ABSTRAK
Pendahuluan: Keloid adalah tumor jinak pada kulit yang ditandai denganpeningkatan deposisi kolagen yang disebabkan oleh tingginya aktivitas danproliferasi fibroblas. Karakteristik utama dari keloid adalah berada pada kondisihipoksia. Hypoxia inducible factor-1alpha HIF-1? dan HIF-2? merupakansubunit faktor transkripsi HIF-1 dan HIF-2 yang berperan penting pada adaptasiterhadap kondisi hipoksia. Kondisi hipoksia juga memicu sel memproduksireactive oxygen species ROS yang dapat ditangkal oleh sitoglobin Cygb . Padakeloid, Cygb juga berperan pada sintesis kolagen. Penelitian lain membuktikanbahwa terdapat situs pengikatan promoter HIF-1 pada hypoxia response element HRE Cygb, sedangkan situs pengikatan HIF-2 pada Cygb belum diketahui. HIF-1? dan HIF-2? juga diketahui berperan menginduksi ekspresi gen yang berperanpada proliferasi. Keduanya diketahui mengatur proliferasi sel pada beberapa jeniskanker. Namun, peran HIF-1? dan HIF-2? terhadap ekspresi Cygb dan proliferasifibroblas pada keloid belum diketahui. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuanmengetahui peran HIF-1? dan HIF-2? terhadap ekspresi sitoglobin dan proliferasifibroblas pada keloid, dengan melakukan penghambatan HIF-1? dan HIF-2? padafibroblas keloid menggunakan inhibitor HIF berupa ibuprofen. Metode:Pemeriksaan dilakukan terhadap ekspresi mRNA dan kadar protein HIF-1?, HIF-2?, dan sitoglobin, menggunakan metode qRT-PCR dan ELISA, serta proliferasisel menggunakan metode trypan blue exclussion assay setelah diberi ibuprofendan dibandingkan dengan kontrol yang tidak diinduksi dengan ibuprofen. Hasil:Penghambatan HIF-1? menyebabkan terjadinya penurunan ekspresi mRNA Cygbdan proliferasi fibroblas pada keloid. Hal ini membuktikan bahwa HIF-1?berperan sebagai faktor transkripsi Cygb, dan juga berperan menginduksi ekspresigen yang berperan pada proliferasi fibroblas keloid. Akan tetapi, peran HIF-2?dalam meregulasi sitoglobin dan mempertahankan proliferasi fibroblas keloidbelum berhasil dibuktikan. Kesimpulan: HIF-1? berperan meregulasi eksrepsiCygb dan berperan pada proliferasi fibroblas keloid. Akan tetapi, HIF-2? belumterbukti meregulasi eksrepsi Cygb dan berperan pada proliferasi fibroblas keloid.
ABSTRACT
Background Keloid is a benign tumor which is characterized by overabbundance of collagen deposition caused by high activity and proliferation offibroblast. The main characteristics of keloid is hypoxia. HIF 1 and HIF 2 aretwo subunits of transcrption factors HIF 1 and HIF 2 which mediate adaptationto hypoxic condition. Hypoxic condition also induces cells to produce reactiveoxygen species ROS which can be scavenged by cytoglobin Cygb . In keloid,Cygb also plays important role in collagen synthesis. Other studies prove thatthere is a binding site of HIF 1 promoter on hypoxia response element HRE ofCygb. Whereas, HIF 2 binding site on HRE of Cygb is not cleraly understood.HIF 1 and HIF 2 also play important role to induce expression of many geneswhich involved in cells proliferation. Both HIF 1 and HIF 2 are known toregulate cells proliferation in many cancer types. However, the role of HIF 1 andHIF 2 to Cygb expression and fibroblast proliferation in keloid is not fullyunderstood. Therefore, the aim of this study is to determine the role of HIF 1 andHIF 2 on Cygb expression and fibroblast proliferation in keloid, by doing aninhibition of HIF 1 and HIF 2 in keloid fibroblast primary culture usingibuprofen as HIF inhibitor. Methods Analysis was conducted by analizing HIF 1 , HIF 2 , and Cygb mRNA expression and protein level using qRT PCR andELISA, and fibroblast proliferation analysis was conducted using trypan blueexclusion assay after given with ibuprofen and compared with control which isnot given with ibuprofen. Results Inhibition of HIF 1 caused a decrease onCygb mRNA expression and fibroblast proliferation on keloid. These findingsprove that HIF 1 acts as transcription factor of Cygb, and also inducesexpression of gene which plays a role on fibroblast proliferation in keloid.However, the role of HIF 2 in regulating and maintaining Cygb expression andfibroblast proliferation in keloid was not succesfully proven. Conclusion HIF 1 regulate Cygb expression and fibroblast proliferation in keloid. However, HIF 2 role on Cygb expression and fibroblast proliferation has not be proven yet. |
T-Dewi Hambar Sari.pdf :: Unduh