Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

Abstrak :
Vitrifikasi ovarium merupakan metode kriopreservasi menggunakan krioprotektan konsentrasi tinggi, dengan suhu sangat rendah dan laju pendinginan yang sangat cepat sehingga menghasilkan struktur seperti kaca padat. Namun, metode ini memiliki kendala yaitu penggunaan suhu rendah sehingga memicu terbentuknya kristal es yang dapat menyebabkan cryoinjury serta kendala pada pemilihan krioprotektan yang sesuai. Tujuan penelitian ialah untuk mengidentifikasi potensi penggunaan sari kurma (SK) sebagai krioprotektan ekstraseluler alami dan etilen glikol (EG) untuk mengatasi permasalahan tersebut. Penelitian terdiri atas 8 kelompok: KKN, KKV (NaCl 0,9%), KKP1 (EG 7,5%), KKP2 (EG 15%), KP1 (EG 7,5% + SK 7,5%), KP2 (EG 7,5% + SK 15%), KP3 (EG 15% + SK 7,5%), dan KP4 (EG 15% + SK 15%). Ovarium diukur dan ditimbang berat sebelum dan sesudah vitrifikasi untuk kemudian di analisis indeks berat ovarium. Preparat ovarium di pulas menggunakan Hematoksilin-Eosin dan Imunohistokimia, kemudian di amati dan analisis terhadap densitas folikel, indeks folikel dan rasio Bax/Bcl-2. Hasil menunjukkan penambahan sari kurma berpengaruh pada penurunan indeks berat ovarium, mempertahankan densitas folikel primer, mempertahankan indeks folikel preantral intak serta menurunkan rasio Bax/Bcl-2 folikel preantral. Oleh hasil tersebut, sari kurma memiliki potensi untuk digunakan sebagai krioprotektan ekstraseluler alami oleh karena kandungan gula dan senyawa antioksidan yang dapat memproteksi folikel preantral pada ovarium sesudah di vitrifikasi ......Ovarian vitrification is a cryopreservation method using high concentration cryoprotectants, using low temperatures and a very fast cooling rate that form a solid glass structure. However, this method has obstacles, the use of low temperatures could trigger the formation of ice crystals which can cause cryoinjury and constraints on the selection of cryoprotectants. The purpose of the study was to identify the potential use of date juice concentrate (DJC) as a natural extracellular cryoprotectant and ethylene glycol (EG) to overcome this problem. The study consisted of 8 groups: KKN, KKV (NaCl 0.9%), KKP1 (EG 7.5%), KKP2 (EG 15%), KP1 (EG 7.5% + DJC 7.5%), KP2 (EG 7.5% + DJC 15%), KP3 (EG 15% + DJC 7.5%), and KP4 (EG 15% + DJC 15%). The ovaries are measured and weight before and after vitrification for the ovarian index. Ovaries stained using Hematoxylin-Eosin and Immunohistochemistry, then analyzed towards the follicular density, follicle index, and Bax/Bcl-2 ratio. The results showed that the addition of DJC had an effect on decreasing the ovarian weight index, maintaining the density of the primary follicles, maintaining the preantral follicle index and decrease the Bax/Bcl-2 ratio of preantral follicles. Therefore, DJC has the potential to be used as a natural extracellular cryoprotectant due to the content of sugars and antioxidant compounds that can protect the preantral follicles in the ovaries after vitrification.

Abstrak :
Preservasi sel atau jaringan erat kaitannya dengan cryoinjury akibat pembentukan kristal es yang akan merusak struktur memban sel dan peningkatan kadar radikal bebas yang dapat memicu kejadian apoptosis. Vitrifikasi ovarium menggunakan krioprotektan intraseluler saja, seperti etilen glikol, diketahui masih memiliki efek toksik terhadap sel. Madu berpotensi sebagai krioprotektan ekstraseluler dengan cara menjaga kestabilan membran sel selama proses vitrifikasi dan kombinasinya dengan etilen glikol dapat mengurangi efek toksik dari etilen glikol tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk memanfaatkan madu kelengkeng dalam menjaga integritas folikel preantral ovarium dan menekan laju apoptosis folikel selama vitrifikasi, melalui analisis densitas, indeks folikel, dan rasio Bax/Bcl-2. Pulasan histologis digunakan untuk menganalisis integritas folikel menggunakan pewarnaan Hematoksilin-Eosin, serta pewarnaan Imunohistokimia untuk melihat ekspresi dari protein proapoptosis dan antiapoptosis. Pengamatan dilakukan menggunakan Optilab 3.0, software Image Raster, dan ImageJ. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian madu dengan konsentrasi 7,5% yang dikombinasikan dengan etilen glikol, baik 7,5% maupun 15%, dapat mempertahankan densitas dan indeks folikel preantral intak, serta menunjukkan rasio Bax/Bcl-2 yang lebih rendah dibandingkan kontrol vitrifikasi pada folikel preantral. Oleh karena itu, pemberian madu mampu mempertahankan integritas folikel preantral dan menekan laju apoptosis folikel preantral sesudah vitrifikasi. ......Preservation of cells or tissues is related to cryoinjury due to the formation of ice crystals that will damage the cell and increase free radicals that can trigger apoptosis. Ovarian vitrification using single intracellular cryoprotectants, such as ethylene glycol, is known