Scanning Electron Microscope (SEM). Results: Based on the research results histomorfometrcally found there are differences in the mean total area of ​​callus significantly between the study group (p <0.001), there were significant differences in the mean area of ​​woven bone between the control group with group 1 ug / ml, 5 µg / ml, 10 µg / ml, 20 ug / ml (respectively p = 0.009, p = 0.016, p = 0.009 and p = 0.016), there were significant differences in the average area of ​​the cartilage between the control group with group 1 ug / ml, 5 µg / ml, 10 µg / ml, 20 ug / ml (respectively p = 0.009, p = 0.009, p = 0.009 and p = 0.028), there were significant differences in the average area of ​​fibrosis between the control group with group 1 ug / ml in the control group and 10 mg / ml (respectively -masing p = 0.047 and p = 0.009) .In radiologist assessment with RUST scores obtained significant differences between the control group and group 1 ug / ml, 5 µg / ml, 10 µg / ml, 20 µg / ml (respectively p = 0.005 , p = 0.006, p = 0.005 and p = 0.006). SEM features with callus more homogeneous and dense in the group of 10μg / mL compared with 5 ug / ml and 20 µg / ml. Conclusion: Administration of BMP-2 could stimulate the process of fracture healing in large bone defects (critical bone defect) which was statistically significant with histomorfometri assestment, radiological and qualitatively with the SEM. There is an optimal dose in the administration of BMP-2.;Introduction: Difficulties in the management of extensive bone defects is one of today's challenges. It is not only complex treatment but also can provide long-term negative severe effects. The use of BMP-2 in the treatment of fractures with extensive bone defect plays an important role. BMP-2 plays a role in the process of osteogenesis and chondrogenesis and inhibits osteoclastogenesis via the RANKL signaling. This study aims to determine the effect of differences in doses of BMP-2 on the healing of the fracture with extensive bone defects. Methods: The study was conducted at the Laboratory of Animal Nutrition at the Faculty of Medicine University of Indonesia (FMUI) in July until September 2015. The study design was randomized posttest control group. A number of 25 Sprague Dawley rats aged 3-4 months and bodyweight between 250-350 grams, were randomly divided into a control group of hydroxyapatite (HA) alone and HA+BMP-2 1 µg / ml, HA+BMP -2 5 ug / ml, HA + BMP-2 10 µg / ml, HA + BMP-2 20 ug / ml. Each group carried out fracturization with 10mm bone defect in right femur and internal fixation by using intramedullary K-wire size of 1.4 mm retrograde. After 6 weeks we did histomorfometri assessment, radiological and Scanning Electron Microscope (SEM). Results: Based on the research results histomorfometrcally found there are differences in the mean total area of ​​callus significantly between the study group (p <0.001), there were significant differences in the mean area of ​​woven bone between the control group with group 1 ug / ml, 5 µg / ml, 10 µg / ml, 20 ug / ml (respectively p = 0.009, p = 0.016, p = 0.009 and p = 0.016), there were significant differences in the average area of ​​the cartilage between the control group with group 1 ug / ml, 5 µg / ml, 10 µg / ml, 20 ug / ml (respectively p = 0.009, p = 0.009, p = 0.009 and p = 0.028), there were significant differences in the average area of ​​fibrosis between the control group with group 1 ug / ml in the control group and 10 mg / ml (respectively -masing p = 0.047 and p = 0.009) .In radiologist assessment with RUST scores obtained significant differences between the control group and group 1 ug / ml, 5 µg / ml, 10 µg / ml, 20 µg / ml (respectively p = 0.005 , p = 0.006, p = 0.005 and p = 0.006). SEM features with callus more homogeneous and dense in the group of 10μg / mL compared with 5 ug / ml and 20 µg / ml. Conclusion: Administration of BMP-2 could stimulate the process of fracture healing in large bone defects (critical bone defect) which was statistically significant with histomorfometri assestment, radiological and qualitatively with the SEM. There is an optimal dose in the administration of BMP-2."

