Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"ABSTRAKPendahuluan: Keloid adalah tumor jinak pada kulit yang ditandai denganpeningkatan deposisi kolagen yang disebabkan oleh tingginya aktivitas danproliferasi fibroblas. Karakteristik utama dari keloid adalah berada pada kondisihipoksia. Hypoxia inducible factor-1alpha HIF-1? dan HIF-2? merupakansubunit faktor transkripsi HIF-1 dan HIF-2 yang berperan penting pada adaptasiterhadap kondisi hipoksia. Kondisi hipoksia juga memicu sel memproduksireactive oxygen species ROS yang dapat ditangkal oleh sitoglobin Cygb . Padakeloid, Cygb juga berperan pada sintesis kolagen. Penelitian lain membuktikanbahwa terdapat situs pengikatan promoter HIF-1 pada hypoxia response element HRE Cygb, sedangkan situs pengikatan HIF-2 pada Cygb belum diketahui. HIF-1? dan HIF-2? juga diketahui berperan menginduksi ekspresi gen yang berperanpada proliferasi. Keduanya diketahui mengatur proliferasi sel pada beberapa jeniskanker. Namun, peran HIF-1? dan HIF-2? terhadap ekspresi Cygb dan proliferasifibroblas pada keloid belum diketahui. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuanmengetahui peran HIF-1? dan HIF-2? terhadap ekspresi sitoglobin dan proliferasifibroblas pada keloid, dengan melakukan penghambatan HIF-1? dan HIF-2? padafibroblas keloid menggunakan inhibitor HIF berupa ibuprofen. Metode:Pemeriksaan dilakukan terhadap ekspresi mRNA dan kadar protein HIF-1?, HIF-2?, dan sitoglobin, menggunakan metode qRT-PCR dan ELISA, serta proliferasisel menggunakan metode trypan blue exclussion assay setelah diberi ibuprofendan dibandingkan dengan kontrol yang tidak diinduksi dengan ibuprofen. Hasil:Penghambatan HIF-1? menyebabkan terjadinya penurunan ekspresi mRNA Cygbdan proliferasi fibroblas pada keloid. Hal ini membuktikan bahwa HIF-1?berperan sebagai faktor transkripsi Cygb, dan juga berperan menginduksi ekspresigen yang berperan pada proliferasi fibroblas keloid. Akan tetapi, peran HIF-2?dalam meregulasi sitoglobin dan mempertahankan proliferasi fibroblas keloidbelum berhasil dibuktikan. Kesimpulan: HIF-1? berperan meregulasi eksrepsiCygb dan berperan pada proliferasi fibroblas keloid. Akan tetapi, HIF-2? belumterbukti meregulasi eksrepsi Cygb dan berperan pada proliferasi fibroblas keloid.

---

ABSTRACTBackground Keloid is a benign tumor which is characterized by overabbundance of collagen deposition caused by high activity and proliferation offibroblast. The main characteristics of keloid is hypoxia. HIF 1 and HIF 2 aretwo subunits of transcrption factors HIF 1 and HIF 2 which mediate adaptationto hypoxic condition. Hypoxic condition also induces cells to produce reactiveoxygen species ROS which can be scavenged by cytoglobin Cygb . In keloid,Cygb also plays important role in collagen synthesis. Other studies prove thatthere is a binding site of HIF 1 promoter on hypoxia response element HRE ofCygb. Whereas, HIF 2 binding site on HRE of Cygb is not cleraly understood.HIF 1 and HIF 2 also play important role to induce expression of many geneswhich involved in cells proliferation. Both HIF 1 and HIF 2 are known toregulate cells proliferation in many cancer types. However, the role of HIF 1 andHIF 2 to Cygb expression and fibroblast proliferation in keloid is not fullyunderstood. Therefore, the aim of this study is to determine the role of HIF 1 andHIF 2 on Cygb expression and fibroblast proliferation in keloid, by doing aninhibition of HIF 1 and HIF 2 in keloid fibroblast primary culture usingibuprofen as HIF inhibitor. Methods Analysis was conducted by analizing HIF 1 , HIF 2 , and Cygb mRNA expression and protein level using qRT PCR andELISA, and fibroblast proliferation analysis was conducted using trypan blueexclusion assay after given with ibuprofen and compared with control which isnot given with ibuprofen. Results Inhibition of HIF 1 caused a decrease onCygb mRNA expression and fibroblast proliferation on keloid. These findingsprove that HIF 1 acts as transcription factor of Cygb, and also inducesexpression of gene which plays a role on fibroblast proliferation in keloid.However, the role of HIF 2 in regulating and maintaining Cygb expression andfibroblast proliferation in keloid was not succesfully proven. Conclusion HIF 1 regulate Cygb expression and fibroblast proliferation in keloid. However, HIF 2 role on Cygb expression and fibroblast proliferation has not be proven yet."

