Optimasi ekspresi dan pemurnian apoptin chicken anemia virus termodifikasi dalam produksi native apoptin = Optimization in expression and purification of modified apoptin chicken anemia virus in production of native apoptin
Anggoro Wiseso;
Muhamad Sahlan, supervisor; Siswa Setyahadi, examiner; Tania Surya Utami, examiner
([Publisher not identified]
, 2016)
|
|
ABSTRAK Kanker merupakan gangguan kesehatan yang menjadi sebuah masalah besar didunia. Kanker adalah penyakit akibat pertumbuhan tidak normal dari sel-seljaringan tubuh yang berubah menjadi sel kanker. Apoptin diketahui memilikikemampuan untuk memicu apoptosis di sel kanker secara in vitro maupun in vivo,tetapi tidak pada sel normal. Apoptin merupakan protein dari Chicken AnemiaVirus (CAV) yang pertama kali diperkenalkan di Jepang pada 1974. ProduksiApoptin dapat dilakukan pada inang Eschericia coli dengan memindahkan genApoptin melalui vektor plasmid pET9a. Gen Apoptin yang digunakan telahdimodifikasi untuk meningkatkan efisiensi dan kemudahan dalam prosespurifikasinya dengan penambahan beberapa tag dan situs pemotongan Thrombin.Purifikasi dilakukan menggunakan kromatografi afinitas ion logam (IMAC) nikel.Apoptin termodifikasi dengan HlyA-tag, (His)6-tag, (Arg)8-tag dan situsproteolitik thrombin berhasil diekpsresikan dan dipurifikasi di dalam E.coli DH5αdan BL21 dengan analisis SDS-PAGE. Optimasi ekspresi dilakukan denganvariasi strain E. coli membuktikan BL21 Codon Plus merupakan inang palingbaik, konsentrasi IPTG lebih optimal pada 1 mM dibandingkan 0.4 mM, danpengaruh suhu antara 28o dan 37o tidak signifikan. Binding Buffer dan ElutionBuffer, paling baik dilakukan dengan komposisi: 20 mM sodium phosphate, 500mM NaCl, dan 40 mM (binding) / 500 mM (elution) imidazole, pada pH 7.4. ABSTRACT Cancer is a health problem that is becoming a big problem in the world. Cancer isa disease caused by abnormal growth of tissue cells of the body that turn intocancer cells. Apoptin known to have the ability to trigger apoptosis in cancer cellsin vitro and in vivo, but not in normal cells. Apoptin is a protein of ChickenAnemia Virus (CAV), which was first introduced in Japan in 1974. Theproduction of Apoptin can be performed on the host Escherichia coli with genetransfer vector plasmid pET9a. Apoptin gene used has been modified to improvethe efficiency and ease of purification process with the addition of a few tags andThrombin proteolytic site. Purification is done using ionic metal affinitychromatography (IMAC) nickel. Apoptin modified with HlyA-tag, (His)6-tag,(Arg)8-tag and thrombin proteolytic sites has been expressed and purified in E.coli DH5α and BL21 by SDS-PAGE analysis. Optimization conducted withseveral variation, expression in E. coli strain BL21 Codon Plus proved mostoptimum host, IPTG concentration at 1 mM given better expression than 0.4 mM,and the effect of temperature between 28o and 37o are insignificant. Bindingbuffer and the elution buffer, is best done with the composition: 20 mM sodiumphosphate, 500 mM NaCl, and 40 mM (binding) or 500 mM (elution) imidazolein pH 7.4. |
 S64290-Anggoro Wiseso.pdf :: Unduh
|
| No. Panggil : | S64290 |
| Entri utama-Nama orang : | |
| Entri tambahan-Nama orang : | |
| Entri tambahan-Nama badan : | |
| Subjek : | |
| Penerbitan : | [Place of publication not identified]: [Publisher not identified], 2016 |
| Program Studi : |
| Bahasa : | ind |
| Sumber Pengatalogan : | LibUI ind rda |
| Tipe Konten : | text |
| Tipe Media : | unmediated ; computer |
| Tipe Carrier : | volume ; online resource |
| Deskripsi Fisik : | xiii, 57 pages : illustration ; 30 cm |
| Naskah Ringkas : | |
| Lembaga Pemilik : | Universitas Indonesia |
| Lokasi : | Perpustakaan UI, Lantai 3 |
| No. Panggil | No. Barkod | Ketersediaan |
|---|---|---|
| S64290 | 14-17-386250962 | TERSEDIA |
| Ulasan: |
| Tidak ada ulasan pada koleksi ini: 20429516 |