"Pendahuluan: Fraktur akibat kecelakaan merupakan masalah kesehatan yang menduduki peringkat ke sembilan secara global dan diperkirakan akan menduduki peringkat ketiga pada tahun 2030. Dari seluruh kasus fraktur, kejadian delayed union berkisar antara 5-10%. Delayed union menimbulkan disabilitas, penurunan kualitas hidup, dan peningkatan biaya pengobatan. Saat ini, penanganan delayed union terbaik dengan bone graft masih terbatas persediaannya. Terapi mutakhir penanganan delayed union menggunakan sintesis osteoinduktif seperti BMP-2 sudah banyak diteliti dan digunakan namun biayanya sangat mahal. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektifitas citrus flavonoid dalam meningkatkan ekspresi BMP-2 dan VEGF sehingga dapat meningkatkan kualitas fracture healing pada model delayed union hewan coba tikus Sprague-Dawley.Material dan Metode: Uji eksperimental ini menggunakan 30 tikus Sprague-Dawley yang menjadi model delayed union dengan perlakuan stripping periosteum. Tikus dibagi ke dalam 3 kelompok, yaitu kelompok kontrol, kelompok yang diberikan citrus flavonoid 250 mcg, dan kelompok yang diberikan citrus flavonoid 500 mcg. Tikus dieuthanasia pada hari ke-15 dan hari ke-30 untuk melihat profil histomorfometrik, ekspresi BMP-2, dan ekspresi VEGF melalui aplikasi ImageScope.Hasil: Pada penelitian ini didapatkan area penulangan yang secara bermakna lebih luas pada kelompok 250 mcg dibandingkan dengan kelompok kontrol (p = 0.047) dan juga pada kelompok 500 mcg dibandingkan dengan kelompok kontrol (p = 0.047) pada hari ke-15. Pembentukan kalus pada hari ke-15 juga ditemukan lebih cepat pada kelompok 250 mcg dan kelompok 500 mcg dibandingkan dengan kontrol (p = 0.009, p = 0.009). Ekspresi BMP-2 paling tinggi didapatkan pada kelompok 250 mcg. BMP-2 secara bermakna lebih besar pada kelompok 250 mcg dibandingkan dengan kelompok kontrol baik pada hari ke-15 maupun hari ke-30 (p < 0.05). Selain itu, ekspresi BMP-2 pada kelompok 500 mcg juga ditemukan secara bermakna lebih besar dibandingkan kelompok kontrol namun hanya pada hari ke-30. Ekspresi VEGF terbesar didapatkan pada kelompok 500 mcg dengan perbandingan yang secara signifikan lebih besar daripada kelompok kontrol dan 250 mcg (p < 0.05). Penelitian ini menunjukkan ekspresi BMP-2 yang memiliki dosis terapeutik terbaik di 250 mcg dengan penambahan dosis yang menimbulkan efek negative pada produksi BMP-2. Selain itu, ekspresi VEGF ditemukan paling baik pada dosis 500 mcg sehingga terdapat perbaikan penyembuhan fraktur baik pada kelompok 250 mcg maupun 500 mcg.Kesimpulan: Citrus flavonoid meningkatkan penyembuhan fraktur melalui peningkatan ekspresi BMP-2 dan VEGF. Terjadi mekanisme negative feedback dari BMP-2 pada pemberian citrus flavonoid yang berlebihan.

---

Introduction: Fracture due to traffic accidents is ranked ninth among other problems in health sector and projected to be ranked third in 2030. Delayed union accounts for 5-10% of all fractures. It causes disability, lower quality of life, and increased cost of treatment. Currently, the ideal treatments of delayed union using bone graft application is still limited and sometimes inaccessible. Advanced alternative treatments using BMP-2 synthetics as osteoinductive factors is currently too expensive although it has been clinically proven by previous literatures. This study aimed to discover the effectivity of citrus flavonoid in increasing the expression of BMP-2 and VEGF to accelerate the fracture healing process of delayed union models of Sprague-Dawley rats.

Methods: This experimental study used 30 Sprague-Dawley rats that underwent periosteal stripping to create delayed union models. Subjects were allocated into three groups, namely control group, group with 250 mcg citrus flavonoid initial administration, and group with 500 mcg citrus flavonoid initial administration. The subjects were sacrificed in day 15 and day 30 to observe the histomorphometric profile, BMP-2 expression, and VEGF expression using ImageScope application.