to still have a toxic effect on cells. Honey has the potential as an extracellular cryoprotectant by maintaining the stability of cell membranes during the vitrification process and their combinations can reduce the toxic effects of ethylene glycol. This study aims to utilize longan honey to maintain the integrity of the ovarian preantral follicles and reduce the rate of follicle apoptosis during vitrification, through density, follicle index, and Bax/Bcl-2 ratio analysis. Histological staining was used to analyze the integrity of the follicles using Hematoxylin-Eosin staining, and Immunohistochemical staining to see the expression of proapoptotic and antiapoptotic proteins. Observations were made using Optilab 3.0, Image Raster, and ImageJ software. The results showed that honey with a concentration of 7.5% combined with ethylene glycol, both 7.5%, and 15%, could maintain follicle density and intact preantral follicle index, and showed a lower Bax/Bcl-2 ratio than the vitrified control in the preantral follicle. Therefore, honey was able to maintain the integrity of the preantral follicles and reduce the rate of apoptosis of the preantral follicles after vitrification.

Abstrak :
Diferensiasi osteogenik dari Sel punca mesenkim (MSC) menjadi osteoblas memiliki signifikansi klinis yang sangat penting untuk mengobati cedera tulang. Berbagai penelitian telah dilakukan untuk meneliti faktor-faktor yang dapat meningkatkan diferensiasi osteogenik, termasuk pengembangan perancah untuk kultur MSC. Perancah Polivinil Alkohol (PVA)/ Fibroblast-derived Matrix (hFDM) asal manusia menjadi salah satu kandidat perancah yang diduga dapat mendukung diferensiasi osteogenik MSC. Keberadaan matriks ekstraseluler (ECM) pada perancah dapat meregulasi berbagai aktivitas seluler melalui komponen protein matriks yang terdapat pada ECM. Protein matriks berperan sebagai sekuesterasi berbagai faktor pertumbuhan. Faktor pertumbuhan seperti BMP2 dan chordin diketahui dapat meregulasi diferensiasi osteogenik. Proses terjadinya diferensiasi osteogenik dapat diamati melalui akumulasi mineral kalsium yang terdeposit pada matriks ekstraseluler. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui metode optimum dalam pembuatan perancah PVA/hFDM, danmengetahui peran perancah PVA/hFDM dalam mempengaruhi diferensiasi osteogenik MSC dengan mengukur ekspresi gen BMP2, dan chordin, serta ekspresi kadar kalsium relatif pada matriks ekstraseluler. Optimasi pembuatan perancah PVA hFDM dimulai dengan optimasi medium kultur, waktu kultur, preparasi, dan teknik deselulerisasi. hFDM dikarakterisasi menggunakan pewarnaan Hematoxylin, Masson Trichrome, dan Imunohistokimia untuk mengetahui keberadaan protein matriks. MSC dikultur pada perancah PVA/hFDM untuk uji diferensiasi osteogenik selama 21 hari. Sampel RNA diisolasi pada hari ke-7,14, dan 21. Ekspresi gen BMP2 dan chordin dianalisis menggunakan metode qRT-PCR. Adapun ekspresi kadar kalsium relatif dianalisis dengan uji kualitatif dan kuantitatif pewarnaan Alizarin Red. Hasil penelitian ini menunjukkan protokol pembuatan perancah PVA/hFDM telah dioptimasi, dan karakterisasi hFDM memperlihatkan keberadaan protein matriks berupa kolagen dan biglycan. Ekspresi gen BMP2 menurun pada kelompok MSC yang dikultur pada perancah PVA/hFDM baik di hari ke-7, 14, dan 21. Sedangkan ekspresi gen chordin meningkat pada kelompok MSC yang dikultur pada perancah PVA/hFDM di hari ke 7, dan 14, kembali menurun di hari ke-21. Ekspresi kadar kalsium relatif cenderung meningkat pada kelompok MSC yang dikultur pada perancah PVA/hFDM dengan gambaran mikroskopis berupa bercak merah pada permukaan perancah. Kesimpulan dari penelitian ini adalah perancah PVA/hFDM cenderung dapat mendukung diferensiasi osteogenik MSC. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penggunaan perancah PVA/hFDM dapat menurunkan ekspresi gen BMP2, dan meningkatkan ekspresi gen chordin, serta cenderung meningkatkan ekspresi kadar kalsium relatif yang terdeposit pada matriks ekstraseluler. ......Osteogenic differentiation from Mesenchymal Stem Cell (MSC) to osteoblasts has great clinical significance for treating bone injury. Various studies have been conducted to investigate factors that can enhance osteogenic differentiation, including scaffold development for MSC culture. Scaffold Polyvinyl Alcohol (PVA) / human Fibroblast-derived Matrix (hFDM) is a scaffold candidate assumed to support osteogenic differentiation of MSCs. The extracellular matrix (ECM) presence on the scaffold can regulate various cellular activities through the matrix protein components contained in the ECM. Matrix protein plays a role in sequestering multiple growth factors. Growth factors such as BMP-2 and chordin are to regulate osteogenic differentiation. The process of osteogenic differentiation can be observed by accumulating calcium minerals in the extracellular matrix. The