Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"

Demam berdarah dengue (DBD) merupakan penyakit infeksi global dengan insiden dan mortalitas tinggi. Virus dengue (DENV), penyebab dari infeksi ini, memiliki vektor nyamuk Aedes aegypti dan Aedes albopictus. Namun, hingga saat ini belum ada antivirus spesifik yang tersedia dan upaya pencegahan masih belum efektif. Propil galat merupakan unsur fenolik berpotensi sebagai kandidat antivirus DENV, tetapi belum diketahui bagaimana mekanisme penghambatannya. Pada penelitian ini, akan dilakukan analisis penghambatan reseptor sel dan pengikatan envelope DENV oleh propil galat untuk mengidentifikasi mekanisme propil galat sebagai antivirus DENV secara in vitro dan in silico. Studi ini merupakan eksperimen laboratorium untuk menganalisis mekanisme propil galat sebagai antivirus DENV pada tahap penempelan virus secara in vitro. Strain DENV yang digunakan adalah DENV-2 dan sel kultur yang digunakan adalah sel Vero. Persentase penghambatan diperoleh dengan metode focus assay, sedangkan persentase viabilitas menggunakan metode MTT assay. Selain itu, uji in silico dilakukan untuk mengetahui energi ikatan dan konstanta inhibisi propil galat terhadap protein E. Persentase penghambatan propil galat perlakuan reseptor dan protein E yakni berturut-turut sebesar 9 ± 2,65% dan 53 ± 9,85%. Persentase viabilitas pada perlakuan tahap penempelan virus ke sel adalah 125±1%. Energi ikatan propil galat terhadap protein E adalah -3,21 kkal/mol dengan konstanta inhibisi sebesar 4,44 mM. Propil galat memiliki efek penghambatan terhadap DENV-2 dan tidak toksik jika diberikan pada tahap penempelan virus secara in vitro. Energi ikatan antara protein E dengan propil galat sangat rendah sehingga ikatannya spontan dan afinitasnya baik. Propil galat lebih berpotensi sebagai profilaksis DENV-2.

---

Dengue hemorrhagic fever (DHF) is a global infectious disease with a high incidence and mortality. Dengue virus (DENV), the etiologic agent, has Aedes aegypti and Aedes albopictus as its vectors. However, there is no specific antivirus available and prevention efforts are still ineffective. Propyl gallate is a potential candidate for DENV antivirus, but the mechanism is not yet known. In this study, inhibition of cell receptor and binding of DENV envelope by propyl gallate were conducted to identify its in vitro and in silico mechanism as an anti-DENV. This is an experimental study to analyze the mechanism of propyl gallate as  DENV antivirus in viral attachment stage. DENV-2 was the strain used and the culture cell used was the Vero cell. The inhibitory percentage was obtained by focus assay method, while the viability percentage using MTT assay method. In addition, in silico test was carried out to calculate propyl gallates binding energy and inhibition constant for protein E. The inhibitory percentage of propyl gallate towards receptor and viral envelope are 9±2.65% and 53±9.85%, respectively. The viability percentage in viral attachment inhibition was 125±1%. The binding energy of propyl gallate to protein E was -3.21 kcal/mol with inhibition constant of 4.44 mM. Hence, propyl gallate has an inhibitory effect on DENV-2 and is non-toxic if given in viral attachment stage. The low binding energy between protein E and propyl gallate shows spontaneous bond with a good affinity. Propyl gallate is more potential as DENV-2 prophylaxis.

 

"

