Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Latar Belakang: Prevalensi obesitas dan overweight yang tinggi baik di Indonesia maupun global menjadi masalah yang perlu di waspadai karena dapat mengarah kepada penyakit metabolik lainnya. Respon adaptasi sel terhadap perubahan pH ekstraseluler (pHe) perlu dipertahankan untuk dapat menjalankan fungsi normal sel. Kondisi obesitas dan asidifikasi pHe dapat menyebabkan perubahan fisiologi seluler dan menyebabkan dampak negatif seperti penyakit metabolik. Penelitian ini akan menganalisis dampak dari asidifikasi ekstraseluler sel mononuklear darah tepi pada orang dewasa muda dengan IMT>23 terhadap viabilitas sel, kadar superoksida, dan peroksida melihat studi in vitro tentang respon adaptasi sel terhadap asidifikasi pHe masih terbatas. Metode: Sampel darah diambil dan dilakukan isolasi SMDT. SMDT kemudian dikultur pada berbagai pH medium yang diatur menjadi 7,4; 7,0; dan 6,6 selama 72 jam. Tingkat keasaman medium kultur diatur menggunakan 0,01 M asam klorida (HCl) dan 0,01 M natrium hidroksida (NaOH) yang diukur dengan pH meter dan medium kultur diganti setiap 24 jam. Setelah dikultur, sel di harvest dan diberikan perlakuan untuk masingmasing parameter. Viabilitas sel merupakan perbandingan jumlah sel hidup setelah dan sebelum dikultur dengan jumlah sel/ml dihitung menggunakan metode eksklusi trypan blue, kadar superoksida diukur dengan menggunakan dihydroethidium (DHE) probe, dan kadar hidrogen peroksida menggunakan 2’-7’-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) probe. Nilai perubahan pH ekstraseluler (ΔpHe) juga dihitung setelah kultur asidifikasi selama 72 jam untuk melihat respon adaptasi sel. Hasil: Terjadi peningkatan ΔpHe setelah kultur asidifikasi ekstraseluler di setiap kelompok pH setelah 72 jam. Tidak terdapat perbedaan persentase viabilitas sel setelah kultur asidifikasi 72 jam pada setiap kelompok pH serta didapatkan kadar superoksida yang meningkat seiring penurunan pH baik pada pH 7,0 maupun 6,6 sementara tidak terdapat perbedaan kadar hidrogen peroksida yang signifikan pada setiap kelompok pH. Kesimpulan: SMDT menunjukkan nilai perubahan pH ekstrasel yang masih baik saatdiberi perlakuan asidifikasi ekstraseluler, tetapi terjadi peningakatan rerata kadarsuperoksida yang signifikan dan tidak terdapat perbedaan rerata kadar hidrogen peroksidaserta viabilitas sel yang signifikan.

---

Introduction: The high prevalence of obesity and overweight in Indonesia and globally is a problem that needs to be watched out for because it can lead to other metabolic diseases. The cell adaptation response to changes in extracellular pH (pHe) needs to be maintained to be able to carry out normal cell functions. Obesity and pHe acidification can cause changes in cellular physiology and cause negative impacts such as metabolic diseases. This study will analyze the impact of extracellular acidification of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in young adults with BMI> 23 on cell superoxide and peroxides levels considering that in vitro studies of cell adaptation responses to pHe acidification are still limited. Methods: Blood samples were taken and SMDT was isolated. SMDT was then cultured at various pH media adjusted to 7.4; 7.0; and 6.6 for 72 hours. The acidity level of the culture medium was adjusted using 0.01 M hydrochloric acid (HCl) and 0.01 M sodium hydroxide (NaOH) measured with a pH meter and the culture medium was replaced every 24 hours. After culture, the cells were harvested and given treatment for each parameter. Cell viability is the ratio of the number of living cells after and before culture with the number of cells/ml calculated using the trypan blue exclusion method, superoxide levels were measured using a dihydroethidium (DHE) probe, and hydrogen peroxide levels using a 2’-7’-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) probe. The value of extracellular pH changes (ΔpHe) was also calculated after acidification culture for 72 hours to see the cell adaptation response. Results: There was an increase in ΔpHe after extracellular acidification culture in each pH group after 72 hours. There was no difference in the percentage of cell viability after 72 hours of acidification culture in each pH group and superoxide levels increased with decreasing pH at both pH 7.0 and 6.6 while there was no significant difference in hydrogen peroxide levels in each pH group. Conclusion: PBMC showed a fairly good homeostatic response when treated with extracellular acidification, but there was a significant increase in the average superoxide levels and there was no significant difference in the average hydrogen peroxide levels and viability."