purpose of this study was to determine the optimal method for making PVA / hFDM scaffold and to determine the role of the PVA / hFDM scaffold in affecting MSC osteogenic differentiation by measuring the expression of BMP2 and chordin genes, as well as the expression of relative calcium levels in the extracellular matrix. Optimization of making hFDM PVA scaffold begins with the optimization of culture medium, culture time, preparation, and decellularization techniques. hFDM was characterized using Hematoxylin, Masson Trichrome, and Immunohistochemical staining to determine matrix proteins' presence. MSCs were cultured on the PVA / hFDM scaffold for osteogenic differentiation assay for 21 days. RNA samples were isolated on day 7,14 and 21. Expression of BMP2 and chordin genes were analyzed using the qRT-PCR method. The expression of relative calcium levels was analyzed by qualitative and quantitative tests of Alizarin Red staining. The results of this study indicate that the PVA / hFDM scaffold preparation protocol has been optimized, and the hFDM characterization shows the presence of matrix proteins in the form of collagen and biglycan. BMP-2 gene expression decreased in the MSC group cultured on the PVA / hFDM scaffold on days 7, 14, and 21. In contrast, the chordin gene expression increased in the MSC group cultured on the PVA / hFDM scaffold on days 7, and 14, back down on day 21. The expression of relative calcium levels tended to increase in the MSC group cultured on the PVA / hFDM scaffold with a microscopic appearance of red spots on the scaffold surface. This study concludes that Scaffold PVA / hFDM tends to support osteogenic differentiation of MSCs. The results showed that the use of the PVA / hFDM scaffold could decrease the expression of the BMP2 gene, and increase the expression of the chordin gene, and tended to increase the expression of the relative calcium levels deposited in the extracellular matrix.

Abstrak :
Telah dilakukan penelitian untuk mengidentifikasi efek krioprotektif madu lengkeng (Dimocarpus longan) terhadap integritas struktur folikel preantral dan profil ekspresi protein apoptosis jalur intrinsik. Sebanyak 24 ekor tikus (Rattus norvegicus L) dikelompokkan menjadi 8 kelompok, terdiri atas KKN, KKV (NaCl 0,9%), KKP1 (EG 7,5%), KKP2 (EG 15%), KP1 (EG 7,5% + ML 7,5%), KP2 (EG 7,5% + ML 15%), KP3 (EG 15% + ML 7,5%), dan KP4 (EG 15% + ML 15%). Pengamatan terhadap densitas,struktur folikel serta ekspresi protein Bax,Bcl2 dan Caspase3 dilakukan terhadap sayatan ovarium yang dibuat dengan metode parafin dengan pewarnaan Hematoksilin-Eosin (HE) dan imunohistokimia. Antibodi primer yang digunakan adalah antibodi poliklonal Rabbit Anti-Bax (A00183 Boster, USA), Rabbit Anti-Bcl-2 (A00040-2 Boster, USA) dan Active Caspase-3 Rabbit Polyclonal Antibody (ab4051 Abcam, UK) dan One Step Neopoly Detection System Kit (BGNK-0025 Biogear, USA). Identifikasi terhadap tiap tipe folikel preantral menggunakan mikroskop cahaya yang terhubung dengan perangkat lunak Image Raster dan IHC profiler. Hasil penelitian menunjukkan, efek krioprotektif madu lengkeng dapat meningkatkan densitas folikel, indeks folikel intak G2 dan G3, menurunkan indeks folikel G1, menekan ekspresi protein Bax dan caspase 3 serta meningkatkan ekspresi protein Bcl2. Dengan demikian, madu lengkeng memiliki potensi untuk dikembangkan sebagai krioprotektan ekstraselular alami dalam aplikasi vitrifikasi ovarium. ......A study was conducted to identify the cryoprotective effect of longan honey (Dimocarpus longan) on the structural integrity of the preantral follicle and the expression profile of the intrinsic pathway of apoptosis protein. A total of 24 rats (Rattus norvegicus L) were grouped into 8 groups, consisting of KKN, KKV (NaCl 0.9%), KKP1 (EG 7.5%), KKP2 (EG 15%), KP1 (EG 7.5% + LH 7.5%), KP2 (EG 7.5% + LH 15%), KP3 (EG 15% + LH 7.5%), and KP4 (EG 15% + LH 15%). Observations on the density, follicular structure and protein expression of Bax, Bcl2 and Caspase3 were carried out on ovarian sections made by paraffin method with Hematoxylin-Eosin (HE) staining and immunohistochemistry. The primary antibodies used were Rabbit Anti-Bax polyclonal antibody (A00183 Boster, USA), Rabbit Anti-Bcl-2 (A00040-2 Boster, USA) and Active Caspase-3 Rabbit Polyclonal Antibody (ab4051 Abcam, UK) and One Step Neopoly Detection System Kit (BGNK-0025 Biogear, USA). Identification of each type of preantral follicle using a light microscope connected to Image Raster software and an IHC profiler. The results showed that the cryoprotective effect of longan honey could increase follicle density, G2 and G3 intact follicle index, decrease G1 follicle index, suppress Bax protein expression and caspase 3 and increase Bcl2 protein expression. Thus, longan honey has the potential to be developed as a natural extracellular cryoprotectant in ovarian vitrification applications.