"Infeksi virus dengue (DENV) merupakan salah satu masalah kesehatan global yang belum dapat diatasi. IFN-γ merupakan respon imun yang berperan dalam mekanisme antivirus yang juga dapat memicu reaksi inflamasi dalam perjalanan infeksi DENV. Berdasarkan hasil penelitian sebelumnya, diketahui propil galat dan etil galat memiliki kemampuan anti DENV, yang dalam penelitian ini dianalisis lebih lanjut mekanismenya dalam menghambat replikasi DENV dengan sistem kultur sel Vero, potensi antiinflamasi melalui pembentukan spot sel PBMC penghasil IFN-γ dengan sistem ADE, serta analisis ADMETox dan molecular docking yang menargetkan propil galat dan etil galat terhadap protein DENV secara in-silico. Propil galat dan etil galat terbukti memiliki aktivitas antiDENV tertinggi pada tahap pasca-infeksi, 94,04 ± 1,75% (propil galat) dan 92,07 ± 2,20% (etil galat). Pemberian propil galat dan etil galat juga terbukti dapat menurunkan jumlah SFU IFN-γ pada PBMC yang diinfeksikan DENV, 366,83±6,03 (propil galat 2xIC50), 315,75±4.99 (etil galat 2xIC50). Hasil studi ADMETox kedua antivirus ini memenuhi 5 kaidah aturan Lipisnki dan tidak bersifat toksik. Sementara itu, docking terhadap protein E, NS1, dan NS3 menghasilkan nilai energi ikatan terbesar pada protein NS3. Propil galat dan etil galat mempunyai potensi untuk dikembangkan sebagai kandidat obat untuk infeksi DENV.

---

Dengue virus infection (DENV) is one of the global health problems that has yet to be solved. In the course of DENV infection, IFN-γ is an immune response that plays a role in antiviral mechanisms that can also trigger inflammatory reactions. From the results of previous studies, it is known that propyl gallate and ethyl gallate have anti-DENV abilities. This study are further analyzed for their mechanisms in inhibiting DENV replication with the Vero cell culture system, anti-inflammatory potential through the formation of IFN-γ-producing PBMC cell spots with the ADE system, and analysis ADMETox of propyl gallate and ethyl gallate and binding targets evaluation to DENV proteins through in-silico analysis. Propyl gallate and ethyl gallate were shown to have the highest antiDENV activity at the post-infection stage, 94.04 ± 1.75% (propyl gallate) and 92.07 ± 2.20% (ethyl gallate). Administration of propyl gallate and ethyl gallate was also shown to reduce the number of SFU IFN-γ in DENV-infected PBMCs, 366.83 ± 6.03 (propyl gallate 2xIC50), 315.75 ± 4.99 (ethyl gallate 2xIC50). The results of the ADMETox study of these two antivirals fulfill the 5 rules of Lipisnki's rule and are not toxic. Meanwhile, docking against E, NS1, and NS3 proteins resulted in the largest binding energy value on the NS3 protein. Propyl gallate and ethyl gallate have the potential to be developed as drug candidates for DENV infection."

"Pendahuluan: Demam berdarah dengue (DBD) merupakan penyakit infeksi virus dengue (DENV) dengan vektor Aedes aegypti. Pada tahun 2016, terdapat 290 ribu kasus dengue di dunia dan 68.507 kasus DBD di Indonesia pada tahun 2017. Regimen terapi DBD adalah terapi suportif yaitu terapi cairan dan simptomatik. Butil galat memiliki potensi sebagai antiviral dengue. Namun, mekanisme penghambatannya masih belum diketahui sehingga penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efek butil galat terhadap penghambatan reseptor dan penempelan virus dengue serotipe 2 (DENV-2) in vitro dan ikatan energi butil galat dengan protein E secara in silico.Metode: Penelitian ini merupakan studi eksperimental untuk menganalisis mekanisme butil galat sebagai antiviral dengue in vitro terhadap DENV-2 menggunakan sel Vero sebagai sel uji dan in silico untuk mengetahui ikatan energi butil galat dengan protein E DENV. Focus assay dan MTT Assay digunakan untuk menilai pengambatan reseptor dan penempelan virus, serta viabilitas sel secara berturut-turut. Konsentrasi butil galat yaitu dua kali IC50. DMSO digunakan sebagai kontrol.Hasil: Persentase hambat pada reseptor dan penempelan virus adalah 28,68% dan 36,10%, viabilitas sel bernilai 108,69% serta ikatan energi bernilai -4,89 kkal/mol dengan konstanta inhibisi 0,26 mM.Kesimpulan: Butil galat memiliki efek penghambatan penempelan virus yang lebih baik daripada reseptor serta memiliki ikatan yang baik dengan protein E.