Results: The area of lamellar bone was observed significantly higher in 250 mcg and 500 mcg groups compared to control group on day 15 (p = 0.047). The callus area showed similar result and significantly higher area were observed in 250 mcg and 500 mcg groups compared to control on day 15 (p = 0.009, p = 0.009). The highest BMP-2 expression was observed in 250 mcg group. Statistical test showed significant difference between 250 mcg with 500 mcg and 250 mcg with control groups (p < 0.05). The highest VEGF expression was seen in 500 mcg group, also with significant difference between 500 mcg group compared with 250 mcg and control on day 15. This study found the best therapeutic dose for BMP-2 was 250 mcg while the best therapeutic dose for VEGF was 500 mcg. Excessive addition of citrus flavonoid caused negative impact on BMP-2 expression. Markedly accelerated fracture healing was observed in both 250 mcg and 500 mcg groups.

Conclusion: Citrus flavonoid accelerated the fracture healing process by increasing the expression of BMP-2 and VEGF. There is a negative feedback mechanism of BMP-2 expression when excessive dose of citrus flavonoid was given."

"Tujuan: Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi korelasi antara polimorfisme gen Bone Morphogenetic-2 (BMP-2) rs1005464 dan rs235768 dengan pertumbuhan dan perkembangan kraniofasial pada maloklusi skeletal kelas I, II, dan III; dan untuk mengetahui kerentanan Bone Morphogenetic Protein-2 (BMP-2) terhadap tipe wajah dan arah pertumbuhan. Bahan dan Metode: Populasi subjek terdiri dari 150 pasien ortodontik dewasa yang menjalani perawatan ortodontik di Klinik Spesialis Ortodontik Fakultas Kedokteran Gigi dan Mulut Universitas Indonesia. Subjek dibagi menjadi beberapa kelompok berdasarkan kasus maloklusi skeletal kelas I, II, dan III; tipe wajah (mesofacial, dolichofacial, brachyfacial) dan arah pertumbuhan wajah (normal, hyperdivergent, hypodivergent) dikonfirmasi dengan radiografi sefalometrik lateral. Ekstraksi DNA dilakukan dengan potongan rambut subjek, metode polymerase chain reaction, dan Sanger sequencing digunakan untuk menganalisis subjek. Koefisien korelasi Pearson dan regresi logistik berganda dihitung untuk menganalisis korelasi dan kerentanan BMP-2 rs1005464 dan rs235768, pohon filogenetik dibuat untuk mengevaluasi evolusi gen. Hasil: Distribusi genotip BMP-2 rs1005464 dan rs235768 menunjukkan distribusi yang konsisten, menunjukkan bahwa varian tersebut dapat menjadi bioindikator genetik pola pertumbuhan dan perkembangan kraniofasial. Koefisien korelasi Pearson menunjukkan bahwa BMP-2 rs1005464 dan rs235768 berkorelasi signifikan dan kerentanan dengan pasien maloklusi skeletal kelas I, II, dan III. Sanger sequencing menunjukkan adanya distribusi yang konsisten polimorfisme gen BMP-2 rs1005464 dan rs235768 dan pohon filogenetik menunjukkan BMP-2 rs1005464 memiliki kecenderungan maloklusi skeletal kelas I dan III sedangkan BMP-2 rs235768 terhadap maloklusi skeletal kelas II. Kesimpulan: Studi ini menunjukkan bahwa BMP-2 rs1005464 dan rs235768 berkorelasi signifikan, dan kerentanan terhadap pola pertumbuhan dan perkembangan Kraniofasial pada Maloklusi Skeletal kelas I, II, dan III.