Abstrak :
Telah dilakukan penelitian untuk mengidentifikasi efek krioprotektif madu lengkeng (Dimocarpus longan) terhadap integritas struktur folikel preantral dan profil ekspresi protein apoptosis jalur intrinsik. Sebanyak 24 ekor tikus (Rattus norvegicus L) dikelompokkan menjadi 8 kelompok, terdiri atas KKN, KKV (NaCl 0,9%), KKP1 (EG 7,5%), KKP2 (EG 15%), KP1 (EG 7,5% + ML 7,5%), KP2 (EG 7,5% + ML 15%), KP3 (EG 15% + ML 7,5%), dan KP4 (EG 15% + ML 15%). Pengamatan terhadap densitas,struktur folikel serta ekspresi protein Bax,Bcl2 dan Caspase3 dilakukan terhadap sayatan ovarium yang dibuat dengan metode parafin dengan pewarnaan Hematoksilin-Eosin (HE) dan imunohistokimia. Antibodi primer yang digunakan adalah antibodi poliklonal Rabbit Anti-Bax (A00183 Boster, USA), Rabbit Anti-Bcl-2 (A00040-2 Boster, USA) dan Active Caspase-3 Rabbit Polyclonal Antibody (ab4051 Abcam, UK) dan One Step Neopoly Detection System Kit (BGNK-0025 Biogear, USA). Identifikasi terhadap tiap tipe folikel preantral menggunakan mikroskop cahaya yang terhubung dengan perangkat lunak Image Raster dan IHC profiler. Hasil penelitian menunjukkan, efek krioprotektif madu lengkeng dapat meningkatkan densitas folikel, indeks folikel intak G2 dan G3, menurunkan indeks folikel G1, menekan ekspresi protein Bax dan caspase 3 serta meningkatkan ekspresi protein Bcl2. Dengan demikian, madu lengkeng memiliki potensi untuk dikembangkan sebagai krioprotektan ekstraselular alami dalam aplikasi vitrifikasi ovarium. ......A study was conducted to identify the cryoprotective effect of longan honey (Dimocarpus longan) on the structural integrity of the preantral follicle and the expression profile of the intrinsic pathway of apoptosis protein. A total of 24 rats (Rattus norvegicus L) were grouped into 8 groups, consisting of KKN, KKV (NaCl 0.9%), KKP1 (EG 7.5%), KKP2 (EG 15%), KP1 (EG 7.5% + LH 7.5%), KP2 (EG 7.5% + LH 15%), KP3 (EG 15% + LH 7.5%), and KP4 (EG 15% + LH 15%). Observations on the density, follicular structure and protein expression of Bax, Bcl2 and Caspase3 were carried out on ovarian sections made by paraffin method with Hematoxylin-Eosin (HE) staining and immunohistochemistry. The primary antibodies used were Rabbit Anti-Bax polyclonal antibody (A00183 Boster, USA), Rabbit Anti-Bcl-2 (A00040-2 Boster, USA) and Active Caspase-3 Rabbit Polyclonal Antibody (ab4051 Abcam, UK) and One Step Neopoly Detection System Kit (BGNK-0025 Biogear, USA). Identification of each type of preantral follicle using a light microscope connected to Image Raster software and an IHC profiler. The results showed that the cryoprotective effect of longan honey could increase follicle density, G2 and G3 intact follicle index, decrease G1 follicle index, suppress Bax protein expression and caspase 3 and increase Bcl2 protein expression. Thus, longan honey has the potential to be developed as a natural extracellular cryoprotectant in ovarian vitrification applications.