---

Introduction: Dengue hemorrhagic fever (DHF) is an infectious disease caused by dengue virus (DENV) with vector Aedes aegypti. In 2016, 290 thousand people were diagnosed with DHF. In 2017, there are 68,507 DHF cases in Indonesia. Therapy regiment of DHF are supportive treatments; fluid therapy and symptomatic therapy. Butyl gallate has potential antiviral activity against dengue serotype 2 virus (DENV-2). However, the inhibitory mechanism is still unknown. Therefore, this research aims to find out the effect of butyl gallate in receptor and virus attachment inhibition of DENV-2 in vitro and binding energy between butyl gallate and protein E DENV in silico.

Method: Experimental study was done to analyze butyl gallate mechanism as dengue antiviral in vitro to DENV-2 using Vero cell as test cell and in silico to calculate binding energy between butyl gallate and DENV’s E protein. Focus assay and MTT assay were used to evaluate receptor inhibition and virus attachment as well as cell viability, respectively. Butyl gallate concentration was twice that of IC50. DMSO was used as control.

Results: Inhibition percentage on receptor and virus attachment yielded 28.68% and 36.10%, Cell viability yielded 108.69%, and energy bond valued -4.89 kcal/mol with inhibition constant of 0.26 mM

Conclusion: Butyl gallate had higher inhibition effect on virus attachment compared to receptor and had stronger bond with E protein.

"

"ABSTRAKInfeksi dengue memiliki prevalensi yang tinggi di dunia, dengan spektrum penyakit yang luas yaitu Demam Dengue, Demam Berdarah Dengue, dan Sindrom Syok Dengue. Namun, tatalaksana yang ada tidak bersifat spesifik. Sudah banyak penelitian yang dilakukan untuk mencari vaksin dan antivirus dengue. Salah satu yang sudah terbukti memiliki efek antivirus dengue adalah senyawa turunan asam galat yaitu propil galat dan etil galat. Penelitian eksperimental ini bertujuan untuk mengetahui efek antivirus campuran propil galat dan etil galat terhadap virus dengue serotipe 2 pada sel Huh7it-1. Efek sitotoksisitas senyawa terhadap sel diuji dengan metode 3- 4,5-dimethylthiazol-2-yl -2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Nilai yang didapat digunakan untuk mencari nilai konsentrasi toksik 50 . Efek inhibisi senyawa terhadap replikasi virus diuji dengan metode focus assay. Nilai yang didapat digunakan untuk mencari nilai konsentrasi hambat 50 . Dari hasil penelitian didapatkan nilai CC50 = 117.942 mg/ml, IC50 = 4.455 mg/ml, dan SI = 26.474. Campuran propil galat dan etil galat memiliki efek antivirus terhadap DENV-2 dan cukup selektif.

---

ABSTRACTDengue infection have a serious prevalence in worldwide with a broad spectrum of disease from dengue fever, dengue hemorrhagic fever, and dengue shock syndrome. Otherwise, the nowadays treatment seems not specific for the dengue itself. There were a lot of study to search for the vaccine and the antivirus. One of the successful study that contained a significant effect of dengue antivirus is a chemical compound from gallate acid named propyl gallate and ethyl gallate. This experimental study aim to know the antivirus effect from the mixture of propyl gallate and ethyl gallate to the dengue virus serotype 2 in Huh7it 1 cells. Cytotoxicity effect of the mixture to the cells tested by 3 4,5 dimethylthiazol 2 yl 2,5 diphenyltetrazolium bromide assay technique. Obtained results can be used to search for the half cytotoxic concentration. The inhibition effect from this mixture to the viral replication processes tested by focus assay technique. Obtained results can be used to search for the half inhibitory concentration. From this study, the value of CC50 is 117.942 g mL, meanwhile the value of IC50 is 4.455 g mL with the SI value is 26.474. The mixture of propyl gallate and ethyl gallate have an antivirus effect to DENV 2 strain which are quite selective."

