Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"ABSTRAKTuberkulosis (TB) masih menjadi masalah kesehatan utama di Indonesia. Salah satupenyebab tingginya kasus TB disebabkan adanya resistensi Mycobacteriumtuberculosis (Mtb) terhadap obat anti tuberkulosis. Isoniazid (INH) yang merupakansalah satu obat lini pertama dalam pengobatan TB adalah pro-drug yang akan diubahmenjadi bentuk aktifnya melalui aktivitas protein KatG Mtb. Mutasi pada gen katGyang mengkode protein KatG kemungkinan mempengaruhi aktivitas katalase danperoksidase protein sehingga menyebabkan resistensi Mtb terhadap INH. Dalamstudi ini, dilakukan kontruksi plasmid rekombinan protein KatG tipe liar dan proteinKatG dengan mutasi baru pada residu N330D dan H400Y, serta mutasi yang umumdijumpai pada residu S315T dan S315N. Ekspresi protein KatG rekombinandilakukan menggunakan host E. coli. Over ekspresi kelima protein rekombinan KatGterjadi setelah induksi IPTG. Purifikasi protein KatG rekombinan dilakukanberdasarkan prinsip kromatografi afinitas menggunakan Nikel sepharose. Setelahpurifikasi diperoleh protein KatG yang murni. Aktivitas katalase dan peroksidaseprotein rekombinan KatG diukur pada berbagai konsentrasi substrat yang diperlukandalam pengukuran efisiensi katalitik kedua aktivitas protein KatG. Hasilnyamenunjukkan bahwa mutan protein KatG memiliki efisiensi katalitik yang lebihrendah dari protein KatG tipe liar. Penurunan efisiensi katalitik aktivitas katalasemutan N330D dan H400Y sebesar 31% dan 37% dan untuk aktifitas peroksidasesebesar 39% dan 3% dibandingkan KatG tipe liar. Struktur 3 dimensi protein KatGdari mutan tersebut dibuat menggunakan perangkat Modeller dan divisualisasikanmenggunakan perangkat Pymol. Tidak terdapat adanya perubahan konformasi 3dimensi protein KatG mutan dibandingkan dengan struktur 3 dimensi protein KatGtipe liar. Namun, letak residu N330D dan H400Y yang berada dekat daerah aktifikatan INH pada protein KatG kemungkinan berpengaruh terhadap penurunanaktivitas enzimatik protein KatG.

---

ABSTRACTTuberculosis (TB) is currently a major health problem in Indonesia. One of the manycauses of the high incident of TB is due to the resistance of the Mycobacteriumtuberculosis (Mtb) to anti-TB drugs. Isoniazid (INH), one of the first line anti-TBdrugs for TB treatment, is a pro-drug that is converted to its active form through theactivity of Mtb KatG protein. Mutations in the katG gene encoding KatG may affectthe catalytic efficiency of the catalase and peroxidase activities of the protein thateventually confers resistance to INH. In this study, recombinant plasmids containingkatG gene that have new mutations on residue N330D dan H400Y, wild type, as wellas mutant proteins with common mutations at residue S315T and S315N wereconstructed. Expression of recombinant KatG was performed using E. coli as anexpression host. Over expression of recombinant KatG was facilitated by IPTGinduction. Purification of recombinant KatG was performed using affinitychromatography employing Nickel sepharose. Pure recombinant proteins wereobtained, and the catalase and peroxidase activities of the recombinant KatG proteinwere measured at various concentration of substrates. Result showed that mutantKatGs have a lower catalytic efficiency for both catalase and peroxidase activitiesthan the wild type protein. Decreasing catalytic efficiency for catalase of mutantsN330D and H400Y were 31% and 37% than that of wild type KatG, while catalyticefficiency for peroxidase of mutants N330D and H400Y were 39% and 3% lowerthan that of wild type. Three dimensional structures of mutant KatGs were generatedusing Modeller and visualized using PyMol softwares. The three dimensionalstructural of mutant KatG showed no conformational change compared with that ofwild type KatG. However, the location of residues N330D and H400Y which are inthe close proximity to the active site of KatG for INH binding is likely to have aneffect on the decreased enzymatic activities of mutant KatG proteins."

