ABSTRAK
6-Merkaptopurin (6-MP) merupakan agen kemoterapi kanker yang termasuk dalamgolongan antimetabolit antagonis purin. 6-Merkaptopurin harus melalui jalurmetabolisme oleh tiopurin S-metiltransferase (TPMT) untuk menjadi metabolitinaktifnya, yaitu 6-metilmerkaptopurin (6-MMP) untuk mengurangi efek sitotoksikdari 6-MP yang dapat menyebabkan mielosupresi. Penelitian ini bertujuan untukmemperoleh metode optimum dan tervalidasi dalam menganalisis 6-MP dan 6-MMP secara simultan dalam sampel Dried Blood Spot menggunakan kromatograficair kinerja ultra tinggi tandem spektrometri massa. Larutan kontrol kualitas dankurva kalibrasi dibuat dengan menotolkan masing-masing sebanyak 40 μL padakertas CAMAG DBS dan dikeringkan selama 3 jam. Kertas DBS dipotong dengandiameter 8 mm dan diekstraksi dengan larutan asetonitril-metanol (1:3) yangmengandung baku 5-fluorourasil (5-FU). Pemisahan dilakukan dengan kolomWaters Acquity UPLC Class BEH C18 1,7 μm (2,1 x 100 mm) dengan fase gerakberupa asam format 0,1% dalam air ? asam format 0,1% dalam asetonitril dengangradient elusi dan laju alir 0,2 mL/menit. Deteksi massa dilakukan dengan WatersXevo TQD dengan Electrospray Ionization (ESI) positif untuk 6-MP dan 6-MMPdan ESI negative untuk 5-FU pada mode Multiple Reaction Monitoring. Deteksi 6-MP, 6-MMP, 5-FU berturut-turut adalah 153,09 > 119,09; 167,17 > 126,03; 129,09> 42,05. Metode ini linear dalam rentang 26 ? 1000 ng/mL untuk 6-MP dan 13 ?500 ng/mL untuk 6-MMP dengan r berturut-turut adalah ≥ 0,998 dan ≥ 0,999. Nilai% diff dan koefisien variasi (KV) untuk akurasi dan presisi intra hari dan antar haritidak lebih dari 15% dan tidak lebih dari 20% pada konsentrasi LLOQ. Metode inimemenuhi persyaratan selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, carry-over, dan efekmatriks yang mengacu pada EMEA Guidelines.
ABSTRACT
6-Mercaptopurine (6-MP) is a cancer chemotherapeutic agent that belongs to a classof purine antagonist antimetabolite. 6-Mercaptopurine has to go through themetabolic pathway by thiopurine S-methyltransferase (TPMT) to become itsinactive metabolite, 6-methylmercaptopurine (6-MMP) to reduce the cytotoxiceffect of 6-MP which can cause myelosuppression. This study aimed to obtain anoptimum and validated method in analyzing 6-MP and 6-MMP simultaneously inDried Blood Spot samples using ultra high-performance liquid chromatographytandem mass spectrometry. The quality control and calibration curves solutionswere made by respectively spot 40 μL at DBS CAMAG paper and dried for 3 hours.DBS papers were cut with a diameter of 8 mm and extracted with acetonitrilemethanol(1:3) containing internal standard 5-fluorouracil (5-FU). Separation wasperformed with Waters Acquity UPLC BEH C18 column Class 1.7 μm (2.1 x 100mm) with a mobile phase consists of 0.1% formic acid in water ? 0.1% formic acidin acetonitrile with gradient elution and flow rate 0.2 mL/minute. Mass detectionwas done using Waters Xevo TQD with positive electrospray ionization (ESI) for6-MP and 6-MMP and negative ESI for 5-FU in Multiple Reaction Monitoringmode. Detection of 6-MP, 6-MMP, 5-FU respectively was 153.09> 119.09;167.17> 126.03; 129.09> 42.05. This method is linear with the range 26-1000 ng /mL for 6-MP and 13 to 500 ng / mL for 6-MMP with consecutive r value is ≥ 0,998and ≥ 0,999. % Diff value and coefficient of variation (CV) for accuracy andprecision of intra-day and inter-day are not more than 15% and not more than 20%at a concentration LLOQ. This method fulfilled the requirements of selectivity,linearity, accuracy, precision, carry-over, and matrix effects which refers to theEMEA Guidelines. |
S64281-Marlina Ika.pdf :: Unduh