"ABSTRAKInfeksi dengue (DENV) merupakan salah satu penyakit endemik di daerah tropis dan subtropis yang disebabkan oleh virus dengue melalui vektor nyamuk dari genus Aedes, khususnya oleh Aedes aegypti dan Aedes albopictus. Hingga saat ini belum ada pengobatan yang efektif untuk mengatasi infeksi dengue. Salah satu pengobatan baru yang dibutuhkan bersifat antivirus yang dapat menghambat aktivitas enzim yang berperan dalam replikasi di dalam tubuh. Pada penelitian ini dilakukan pengujian dari senyawa asam galat dan enam turunannya (benzil-, propil, dialil-, alil-, etil-, dan salisil galat) secara in vitro pada sel Huh7it-1 dengan DENV2 dan secara in silico dengan docking protein-ligan terhadap strain NGC dan 251 sekuens NS5 pada GenBank (NS5 konsensus). Salisil galat merupakan kandidat paling potensial secara in vitro (IC50: 12,18 μg/ mL, CC50: 259,35 μg/ mL, SI: 21,30) dan in silico (S: -16,793 kkal/ mol, pKi 3,344 μM). Propil galat dan etil galat ditemukan potensial secara in vitro (untuk propil galat, IC50: 13,19 μg/ mL, CC50: 241,85 μg/ mL, SI: 18,33; untuk etil galat, IC50: 14,39 μg/ mL, CC50: 185,60 μg/ mL, SI: 7,24), namun secara in silico paling rendah nilainya (untuk propil galat, nilai S: -11,908 kkal/mol, pKi 5,771 μM; untuk etil galat, nilai S: -5,513 kkal/mol, pKi 4,974 μM). Melalui docking pada sekuens konsesus NS5 diketahui, setiap jenis asam galat potensial tersebut dapat berikatan dengan masing-masing GLU715, LYS668, ASN701, THR584; ARG472, ASP663, ARG207; dan LYS139, ARG207. Secara keseluruhan, turunan asam galat hasil modifikasi memberikan hasil lebih baik dibandingkan dengan senyawa aslinya

---

ABSTRACTDengue infection (DENV) is an endemic disease in tropical and subtropical regions caused by dengue virus that is transmitted by mosquitos of Aedes aegypti and Aedes albopictus. Currently, there is no effective treatment to overcome dengue infection. As alternative, a new approach of drug is needed by targeting inhibition of enzyme activity that responsible for viral replication. In this research examined synthetic gallic acid and its six derivatives (benzyl-, propyl, diallyl-, allyl-, ethyl-, and salicyl gallate) through in vitro in Huh7it-1 with DENV2 and in silico with protein-ligand docking against 251 sequences NS5 in GenBank. Salicyl gallate was the best candidate in in vitro analysis (IC50: 12,18 μg/ mL, CC50: 259,35 μg/ mL, SI: 21,30) and in in silico analysis (S: -16,739 kkal/ mol, pKi 3,344 μM). Propyl- and ethyl gallate were showed potential in in vitro (for propyl gallate, IC50: 13,19 μg/ mL, CC50: 241,85 μg/ mL, SI: 18,33; for ethyl gallate, IC50: 14,39 μg/ mL, CC50: 185,60 μg/ mL, SI: 7,24), however showed lowest scoring in in silico (for propyl gallate, S score: -11,908 kkal/mol, pKi 5,771μM; for ethyl gallate, S score: -5,513 kkal/mol, pKi 4,974μM). Using docking, each of potential gallic acid types above was able to bind to GLU715, LYS668, ASN701, THR584; ARG472, ASP663, ARG207; dan LYS139, ARG207. Overall, derivatives gallic acid modified was showed better result rather than original compound"