---

Objectives:The purpose of this study was to evaluate the correlation between Bone Morphogenetic-2 (BMP-2) gene polymorphisms rs1005464 and rs235768 with craniofacial growth and development in skeletal malocclusion classes I, II, and III; and to determine the susceptibility of Bone Morphogenetic Protein-2 (BMP-2) against the facial types and growth direction. Materials and Methods: The subject population consisted of 150 adult orthodontic patients who underwent orthodontic treatment at the Orthodontic Clinic Specialist for the Dental Oral Education University of Indonesia. Subjects were divided into groups based on cases of skeletal malocclusion classes I, II, and III; facial types (mesofacial, dolichofacial, brachyfacial) and the direction of facial growth (normal, hyperdivergent, hypodivergent) were confirmed by lateral cephalometric radiograph. DNA extraction was carried out by haircuts of the subjects, polymerase chain reaction method, and Sanger sequencing was used to analyze the subjects. Pearson correlation coefficients and multiple logistic regression were calculated to analyze the correlation and susceptibility of BMP-2 rs1005464 and rs235768, a phylogenetic tree was made to evaluate the evolution of the gene. Result: The genotyping distribution of BMP-2 rs1005464 and rs235768 showed a consistent distribution, indicating that these variants can be a genetic bioindicator of the growth pattern and development of craniofacial. Pearson correlation coefficients indicated that the BMP-2 rs1005464 and rs235768 were significantly correlated and susceptibility with skeletal malocclusion classes I, II, and III patients. Sanger sequencing showed there was a consistent distribution of gene polymorphisms of BMP-2 rs1005464 and rs235768 and the phylogenetic tree shows BMP-2 rs1005464 has a tendency to skeletal malocclusion classes I and III while the BMP-2 rs235768 against skeletal malocclusion class II. Conclusion: This study indicated that the BMP-2 rs1005464 and rs235768 are significantly correlated, and susceptibility to growth patterns and development of Craniofacial in Skeletal Malocclusion classes I, II, and III."

"Experimental studies have shown that dental pulp tissue has potential to regenerate dentine in response to adversestimuli, such as caries and associated operative procedures. However, the potential of dental pulp regeneration seems tobe limited by regenerative capacity of the cell involved. In this study, we report the effect of transfection of arecombinant plasmid containing human BMP-2 gene in proliferation and differentiation of dental pulp tissue in vitro.The regenerative capacity was analyzed by ALP production and calcium content. Results showed that the transfecteddental pulp cell was able to differentiate into the odontoblast phenotype, indicating the presence of odontoblastprogentitor cells in dental pulp tissue."

"Defek tulang luas belum memiliki solusi memuaskan walaupun dengan kemajuan teknik operasi dan agen biologis terbaru. Penggunaan sel punca mesenkimal (SPM) menunjukkan proliferasi dan diferensiasi minimal pasca implantasi. Sekretom dapat menjadi alternatif SPM sebagai produk siap pakai dengan efek osteoinduktor yang poten. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek sekretom pada penyembuhan defek luas tulang panjang pada tikus Sprague Dawley (SD) secara radiologis dan histologis. Sebanyak 60 ekor tikus SD dibagi menjadi 5 kelompok yaitu kontrol, SPM, sekretom, SPM+sekretom, dan SPM+sekretom+BMP-2. Setelah 2 dan 4 minggu, dilakukan pemeriksaan radiologis dengan skor RUST (Radiographic Union Score for Tibial) dan histomorfometri dengan Image J (total kalus, area penulangan, tulang rawan, fibrosis, dan void). Pada berbagai pasase dan waktu, BMP-2 hanya terdapat dalam kadar yang sangat kecil di dalam sekretom. Pemberian sekretom lebih superior pada kelompok lain secara radiologis dan histomorfometris pada setiap waktu. Pemberian sekretom mengandung banyak faktor pertumbuhan dan sitokin yang dapat mempercepat dan meningkatkan penyembuhan tulang. Implantasi SPM xenogenik dapat memperpanjang proses inflamasi pada dan kombinasinya dengan sekretom memberikan efek toksistas terhadap penyembuhan tulang Sekretom, baik digunakan secara tunggal maupun kombinasi dengan SPM dan BMP-2 merupakan agen osteoinduktor baru yang poten dalam perbaikan tulang pada model tikus dengan defek tulang luas.