"Zika virus (ZIKV) adalah flavivirus yang ditularkan melalui gigitan nyamuk Aedes yang biasanya hanya menyebabkan gejala demam ringan pada orang dewasa yang sehat, tetapi membawa risiko cacat lahir yang tinggi pada fetus jika terinfeksi selama kehamilan. ZIKV bisa bermutasi dan kemungkinan untuk menyebar ke area baru. Dengan belum adanya vaksin Zika yang disetujui, bahan alam seperti xanthone yang didapatkan dari ekstrak dari tanaman seperti manggis merupakan salah satu agen antivirus yang menjanjikan. Studi ini mengkarakterisasi infektifitas strain ZIKV Indonesia, kemudian meneliti efek antivirus alpha-mangostin (a-M), sejenis xanthone yang diekstraksi dari kulit buah manggis, terhadap ZIKV dalam tiga skenario perlakuan. Infeksi dan pertumbuhan ZIKV di galur sel secara signifikan berbeda antar sel dan dari waktu ke waktu (two-way ANOVA p < 0,01 di semua assay) dan bereplikasi dengan baik di galur sel A549 dan ginjal, tetapi tidak pada galur sel HepG2 atau sel darah putih. a-M secara efektif mengurangi titer virus dalam skenario full- dan post-treatment dengan selektivitas yang baik (SI = 6,14, 3,31, masing-masing), tetapi kurang efektif dalam mengurangi protein virus intraseluler (SI = 2,21, 1,78, masing-masing), dengan ribavirin (sebagai control) menunjukkan lebih sedikit efek, tetapi selektivitas yang lebih baik di semua skenario. Molecular docking menunjukkan a-M mengikat dengan baik ke kantung protein yang relevan pada protein replikasi ZIKV: NS1, NS3-helicase dan RdRp. Studi ini menyimpulkan bahwa ZIKV Indonesia mempunyai sifat yang mirip dengan strain lain di dunia dan a-M adalah antivirus ZIKV yang menjanjikan dengan toksisitas yang relatif rendah, dan bekerja dengan menghambat replikasi ZIKV, namun masih perlu dikonfirmasi dengan penelitian lebih lanjut.

---

Zika virus (ZIKV) is a flavivirus transmitted by the bite of Aedes mosquitoes which usually causes only mild fever symptoms in healthy adults, but carries a high risk of birth defects in fetuses if infected during pregnancy. ZIKV has a history of mutations and is likely to spread to new areas. With no approved vaccine, xanthones in extracts from plants such as mangosteen represent promising antiviral agents. This study first characterized the infection patterns of the Indonesian ZIKV strain, then investigated antiviral effects of alpha-mangostin (a-M), a xanthone extracted from mangosteen pericarp, against it in three treatment scenarios. ZIKV infection progressed significantly differently between cells and over time (two-way ANOVA p < 0.01 in all assays) and replicated well in A549 and kidney cell lines, but not HepG2 or white blood cell lines. a-M effectively reduced viral titer in A549 in full and post treatment scenarios with good selectivity (SI = 6.14, 3.31, respectively), but was less effective in reducing intracellular viral protein (SI = 2.21, 1.78, respectively), with ribavirin showing less effect, but better selectivity in all scenarios. Molecular docking showed a-M binding well to pockets of interest on the ZIKV replication proteins NS1, NS3-helicase and RdRp. This study concludes that Indonesian ZIKV is similar to other strains in terms of cell line infectivity and a-M is a promising antiviral agent with relatively low toxicity, and works by inhibiting ZIKV replication, which should be confirmed with further research."

