Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Epididimis adalah bagian sistem reproduksi laki-laki yang berperan penting dalam proses pematangan sperma. Proses ini berlangsung karena adanya interaksi antara protein yang disekresikan oleh sel-sel epitel epididymis dengan sperma. Banyak gen yang mengatur protein-protein tersebut belum dipahami sepenuhnya, contohnya Serpina1f. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi signal peptide sebagai dasar informasi untuk mempelajari fungsi gen tersebut lebih lanjut, dan ketergantungan androgen untuk secara dini menyeleksi apakah gen ini cocok dikembangkan menjadi kontrasepsi pria nonhormonal. Metode penelitian untuk memprediksi signal peptide adalah dengan menggunakan SignalP 4.0, sedangkan analisis ketergantungan androgen menggunakan real-time RT-PCR. Hasil penelitian ini memperlihatkan bahwa Serpina1f mengandung signal peptide pada 27 asam amino yang pertama, sedangkan ekspresi gen berubah sesuai level androgen. Hal ini menunjukkan bahwa Serpina1f menghasilkan secretory protein dan gen ini diregulasi androgen.

---

Epididymis is a part of male reproductive system that plays important role in sperm maturation process. This process occurs by the interaction between proteins secreted by epididymal epithelial cells with sperm. Many of the genes that regulate the protein involved in this process have not been understood completely, such as Serpina1f. The objective of this research is to identify its signal peptide as basic information to further learn its function, and androgen dependency to early select whether this gene could be a target for a nonhormonal male contraception. SignalIP 4.0 was used to predict the presence of signal peptide in its amino acid sequence, while the androgen dependency analysis was performed by quantitative real-time RT-PCR using RNA samples from gonadectomized mice and gonadectomized mice plus androgen therapy. The result showed that Serpina1f contained signal peptide at the first 27 amino acid sequence, while its expression fluctuated according to androgen level. It can be concluded that Serpina1f encodes a secretory protein and it is an androgen dependent gene."

"Lipase merupakan salah satu enzim yang penting di industri enzim, dan banyak digunakan dalam pembuatan zat aditif makanan, kosmetik, dan industri farmasi. Penelitian sebelumnya yang dilakukan di PTB-Laptiab BPPT, pengklonaan gen sintetik T. lanuginosus lipase pada B. substilis memiliki aktivitas lipase yang rendah yaitu sebesar 1,488 U/mg. Penelitian ini bertujuan untuk mengklona gen sintetik T. lanuginosus lipase TLL ke dalam vektor ekspresi Pichia pastoris menggunakan sinyal peptida asli TTL. Gen TLL yang mengandung sinyal peptida asli diamplifikasi dengan PCR, dan disisipkan ke dalam pPICZ? A di antara situs XhoI dan XbaI, kemudian ditransformasikan ke dalam sel kompeten E. coli DH5?. Hasil transformasi dipilih dua rekombinan positif untuk dilakukan analisis sekuensing. Hasil sekuensing, kedua rekombinan mengandung gen target lipase. Plasmid yang telah dikonfirmasi kemudian dilinearisasi dan ditransformasikan ke dalam P. pastoris X-33 dengan menggunakan metoda elektroporasi. Gen T. lanuginosus lipase berhasil diintegrasi ke dalam kromosom P. pastoris X-33, yang ditunjukkan dengan terbentuknya zona bening pada media Yeast extract Peptone Dextrose Tributyrin YPD.TB agar yang mengandung zeocin. Thermomyces lanuginosus lipase memiliki daerah open reading frame ORF 916 bp yang mengkode 291 asam amino dengan massa molekul teoritis 35 kDa. Enzim rekombinan T. lanuginosus memiliki suhu optimum 80 C dan pH optimum 8. ......Lipase is one of the most important industrial enzymes, which is widely used in the preparation of food additives, cosmetics, and pharmaceutical industries. In the previous study, we have cloned synthetic Thermomyces lanuginosus lipase gene into Bacillus subtilis and Escherichia coli and resulting low expression of enzyme activity. The aim of this research was to construct the T. lanuginosus lipase TLL gene into P. pastoris vector expression with TLL original signal peptide. Thermomyces lanuginosus lipase gene was amplified by PCR and contained original signal peptide and then inserted into pPICZ A between XhoI and XbaI site, and transformed into competent cell E. coli DH5. From the transformant, two of positive recombinants were analyzed by sequencing analysis. As the result, both of two recombinant have a positive target gene which has lipase gene. The correct plasmid was linearized and then was transformed into P. pastoris X 33 by electroporation method. Thermomyces lanuginosus synthetic gene lipase has been successfully integrated into chromosome of P. pastoris X 33, which revealed by clear zones around the colony on Yeast extract Peptone Dextrose Tributyrin YPD.TB plate with zeocin. The Thermomyces lanuginosus lipase had an open reading frame of 916 bp encoding TLL of 291 amino acids with theoretical molecular mass of 35 kDa. The recombinant enzyme, T. lanuginosus lipase had optimal temperature at 80 C and optimal pH at pH 8.0."