"Latar Belakang: pH ekstraseluler (pHe) perlu dipertahankan dalam sel normal untuk menjalankan fungsi sel dengan baik. Adanya perubahan di lingkungan seluler meliputi asidifikasi akan berdampak pada fisiologi sel dan menginduksi kematian sel. Namun, studi terntang pengaruh asidifikasi pHe terhadap stres oksidatif dan regulasinya masih terbatas. Tujuan penelitian ini adalah menganalisis pengaruh asidifikasi pHe PBMCs terhadap stres oksidatif dan viabilitas serta kaitannya dengan ekspresi mRNA CA9 dan HIF-1alfa.Metode: PBMC dikultur dengan berbagai pH medium selama 24, 48, dan 72 jam. pH medium kultur diatur menjadi pH 7,4, 7,2, 7,0, dan 6,6 menggunakan 0,01 HCl. Viabilitas sel dihitung menggunakan Trypan blue. Kadar ROS diukur menggunakan DHE dan DCFH-DA probes. Ekspresi mRNA HIF-1alfa, CA9, dan MnSOD dianalisis menggunakan qRT-PCR. Aktivitas spesifik MnSOD dianalisis menggunakan RanSOD Kit dan aktivitas CAT juga dianalisis. Konsentrasi MDA diukur menggunaan metode Wills.Hasil: pHe meningkat secara bertahap pada waktu inkubasi 24, 48, dan 72 jam. Kadar ROS dan ekspresi mRNA HIF-1alfa, CA9, dan MnSOD meningkat, sementara aktivitas MnSOD menurun dan CAT meningkat. Konsentrasi MDA meningkat dan berdampak pada penurunan viabilitas sel.Kesimpulan: Asidifikasi pHe PBMCs berdampak pada peningkatan stres oksidatif dan penurunan viabilitas sel. Selain itu, respons pada mRNA CA9 dan HIF-1alfa masih cukup baik.

---

Background: The extracellular pH (pHe) needs to be maintained in normal cells to carry out cell functions properly. Changes in the cellular environment including acidification affect to cell physiology and induce cell death. However, studies about effect of pHe acidification on oxidative stress and its regulation are still limited. This study aimed to analyze the effect of pHe acidification of PBMCs on oxidative stress and cell viability with expressions of CA9 and HIF-1alpha mRNA.

Methods: PBMCs were cultured with various pH medium for 24-, 48-, and 72-h. The pH of culture medium was adjusted to pH 7.4, 7.2, 7.0, and 6.6 by using 0.01 M HCl. Cell viability was calculated using trypan blue. ROS levels was measured using DHE and DCFH-DA probes. HIF-1alpha, CA9, dan MnSOD mRNA expressions were analyzed using qRT-PCR. MnSOD spesific activity was analyzed using RanSOD Kit and CAT acitivity was analyzed. MDA concentration was measured by Wilss method.

Results: pHe increased gradually at 24-, 48-, and 72-h incubation. ROS levels and HIF-1alpha, CA9, MnSOD mRNA expressions were increased, while the MnSOD spesific activity decreased and CAT activity increased. MDA concentration incease and had an impact on decreasing cell viability.

Conclusions: pHe acidification increased oxidative stress levels and decreased cell viability. In additon, PBMCs had a response to of CA9 and HIF-1alpha mRNA."

"Lingkungan mikro tumor berperan penting dalam meregulasi sifat kepuncaan, proliferasi, ketahanan terhadap apoptosis, dan metabolisme sel punca kanker. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis efek modulasi lingkungan ekstraseluler melalui kondisi hipoksia dan alkalinisasi pada metabolisme glukosa dan ketahanan hidup sel punca kanker CSC payudara manusia CD24-/CD44 . Pada penelitian in vitro eksperimental ini, CSC payudara manusia dikultur pada kondisi hipoksia dan kondisi alkali. Kultur sel diinkubasi selama 30 menit, 4, 6, 24, dan 48 jam pada suhu 37 C kemudian dilakukan analisis status metabolisme glukosa, regulasi pH, ketahanan hidup, dan penanda kepuncaan serta pluripotensi CSC payudara menggunakan berbagai teknik yaitu qRT-PCR, kolorimetri, fluorometri, dan aktivitas enzimatik. Kondisi hipoksia menyebabkan peningkatan ekspresi mRNA dan konsentrasi HIF1? sehingga mengaktivasi gen-gen yang berada di bawah regulasinya. Hipoksia juga menyebabkan penekanan proliferasi namun meningkatkan ketahanan terhadap apoptosis. Alkalinisasi menyebabkan peningkatan pH ekstraseluler pHe yang menstimulasi peningkatan aktivitas dan ekspresi mRNA gen regulator pH seluler. Status metabolisme menunjukkan peningkatan aktivitas glikolisis anaerobik disertai peningkatan ekspresi transporter GLUT1. Alkalinisasi menyebabkan penekanan proliferasi CSC payudara bahkan kematian sel. Sebagai kesimpulan, modulasi lingkungan ekstraseluler baik melalui hipoksia maupun alkalinisasi dapat meningkatkan aktivitas glikolisis yang selanjutnya mempengaruhi ketahanan hidup dan kepuncaan CSC payudara CD24-/CD44.

---

This study was aimed to analyze the effect of extracellular pH and O2 level modulation on glucose metabolism and survival of the human CD24 CD44 breast cancer stem cells BCSCs . The primary BCSCs CD24 CD44 cells were cultured under hypoxia 1 O2 or under supplementation of sodium bicarbonate 100 mM for various periods. After each incubation periods, the pH regulation, glucose metabolism, survival, stemness and pluripotency markers were analyzed using various techniques including qRT PCR, colorimetry, fluorometry, dan enzymatic reactions. This study demonstrated that hypoxia caused an increase of HIF1 mRNA expression and protein level, and shifted metabolic states to be more glycolytic. Hypoxia also promoted the suppression of cell proliferation and induced the apoptosis evasion. Alkalinization caused a high pHe then stimulated an increase of mRNA and activity of cellular pH regulator that lead to upregulation of anaerobic glycolysis. Alkalinization inhibited BCSCs proliferation and promoted apoptosis. To conclude, modulation of the extracellular environment of human BCSCs through hypoxic condition and alkalinization could shift the metabolic state toward the anaerobic glycolysis which in turn affected the proliferation and survival."