Ekspresi protein rekombinan NS1 dengue Serotipe 4 strain Indonesia pada vektor ekspresi Pichia pastoris sebagai reagen immunodiagnostik pendeteksi antigen NS1 dengue = Expression of NS1 dengue Serotype 4 strain Indonesia recombinant protein using Pichia pastoris vector as immunodiagnostic reagen for NS1 dengue antigen detection / Wahyu Hidayati
Wahyu Hidayati;
Beti Ernawati Dewi, supervisor; Andi Yasmon, examiner; Budiman Bela, examiner; Heri Wibowo, examiner; Asmarinah, examiner
(Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, 2012)
|
|
ABSTRAK Infeksi dengue merupakan salah satu masalah kesehatan utama di Indonesia.Perubahan manifestasi klinis yang cepat dari ringan hingga berat bahkan kematianmenyebabkan perlunya pendeteksian dini infeksi dengue. Salah satu metodedeteksi yang potensial untuk diterapkan sebagai pendeteksian dini adalahpendeteksian antigen NS1 dengue. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkanprotein rekombinan NS1 dengue serotipe 4 strain Indonesia dengan menggunakansistem Pichia pastoris yang dapat digunakan untuk pembuatan antibodi anti-NS1.Sampel yang digunakan adalah RNA virus dengue serotipe 4 strain Indonesia IDS96/10. Metode penelitian adalah ekperimental yang meliputi pembuatan cDNA,pengklonaan pada bakteri Escherichia coli, skrining sel transforman, sekuensing,transformasi sel P. pastoris strain X-33, analisa fenotipe, dan ekspresi protein.Diperoleh 6 koloni P. pastoris strain X-33 rekombinan dengan fenotipe Mut+ danterdeteksi protein rekombinan NS1 dengue serotipe 4 dengan ukuran antara 72hingga 95 kDa pada protein standard, diperkirakan berukuran 80 kDa. Hasilanalisa nukleotida dan asam amino menunjukkan tidak terjadi mutasi pada genNS1 dan terletak pada in frame yang sesuai pada vektor pPICZαB. Protein NS1yang diperoleh diharapkan dapat merangsang terbentuknya antibodi anti-NS1yang selanjutnya dapat digunakan untuk mendeteksi antigen NS1 pada serumpasien. ABSTRACT Dengue infection is a major health problem in Indonesia. Clinical manifestationrapidly changing from mild to severe even death. Therefore early detectionbecomes very important. One of potential detection methods to be applied as anearly detection is NS1 dengue antigen detection. The aim of this research was toexpress NS1 recombinant protein of dengue virus serotype 4 strain Indonesiausing Pichia pastoris. Dengue virus RNA from infected pasien serum IDS 96/10was used in this research. To get recombinant protein we constructed NS1recombinant plasmid in vector P. pastoris. First, we amplified NS1 gene andcloned it to Escherichia coli. We selected transformant cells and and recombinantplasmid was transfected to yeast by electroporation. We selected yeasttransformants and analized the phenotype. Methanol was used to induceexpression recombinant protein. Protein expression was determined by SDSPAGEand Western Blot. By Western Blot using antibody to dengue viruses, wefound protein recombinant with molecular weight around 72-95 kDa. This sizewas similar with dimer of NS1 size. In the future, this recombinant protein can beused to produce antibody anti-NS1 that able to detect NS1 antigen in patient sera. |
 T-Wahyu Hidayati.pdf :: Unduh
|
| No. Panggil : | T-Pdf |
| Entri utama-Nama orang : | |
| Entri tambahan-Nama orang : | |
| Subjek : | |
| Penerbitan : | [Place of publication not identified]: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, 2012 |
| Program Studi : |
| Bahasa : | ind |
| Sumber Pengatalogan : | LibUI ind rda |
| Tipe Konten : | text |
| Tipe Media : | unmediated ; computer |
| Tipe Carrier : | volume ; online resource |
| Deskripsi Fisik : | xiv, 80 pages : illustration ; 28 cm |
| Naskah Ringkas : | |
| Lembaga Pemilik : | Universitas Indonesia |
| Lokasi : | Perpustakaan UI, Lantai 3 |
| No. Panggil | No. Barkod | Ketersediaan |
|---|---|---|
| T-Pdf | TERSEDIA |
| Ulasan: |
| Tidak ada ulasan pada koleksi ini: 20330320 |
