ABSTRAK
Adanya kerusakan sel hati pada infeksi virus Dengue (DENV) telah diketahuitetapi patogenesis yang mendasari hingga kini belum seluruhnya jelas. Penelitianini bertujuan untuk mengetahui lebih jelas patogenesis mekanisme yangmendasari kerusakan sel hati pada infeksi DENV dengan melihat efek langsungvirulensi virus dan efek tidak langsung.Kelompok penelitian terdiri dari: A. kontrol sel Huh7, B. Huh7 + DENV-2, C.Huh7 + antibodi NS-1, D. Huh7 + komplemen, E. Huh7 + antibodi NS-1 +komplemen, F. Huh7 + DENV-2 + antibodi NS-1 + komplemen, G. Huh7 +DENV-2 + antibodi NS-1, H. Huh7 + peripheral blood mononuclear cells(PBMC) dari pasien yang pernah terinfeksi DENV, I. Huh7 + DENV-2 + PBMCdari pasien yang pernah terinfeksi DENV, dan J. Huh7 + TNF-α. Aktivitas ASTdan ALT dari supernatan diukur sebagai indikator kerusakan sel Huh7.Median aktivitas pada sel Huh7 yang diberi DENV-2 0,1 moi selama 2 x 24 jam(AST 7 U/L dan ALT 3 U/L) lebih rendah bermakna dibandingkan kontrol (AST11 U/L dan ALT 4 U/L), yang menunjukkan efek anti-apoptotik DENV-2 padadosis 0,1 moi dan lama inkubasi 2 x 24 jam. Pada percobaan dengan berbagaidosis DENV dan lama inkubasi, didapatkan efek anti-apoptotik ini menghilangsetelah inkubasi 3 x 24 jam. Hasil tersebut menunjukkan kebenaran hipotesis efeklangsung merusak sel hati oleh infeksi DENV. Aktivitas AST 19 U/L dan ALT 8U/L pada sel Huh7 yang diberi antibodi NS-1 bersama komplemen lebih tinggibermakna dibandingkan kontrol sel Huh7 tanpa perlakuan (AST 11 U/L dan ALT4 U/L), maupun pemberian antibodi NS-1 saja (AST 10 U/L dan ALT 4 U/L).Hasil itu menunjukkan bahwa hipotesis molekular mimikri yang dibawakan olehantibodi NS-1 terbukti. Aktivitas AST 6,5 U/L pada pemberian antibodi NS-1bersama komplemen pada sel hati Huh7 yang sudah diinfeksi DENV-2 lebihrendah bermakna dibandingkan AST 11 U/L pada kontrol. Hasil itu menunjukkanDENV-2 memiliki efek anti-apoptotik yang mampu menghambat efek lisis dariantibodi bersama komplemen. Tidak terjadi peningkatan AST pada sel Huh7 yangdiberi PBMC saja (8 U/L), DENV-2 bersama PBMC (6 U/L) dan TNF-α saja (10U/L) dibandingkan kontrol (11 U/L).Dengan demikian, mekanisme kerusakan sel hati pada infeksi DENV in vitro yangdapat dibuktikan dengan penelitian ini adalah akibat efek langsung DENV-2 danmolekular mimikri pada sel hati yang dibawakan oleh antibodi NS-1.
ABSTRACT
The involvement of liver cell damage in Dengue virus (DENV) infection isalready known but the whole pathogenesis is still not clear. Virus virulence isinvolved but other mechanisms may also play a role. This study aimed tounderstand the pathogenesis of liver cell damage caused by DENV infection,through direct pathogenic effect of the virus and indirect effect of immunologicalreaction.The study groups were A. Huh7 liver cells, control, B. Huh7 + Dengue virus-2New Guinea C strains (DENV-2), C. Huh7 + NS-1 antibody, D. Huh7 +complement, E. Huh7 + NS-1 antibody + complement, F. Huh7 + DENV-2 +NS-1 antibody + complement, G. Huh7 + DENV-2 + NS-1 antibody, H. Huh7 +peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from previously DENV-infectedpatient, I. Huh7 + DENV-2 + PBMC from previously DENV-infected patient and,J. Huh7 + TNF-α. Activities of AST and ALT in the supernatant were measuredas indicator of liver cell damage.In the Huh7 cells, infected with DENV-2 0,1 moi (multiplicity of infection) andincubated for 2 x 24 hours, median AST 7 U/L and ALT 3 U/L were significantlylower compared to AST 11 U/L and ALT 4 U/L in Huh7 control cells. It wasconcluded that DENV-2 had anti-apoptotic effect at 0,1 moi dan incubation time 2x 24 hours. At various dosage of DENV-2 and incubation time study, the antiapoptoticeffect disappeared after 3 x 24 hours incubation; which means the effectwas temporary. The result proved the direct damaging effect of DENV to infectedliver cells. Activity of AST 19 U/L and ALT 8 U/L in Huh7 cells treated withNS-1 antibody together with complement, were significantly higher compared tocontrol (AST 11 U/L, ALT 4 U/L), and NS-1 antibody only (AST 10 U/L, ALT 4U/L). This result proved the molecular mimicry hypothesis by NS-1 antibody.Activity of AST 6,5 U/L in DENV-infected Huh7 cells treated with NS-1antibody and complement was significantly lower than AST 11 U/L in controlcells. This result indicated that DENV has anti-apoptotic effect that can inhibit thelytic effect of antibody and complement. There was no AST increase in Huh7treated with PBMC only (8 U/L), DENV-2 with PBMC (6 U/L) and TNF-α only(10 U/L) compared to control (11 U/L).The liver cell damage mechanisms of in vitro DENV infections which can beproven in this study are direct effect by DENV and molecular mimicry by NS-1antibody. |
D-Tonny Loho.pdf :: Unduh