"Latar belakang: Pada penelitian sebelumnya, kami menemukan ekspresi sitoglobin Cygb pada keloid meningkat dibandingkan kulit normal, yang disertai dengan tingkat proliferasi sel fibroblas yang tinggi. Sitoglobin dilaporkan memiliki peran sebagai penangkal ROS yang dibutuhkan pada proses proliferasi sel. Di sisi lain, beberapa penelitian telah melaporkan ambiguitas dari peran Cygb, baik sebagai tumor supresor maupun onkogen. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek hambatan ekspresi gen Cygb terhadap proliferasi dan kadar ROS sel fibroblas keloid menggunakan small interfering RNA siRNA .Metode: Kami mengukur ekspresi mRNA dan tingkat protein Cygb menggunakan qRT-PCR dan ELISA, proliferasi sel menggunakan metode MTS, dan tingkat ROS menggunakan uji DCFHDA pada 3 kelompok yaitu kontrol, siRNA Cygb dan siRNA negatif. Hasil dari ketiga kelompok tersebut dibandingkan secara statistik. Kami juga menganalisis korelasi antara masing-masing variabel.Hasil: Tingkat ekspresi Cygb pada kelompok siRNA Cygb menurun dibandingkan dengan kelompok kontrol dan siRNA negatif. Sedangkan proliferasi sel dan tingkat ROS intraseluler meningkat sedikit namun signifikan pada kelompok siRNA Cygb dibandingkan dengan kelompok kontrol dan siRNA negatif. Tidak terdapat korelasi antara ekspresi Cygb dengan proliferasi sel, namun terdapat korelasi antara ekspresi Cygb dengan tingkat ROS, dan tingkat ROS dengan proliferasi sel.Kesimpulan: Pada sel fibroblas keloid, hambatan ekpresi gen Cygb menyebabkan peningkatan proliferasi sel dan kadar ROS intraseluler.

---

Background In our previous work, we found the expression of Cytoglobin Cygb in keloid were significantly higher than those in normal skin, which accompanied by a high rate of fibroblasts cells proliferation. Cytoglobin is reported to have a role as ROS scavenger, which is required in cell proliferation. On the other hand, some studies have reported ambiguity role of Cygb, either as a tumor suppressor or oncogene. Therefore, we plan to elucidate the role of Cygb in the regulation of ROS and the proliferation of keloid fibroblast using small interfering RNA siRNA .Methods We measured mRNA expression and Cygb protein level using qRT PCR and ELISA, cell proliferation using MTS method, and ROS level using DCFHDA assay on 3 groups control group, siRNA Cygb group and siRNA negative group. The results of the three groups were compared statistically. We also analyzed the correlation between each variable.Results The expression level of Cygb on siRNA Cygb group were decreased compared to the control and siRNA negative group. Whereas the cells proliferation and intracellular ROS levels were increased slightly but significant in siRNA Cygb compared to control and siRNA negative group. There is no correlation between Cygb expression with cell proliferation, but there is a correlation between Cygb expression with ROS level, and ROS level with cell proliferation.Conclusion In keloid fibroblast cells, inhibition of Cygb gene expression leads to increased cell proliferation and intracellular ROS levels."