---

Critical sized defect (CSD) has been a problem despite advanced surgical techniques and new biologic agent. Recent literatures have shown that bone marrow derived Mesenchymal Stem Cell (BM-MSC) proliferate and differentiate only in a small amount upon implantation. Meanwhile secretome which previously was considered as waste product during MSC culture, may now presents considerable advantages over living cells in terms of potency, manufacturing, storage, cost, and potential as a ready-to-go osteoinductor agent. The study aimed to determine the effect of secretome in the healing of CSD SD (Sprague Dawley) rat by radiographic and histologic analysis. A total of 60 SD-rat were divided into 5 groups including, control (normal saline), MSC, secretome, MSC+secretome, MSC+secretome+BMP-2. After 2 and 4 weeks, RUST (Radiographic Union Score for Tibia) and histomorphometric (callus, osseous, cartilage, fibrous and void area) evaluation using Image J are compared. Secretome group is superior to other group significantly in all parameters at all time. Implantation of xenogenic MSC might prolong the inflammation phase of bone healing while the MSC+secretome group suggest the toxicity effect decreasing the bone formation area. Secretome, whether used solely or combined with BM-MSC and BMP-2, is a novel, potent bone-healing agent for CSD in rat models."

"Pendahuluan: Penanganan nonunion dan delayed union bukanlah penanganan yang murah dan mudah. Berbagai metode telah dilakukan untuk mengatasi masalah tersebut. Beras angkak terbukti memiliki peranan dalam penyembuhan fraktur. Beras angkak, mengandung monakolin, suatu senyawa dengan aktivitas sebanding lovastatin. Pemberian statin secara lokal dan oral terbukti meningkatkan penyembuhan tulang dengan menginduksi diferensiasi osteoblas melalui peningkatan ekspresi BMP-2. Penelitian ini dilakukan untuk membuktikan efektivitas monakolin pada beras angkak dalam meningkatkan ekspresi BMP-2 dan penyembuhan fraktur pada model delayed union tikus sprague- dawley. Material dan Metode: Studi eksperimental pada 24 hewan coba tikus putih Sprague-Dawley (SD) yang telah mengalami patah tulang femur disertasi dengan gangguan vaskularisasi (model delayed-union). Hewan coba dibagi menjadi empat kelompok (n=6) terdiri dari; kelompok pemberian ekstrak monakolin selama empat minggu (PM4), kelompok pemberian ekstrak monakolin selama dua minggu (PM2), kelompok kontrol empat minggu (KM4) dan kelompok kontrol dua minggu (KM2). Setelah dilakukan sacrifice pada minggu kedua dan keempat, dilakukan penilaian ekspresi BMP-2 secara semikuantitatif dengan pewarnaan imunohistokimia melalui skor imunoreaktif (IRS). Analisis histomorfometri untuk menilai penyembuhan fraktur dengan mengukur persentase area fibrosa, tulang rawan dan tulang imatur. Hasil: Pada evaluasi parameter IRS dan histomorfometri didapatkan ekspresi BMP-2 lebih tinggi (p=0.03), persentase area fibrosa lebih sedikit (p=0.005) dan area tulang rawan lebih besar (p=0.04) pada kelompok PM2 dibandingkan dengan kelompok KM2. Selain itu didapatkan pula secara ekspresi BMP-2 lebih tinggi (p=0.011), presentase area tulang imatur lebih besar (p=0.01), dan presentase area fibrosa lebih kecil (p=0.03) pada kelompok PM4 dibandingkan dengan kelompok KM4. Di sisi lain, didapatkan presentase area fibrosa lebih kecil (p=0.02), area tulang rawan lebih sedikit (p=0.05), dan peningkatan area tulang imatur lebih besar (p=0.04) pada kelompok PM4 dibandingkan dengan kelompok PM2. Ekspresi BMP-2 sama-sama meningkat pada kelompok PM2 dan PM4. Kesimpulan: Pemberian monakolin pada beras angkak pada model delayed-union tikus Sprague Dawley terbukti meningkatkan ekspresi BMP-2 dan meningkatkan penyembuhan fraktur.

