Ekspresi dan karakterisasi peptida bakteriosin rekombinan Bac1 dari bacillus subtilis DB403 asal weissella confusa MBF8-1 menggunakan elektroforesis = Expression and characterization of recombinant bacteriocin peptide Bac1 in bacillus subtilis DB403 from weissella confusa MBF8-1 by electrophoresis
Angelina Wening Widiyanti;
Amarila Malik, supervisor; Herman Suryadi, examiner; Arry Yanuar, examiner
([Publisher not identified]
, 2016)
|
|
ABSTRAK Bakteriosin telah dikenal sebagai polipeptida kecil yang memiliki aktivitasantimikroba dan disintesis oleh banyak bakteri. Pada penelitian sebelumnya,ditemukan adanya tiga peptida dengan motif glisin ganda yang diduga bakteriosindalam Weissella confusa MBF8-1. Ketiga bakteriosin tersebut telah berhasildiklon pada Bacillus subtilis DB403. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahuiekspresi dan karakterisasi peptida rekombinan bakteriosin, khususnya Bac1menggunakan metode elektroforesis Sodium Dodecyl Sulphate PolyacrilamideGel (SDS ? PAGE). Bacillus subtilis DB403 dibiakkan dan diinduksi denganXylosa untuk melihat ekspresi peptida rekombinan. Kemudian sel diresupensi dandipurifikasi dengan Kolom Afinitas HisTrap FF 5 mL yang diikuti denganliofilisasi. Karakterisasi diamati menggunakan SDS ? PAGE dan dikonfirmasimenggunakan uji aktivitas antimikroba yang menunjukkan konsentrasi hambatminimal (KHM). Bakteri indikator yang digunakan adalah Leuconstocmesenteroides TISTR120. Adanya gen bac1 dibuktikan dengan PolymeraseChain Reaction menggunakan plasmid sebagai template dan pasangan primerspesifik. Berdasarkan terjadinya misfolding dan agregasi yang disebabkan adanyapenambahan Histidin tag pada bac1, peptida Bac1 tidak berhasil dikarakterisasimenggunakan SDS ? PAGE. Fraksi elution buffer Bac1 menunjukkan adanya pitatunggal pada ukuran 96 kDa. Sedangkan prediksi kalkulasi berat molekulmenggunakan sekuens asam amino menunjukkan bobot molekul Bac1 adalah 4,9kDa. Hasil Uji KHM tidak menunjukkan aktivitas potensial Bac1 sebagaibakteriosin tunggal. ABSTRACT Bacteriocin is a well-known ribosommally synthesized polypeptide by manybacteria, which has antimicrobial effect. In a previous study, three putative doubleglycine motive peptide encoded in Weissella confusa MBF8-1. These putativebacteriocins were cloned in Bacillus subtilis DB403. This study aims to observeexpression and characterization recombinant bacteriocin, in particular Bac1 usingSodium Dodecyl Sulphate Polyacrilamide Gel (SDS ? PAGE) method. B.subtilisDB403 was cultivated and induced with xyllose to observe the expression ofrecombinant peptide. Then, cell was resuspended and purified with HisTrap FFAffinity Column 5 mL, followed by lyophilization. Characterization was done bySDS ? PAGE and was confirmed by antimicrobial activity assay performingMinimum Inhibitory Concentration (MIC). Indicator bacteria used wasLeuconostoc mesenteroides TISTR120. The existence of bac1 gene has beenproved by Polymerase Chain Reaction (PCR) using plasmid as template andspecific primer pairs. It is assumed that due to malfolding and aggreggationcaused by Histidin tag added to bac1 gene, Bac1 peptide cannot be succesfullycharacterized by SDS ? PAGE. Analysis of Bac1 fraction from elution buffer stepresulted a single band at 96 kDa. While, predictive calculation of molecularweight by Bac1 amino acid sequence is 4.9 kDa. MIC assay result did not showpotential activity of Bac1 as a single bacteriocin. |
 S65678-Angelina Wening Widiyanti.pdf :: Unduh
|
| No. Panggil : | S65678 |
| Entri utama-Nama orang : | |
| Entri tambahan-Nama orang : | |
| Entri tambahan-Nama badan : | |
| Subjek : | |
| Penerbitan : | [Place of publication not identified]: [Publisher not identified], 2016 |
| Program Studi : |
| Bahasa : | ind |
| Sumber Pengatalogan : | LibUI ind rda |
| Tipe Konten : | text |
| Tipe Media : | unmediated ; computer |
| Tipe Carrier : | volume ; online resource |
| Deskripsi Fisik : | xvi, 71 pages : illustration ; 30 cm + appendix |
| Naskah Ringkas : | |
| Lembaga Pemilik : | Universitas Indonesia |
| Lokasi : | Perpustakaan UI, Lantai 3 |
| No. Panggil | No. Barkod | Ketersediaan |
|---|---|---|
| S65678 | 14-18-298068929 | TERSEDIA |
| Ulasan: |
| Tidak ada ulasan pada koleksi ini: 20431926 |
