ABSTRAK
Pada penelitian ini, dilakukan studi kinetika dan aktivitas anti platelet bromelain yang telah dimurnikan dari bonggol nanas Palembang (Ananas comosus [L] Merr). Pemurnian enzim dimulai dengan isolasi enzim bromelain, kemudian dilakukan fraksionasi bertingkat menggunakan garam amonium sulfat dan dilanjutkan dengan kromatografi gel filtrasi dengan Sphadex G-50. Enzim kasar yang didapatkan dari tahap isolasi memilki aktivitas spesifik sebesar 53,580 Unit/mg. Fraksionasi dengan metode fraksinasi bertingkat menggunakan garam amonium sulfat menghasilkan fraksi enzim yang memiliki aktivitas spesifik tertinggi adalah fraksi dengan tingkat kejenuhan amonium sulfat 20%-50%, dengan aktivitas spesifik sebesar 230,970 Unit/mg dan tingkat kemurnian sebesar 8 kali lebih murni dibandingkan dengan enzim kasar. Pemurnian lebih lanjut dengan kromatografi Sphadex G-50 fraksi enzim bromelain mengalami peningkatan nilai aktivitas spesifik menjadi 431,548 Unit/mg dengan tingkat kemurnian sebesar 28 kali enzim kasar. Uji aktivitas fraksi bromelain termurni terhadap variasi pH dan suhu menunjukkan pH optimum bromelain pada pH 7 dan suhu optimum 37oC. Pada variasi konsentrasi substrat, dengan membuat plot kurva Michaelis-Menten dan Lineweaver-Burk, didapatkan konstanta Michaelis-Menten (Km) untuk bromelain adalah 0,777 % dan nilai Vmaks sebesar 3,969 U/min. Uji aktivitas antiplatelet menunjukkan fraksi bromelain dari setiap tahap pemurnian memiliki kemampuan sebagai agen antiplatelet. Aktifitas antiplatelet tertinggi terdapat pada fraksi enzim termurni dengan nilai persen agregasi sebesar 48,64 % dan persen inhibisi 47,583%. IC50 dari fraksi enzim termurni adalah sebesar 88,314 L/mL.
ABSTRACT
kinetic study and activity as anti platelet agent of Bromelain enzyme from Palembang Pineapple's core (Ananas Comosus [L] Merr) was performed. The purification step begins with the isolation of bromelain enzyme, then fractionation using ammonium sulfate and continued by gel filtration chromatography using sphadex G-50. Crude enzyme obtained from pineapple's core has specific activity of 53,580 Unit / mg. Fractionation by multilevel saturity of ammonium sulphate salt showed highest activity at 20% -50% level of saturation, with a certain Activity of 230,970 Unit / mg and a purity level of 8 times purer from crude enzymes. Further purification by Sephadex G-50 chromatography has increased secific activity to 431,548 Units / mg with a purity level of 28 times from crude enzymes. The purest bromelain fraction activity test against pH and temperature variations showed the optimum pH of bromelain at pH 7 and optimum temperature of 37oC. In the variation of substrate concentration, by plotting curves of Michaelis-Menten and Lineweaver-Burk, obtained Michaelis-Menten (Km) constant for bromelain enzyme is 0,777% and vmax value is 3,969 U / min. The antiplatelet activity test showed that fractions of the bromelain enzyme from each purification step showed the ability of an antiplatelet agent. Highest antiplatelet activity in the purest enzyme fraction with aggregate percent value of 48,64% and percentage of inhibition 47,583%. IC50 of the purest enzyme fraction, is 88,314 L / mL |
S70127-Indra nurhidayat .pdf :: Unduh