---

Introduction: Management of nonunion and delayed union could be difficult and expensive. Various methods have been studied to overcome this problem. Red-yeast-rice has a role in fracture healing. Red-yeast-rice contains monacolin, which has similar activity to lovastatin. Local application and oral administration of statins have been shown to improve bone healing by inducing osteoblast differentiation and matrix production via increasing BMP-2 expression. This study was conducted to prove the effectiveness of monacolins inside red-yeast-rice in increasing the expression of BMP-2 and fracture healing. Methods: This experimental animal study was conducted using 24 delayed union models Sprague-Dawley (SD) Rats. There were 4 groups (n=6), consist of; 4-weeks-given-monacolin group (PM4), 2-weeks-given-monacolin group (PM2), 4-weeks-control group (PM2) and 2-weeks control group (KM2). After they were sacrificed in the second and fourth weeks, immunohistochemical staining was conducted to evaluate BMP-2 expression by Immunoreactive Score (IRS). The histomorphometric evaluation was also conducted to evaluate fracture healing by measuring fibrous area, cartilage area, and woven bone area percentage. Results: There was significantly higher BMP-2 expression (p=0.03), less fibrous area (p=0.05), and larger cartilage area (p= 0.04) in the PM2 group compared to the KM2 group. There was significantly higher expression of BMP-2 (p=0.011), larger woven bone area (p=0.01), and less fibrous area (p = 0.03) in the PM4 group compared to the KM4 group. It was also presented, there was a significantly less fibrous area (p=0,02), larger cartilage area (p=0.05), and larger woven bone area (p=0.04) in the PM4 group compared to the PM2 group. The expression of BMP-2 in the PM2 group was as high as the PM4 group. Conclusion: Monacolin in red-yeast-rice effectively increased BMP-2 expression and fracture healing in the delayed union model of SD rats."

"Tulang normal mampu mengalami tahapan regenerasi kompleks dalam penyembuhan fraktur secara alami. Akan tetapi, terdapat beberapa kasus fraktur yang tidak dapat mengandalkan perbaikan tulang secara alami sehingga terjadi kegagalan penyatuan tulang. Berbagai pendekatan klinis dilakukan untuk meningkatkan regenerasi tulang dalam penyembuhan fraktur namun masih terbatas dan memiliki berbagai kekurangan. Sel punca mesenkimal (SPM) dan bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) merupakan faktor yang berperan penting dalam regenerasi dan perbaikan tulang, terutama dalam proses osteogenesis. Salah satu alternatif pengobatan tulang yang banyak dikembangkan adalah mengkombinasikan kedua faktor tersebut untuk meningkatkan kemampuan osteogenesis SPM. Penelitian ini berfokus pada pengembangan rekombinan BMP-2 pada sekretom SPM melalui rekayasa genetik dengan vektor lentivirus. Plasmid konstruksi vektor lentivirus pembawa gen BMP-2 yang dipakai terdiri dari plasmid transfer, plasmid packaging, plasmid regulatory dan plasmid envelope, yang merupakan kombinasi lentivirus generasi kedua ke ketiga. Titer vektor lentivirus yang berhasil diproduksi pada sel HEK293T sebesar 5.48×1010 copies/mL pada hari ke-2 dan 1.42×1010 copies/mL pada hari ke-4. SPM transduksi vektor lentivirus mengalami peningkatan ekspresi gen BMP-2 dengan hasil transduksi 100 MOI (4,23±0,22) lebih tinggi daripada 50 MOI (2,49±0,07). Sistem ekspresi gen inducible tet-off pada SPM dapat menekan ekspresi gen BMP-2 dengan pemberian doxycycline 100 ng/mL dan terjadi upregulasi ekspresi gen pasca penghilangan doxycycline. Rekombinan BMP-2 pada SPM terproduksi pada intraseluler (50 MOI: 1015,2±36 pg/mL dan 100 MOI: 992,5±33,9 pg/mL) namun sangat sedikit yang dapat tersekresi pada ekstraseluler, yaitu 84,5±6,9 pg/mL dan 75,8±3,4 pg/mL berturut-turut pada perlakuan 50 dan 100 MOI pada CM jika dibandingkan dengan NT. Rekombinan BMP-2 dalam sekretom SPM tidak memberikan efek signifikan dalam peningkatan diferensiasi osteogenik dibandingkan dengan medium induksi diferensiasi osteogenik komersial terstandar. Perlu dilakukan studi lanjutan terkait kapabilitas sekresi rekombinan BMP-2 yang juga berhubungan dengan fungsionalitas rekombinan BMP-2 secara biologis.