"ABSTRAKPenyakit Dengue adalah penyakit infeksi akibat virus dengue yang memilikimanifestasi klinis mulai dari demam ringan hingga berat seperti demam berdarahdan sindrom renjatan dengue. Patogenesis dengue sampai saat ini belumsepenuhnya diketahui. Ada dua faktor utama yang mempengaruhi manifestasiklinis, yaitu adanya variasi serotipe virus dengue (DEN-1, DEN-2, DEN-3, danDEN-4) dan faktor pejamu, yaitu peranan imunitas yang diantaranya diperantaraioleh sel fagosit mononuklear. Pada penelitian ini kemampuan empat serotipe virusdengue untuk menginduksi respon imun dilihat dengan memaparkan ke empatserotipe virus dengue dengan sel imun yang berasal dari manusia sehat berupamakrofag yang berasal dari monosit (monocyte derived macrophages atau MDM)dan peripheral blood mononuclear cells (PBMC) dan kemudian diukur ekspresidelapan macam sitokin/kemokin. Penelitian diawali dengan isolasi PBMC daridarah vena dengan menggunakan metode sentrifugasi gradien menggunakanFicoll. MDM dideferensiasi dari monosit menggunakan faktor pertumbuhan MCSF.MDM dan PBMC yang diperoleh kemudian dipaparkan berbagai serotipevirus dengue. Replikasi virus diukur dengan metode plaque assay dan pengukurankadar NS1 dengan cara ELISA. Ekspresi sitokin/kemokin dianalisa menggunakanLuminexTM microbead assay. Hasil penelitian menunjukkan adanya perbedaanpola ekspresi sitokin/kemokin akibat paparan ke empat serotipe virus pada MDM,di mana DEN-1 menunjukkan kecenderungan untuk menginduksi ekspresisitokin/kemokin lebih cepat dan lebih tinggi dibandingakan serotipe lain. Analisastatistik pada PBMC menunjukkan adanya perbedaan kinetika ekspresi yangsignifikan pada sitokin IL-10 pada 24 jam pasca infeksi dan kemokin IP-10 pada36 dan 60 jam pasca infeksi. Sebagai kesimpulan, pada penelitian inidiperlihatkan adanya perbedaan pola kinetik ekspresi sitokin/kemokin keempatserotipe virus dengue baik pada MDM dan PBMC.

---

ABSTRACTDengue is a disease caused by dengue virus infection, which has clinicalmanifestations ranging from mild fever to severe forms such as the denguehaemorrhagic fever and dengue shock syndrome. The pathogenesis of dengueinfection is not fully known. There are two main factors that influence clinicalmanifestations. The first is the virus factor which represented by the variation ofdengue virus serotypes (DEN-1, DEN-2, DEN-3, and DEN-4) and the secondfactor is the host factors, which mainly involved the host’s immunity mediated byimmune cells such as the mononuclear phagocytic cells. In this study, the abilityof the four serotypes of dengue virus to induce immune response was studied byinfecting the four serotypes of dengue virus into healthy human macrophagesderived from monocytes (monocyte-derived macrophages or MDM ) andperipheral blood mononuclear cells (PBMC). The expressions of eightcytokines/chemokines were measured. Isolation of PBMCs was performed usingFicoll gradient centrifugation. MDMs were differentiated from monocytes usingthe growth factor M-CSF. MDM and PBMCs obtained were infected with variousserotypes of dengue virus. Viral replication was measured by plaque assaymethods and NS1 ELISA. Expressions of cytokines/chemokines were analyzedusing LuminexTM microbead assay. The results showed differences in theexpression patterns of cytokines/chemokines into four serotypes of the virus inMDM, in which DEN-1 induced the expression of cytokine/chemokines faster andat higher levels compared to other serotypes. While virus infection in PBMCsshowed significant differences in the kinetics of expression of cytokines IL-10 at24 hours post-infection and the chemokine IP-10 at 36 and 60 hours postinfection. In conclusion, this study observed different patterns ofcytokine/chemokines expression in response to four serotypes of dengue virusboth in MDM and PBMCs."