---

Normal bones can do complex regeneration stages in natural fracture healing. However, some fracture cases cannot rely on natural bone repair, failing bone union. Various clinical approaches have been used to increase bone regeneration in fracture healing. However, there are still many limitations and various shortcomings. Mesenchymal stem cells (MSCs) and bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) play an important role in bone regeneration and repair, especially in osteogenesis. One alternative bone treatment that has been developed is to combine these two factors to increase the osteogenesis ability of MSCs. This research focuses on developing recombinant BMP-2 in the SPM secretome through genetic engineering by lentivirus vectors. The construction of the lentivirus vector plasmid carrying the BMP-2 gene consists of a transfer plasmid, a packaging plasmid, a regulatory plasmid, and an envelope plasmid, which is classified into a second to third-generation lentivirus transition. The lentivirus vector titer that was successfully produced in HEK293T cells was 5.48×1010 copies/mL on day 2 and 1.42×1010 copies/mL on day 4. Lentivirus vector transduced SPM experienced an increase in BMP-2 gene expression with transduction results of 100 MOI (4.23 ± 0.22) higher than 50 MOI (2.49 ± 0.07). The inducible tet-off gene expression system in SPM can suppress BMP-2 gene expression by administering 100 ng/mL doxycycline and upregulation of gene expression occurs after removing doxycycline. Recombinant BMP-2 in MSCs was produced intracellularly (50 MOI: 1015.2 ± 36 pg/mL and 100 MOI: 992.5 ± 33.9 pg/mL) but secreted extracellularly in low quantity, yaitu 84,5±6,9 pg/mL dan 75,8±3,4 pg/mL in 50 and 100 MOI group respectively. Recombinant BMP-2 in the SPM secretome did not significantly increase osteogenic differentiation compared with standard commercial osteogenic differentiation induction media. Further studies are needed regarding the secretion capability of recombinant BMP-2 which is also related to the biological functionality of recombinant BMP-2"

"Pendahuluan: Defek tulang kritis merupakan masalah yang menantang bagi ahli bedah ortopedi. Hingga saat ini, belum terdapat konsensus mengenai perlakuan tatalaksana terbaik untuk defek tulang kritis. Di antara berbagai solusi yang diusulkan, recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) adalah osteoinduktor yang paling poten, dan telah menunjukkan hasil yang menjanjikan. Penelitian sebelumnya seringkali menggunakan rhBMP-2 yang didapatkan dari sel ovarium hamster Cina. Namun, rhBMP- 2 yang didapatkan dari sel ovarium hamster Cina ini memiliki berbagai kekurangan seperti biaya tinggi dan hasil produksi yang rendah. Baru-baru ini, rhBMP-2 yang berasal dari Escherichia coli semakin banyak digunakan karena hasil panen yang tinggi dan biaya yang rendah; namun, protein tersebut diekspresikan sebagai badan inklusi, yang memerlukan pemrosesan ekstensif untuk menghasilkan protein bioaktif. Untuk mengatasi kendala-kendala ini, diperlukan metode produksi rhBMP-2 yang efisien. Sampai saat ini, belum terdapat penelitian yang mengevaluasi penggunaan vektor adenovirus untuk transfer gen rhBMP-2 ke sel punca mesenkimal asal jaringan adiposa (SPM-AD) pada model defek tulang kritis pada tikus Sprague-Dawley. Penelitian ini adalah studi eksperimental yang mengevaluasi efektivitas rhBMP-2 yang berasal dari SPM-AD yang direkayasa secara genetik pada model defek tulang kritis pada tikus Sprague-Dawley.Metode: Penelitian ini menggunakan tikus Sprague Dawley sebanyak 36 ekor. Dibuat cacat tulang berdiameter 5 mm terjadi pada diafisis femur pada setiap tikus. Hewan- hewan tersebut dibagi menjadi empat kelompok yang masing-masing kelompok terdiri dari 9 ekor tikus. Kelompok pertama mendapatkan rhBMP-2 yang berasal dari SPM-AD yang dimodifikasi secara genetik dengan granul hidroksiapatit (HA) (kelompok rhBMP- 2), kelompok kedua mendapatkan sekretom SPM-AD dan granul HA (kelompok sekretom AD-MSC), kelompok ketiga mendapatkan granul HA (kelompok HA), dan yang keempat adalah kelompok kontrol. Adenovirus digunakan sebagai vektor transfer gen untuk mentransduksi rhBMP-2 ke SPM-AD. Larutan akhir yang digunakan dalam penelitian ini terdiri dari campuran lisat dan sekretom SPM-AD dengan perbandingan 2:1, dan konsentrasi akhir rhBMP-2 adalah 132,33 pg/mL. Tikus dikorbankan 8 minggu setelah operasi. Tulang femur dipanen dan diperiksa nilai protein Indian hedgehog (Ihh), parameter histomorfometri, dan load to failure.Hasil dan Pembahasan: Selama periode pengamatan, masing-masing terdapat satu, dua, dan dua ekor tikus mati pada kelompok rhBMP-2, HA, dan kontrol. Kelompok rhBMP-2 memiliki protein Ihh lebih tinggi dibandingkan kelompok HA dan kontrol. Kelompok rhBMP-2 juga memiliki total area kalus dan nilai load to failure yang lebih tinggi dibandingkan ketiga kelompok lainnya. Proses penyembuhan yang unggul dari kelompok rhBMP-2 kemungkinan dihasilkan dari sifat rhBMP-2 itu sendiri yang mendorong diferensiasi sel punca mensenkimal menjadi osteoblas, sehingga menghasilkan regenerasi tulang.Kesimpulan: Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa penggunaan rhBMP-2 yang berasal dari SPM-AD yang dimodifikasi secara genetik berhasil menatalaksana defek tulang kritis pada tikus Sprague-Dawley.

---

Introduction: Critical-sized bone defects (CSBDs) remain challenging problem for orthopaedic surgeons. To date, there are no consensus regarding the best treatment for such entity.

Among various solutions proposed, recombinant human bone morphogenetic

protein-2 (rhBMP-2) is the most potent osteoinductor, and it has shown promising results. Early orthopaedic studies used mammalian cell-derived rhBMP-2, especially Chinese hamster ovary (CHO) cells. However, CHO cell-derived rhBMP-2 presents disadvantages such as high cost and low production yield. Recently, Escherichia coli- derived rhBMP-2 has been increasingly used owing to the high yield and low cost; however, the protein is expressed as inclusion bodies, which need extensive processing involving isolation from cell, solubilization, refolding and purification to produce the bioactive proteins. To overcome these obstacles, an efficient method for producing rhBMP-2 is required. To date, there is no study that has evaluated the use of adenovirus vector for gene transfer of rhBMP-2 to adipose-derived mesenchymal stem cells (AD-

MSCs)

in CSBDs model in Sprague-Dawley rats. This is an experimental study that evaluated the efficacy of rhBMP-2 derived from genetically-modified AD-MSCs in CSBDs model in Sprague-Dawley rats.

Methods: A total of 36 Sprague Dawley rats were examined in this study. A bone defect of 5 mm in diameter was created in femoral diaphysis in each of the rat. The animals were divided into four groups of 9 rats each. The first group received rhBMP-2 derived from genetically-modified AD-MSCs with hydroxyapatite (HA) granules (rhBMP-2 group), the second received AD-MSCs secretome and HA granules (AD-MSCs secretome group), the third received HA granules (HA group), and the fourth was control group. Adenoviruses were used as gene transfer vectors to transduce rhBMP-2 to AD-MSCs. The final solution consisted of AD-MSCs lysate and their secretome with ratio of 2:1, and the concentration of rhBMP-2 was 132.33 pg/mL. The rats were sacrificed 8 weeks after the surgery. The femurs were harvested and submitted for Indian hedgehog (Ihh) protein, histomorphometric parameters, and load to failure analyses.

Results and Discussion: During the observation period, one, two, and two rats died in the rhBMP-2, HA, and control groups, respectively. The rhBMP-2 group had higher Ihh protein compared to HA and control groups. The rhBMP-2 group also had higher callus total area, and load to failure value compared to the other three groups. The superior healing process from the rhBMP-2 group might be due to the property of rhBMP-2 itself which promotes differentiation of mesenchymal stem cells into osteoblasts, resulting in bone regeneration.

Conclusion: The results of this study indicate that the use of rhBMP-2 derived from genetically-modified AD-MSCs could successfully treat CSBDs in Sprague-Dawley rats."