"ABSTRAKDemam Berdarah Dengue DBD merupakan salah satu penyakit infeksi dengan prevalensi yang cukup tinggi di negara-begara beriklim tropis maupun sub-tropis, termasuk Indonesia. Penyakit ini disebabkan oleh infeksi virus Dengue. Beragam penelitian telah dilakukan dan dikembangkan guna menemukan zat-zat atau senyawa baru yang memiliki potensial untuk dijadikan antivirus dengue, dengan fokus penelitian utama menggunakan bahan-bahan herbal. Penelitian ini bertujuan untuk melihat efektivitas antiviral campuran senyawa turunan asam galat berupa propil galat dan metil galat terhadap Dengue Virus Serotipe-2 DENV-2 dengan menggunakan sel Huh7it-1. Variabel bebas penelitian adalah konsentrasi campuran metil galat dan propil galat. Variabel terikat berupa nilai Inhibitory Concentration 50, Cytotoxic Concentration 50, dan Selectivity Index masing-masing sebesar 4.911 ?g/ mL ?g/mL didapatkan dengan teknik focus assay, 113.788 ?g/mL didapatkan dengan menggunakan teknik MTT assay, dan 23.168. Hasil uji analisis bivariat menunjukkan hubungan yang bermakna antara konsentrasi campuran metil galat dan propil galat yang diberikan dengan persen infektivitas dan persen viabilitas P=0.003. Dapat disimpulkan bahwasannya campuran metil galat dan propil galat memiliki poensial untuk menjadi antivirus DENV-2.

---

ABSTRACTDengue Haemorrhagic Fever DHF is one of the highest prevalent diseases in tropical dan sub tropical countries, including Indonesia. This disease is caused by Dengue virus infection. Researches have been done and developed through years to find potential compounds to be dengue antivirus, especially using herbal resources. The goal of this study is to observe the antiviral efectivity of Methyl Gallate and Prophyl Gallate Mixtures against DENV 2. This study is performed in Huh7it 1 cells using in vitro technique. The independent variable of this study is the concentration of methyl gallate and prophyl gallate mixtures. The dependent variables are Inhibitory Concentration 50 with focus assay, Cytotoxic Concentration 50 with MTT assay, and Selectivity Index, with values respectively 4.911 g mL, 113.788 g mL, and 23.168 The results from bivariate analytical study shows significant relation between the concentration of methyl gallate and prophyl gallate mixtures given in the study with the infectivity and viability persentation P 0.003 . Therefore, we can say that methyl gallate and prophyl gallate mixtures have the potential to be the antivirus against DENV 2. "

"Dengue adalah salah satu penyakit yang ditularkan melalui nyamuk dengan prevalensi yang tinggi di Indonesia dan menyebabkan berbagai spektrum penyakit, mulai dari ringan hingga mematikan seperti sindrom syok dengue. Meskipun dengue memiliki angka insidens dan angka kematian yang tinggi, tetapi anti virus untuk dengue virus (DENV) belum ditemukan. Sehingga, riset mengenai pengembangan anti virus dengue sangatlah dibutuhkan. Tujuan dari studi ini adalah untuk mengevaluasi aktivitas antivirus dari isobutil galat terhadap virus dengue in vitro. Pada eksperimen ini, sel Huh-7-it diinfeksi dengan DENV2 strain NGC dan diperlakukan dengan isobutil galat pada berbagai konsentrasi. Replikasi virus dihitung dengan menggunakan Focus Forming Unit (FFU). IC50 didapat dengan menggunakan focus assay, sedangkan CC50 dihitung menggunakan MTT assay. Nilai selectivity index (SI) ditentukan sebagai rasio CC50 terhadap IC50. Isobutil galat menunjukan sedikit efek sitotoksik terhadap sel Huh dengan nilai CC50 sebesar 167.19 μg/mL dan aktivitas anti-inflamasi yang kuat (IC50=4.45 μg/mL) dan memiliki nilai SI yang signifikan, yaitu 25.69. Isobutil galat memiliki potensi sebagai antivirus dengue yang baik. Namun, diperlukan penelitian lebih lanjut untuk memeriksa aktivitas inhibitori dari isobutil galat terhadap DENV in vivo.Dengue is a mosquito-borne disease with a high prevalence in Indonesia and causes a wide spectrum of diseases, ranging from mild to deadly, such as dengue shock syndrome. Although dengue has a high incidence and mortality rate, anti-virus for dengue virus (DENV) has not been found. Thus, research on the development of anti-dengue virus is needed. The aim of this study was to evaluate the antiviral activity of isobutyl gallate against dengue virus in vitro. In this experiment, Huh-7-it cells were infected with DENV2 strain NGC and treated with isobutyl gallate at various concentrations. Virus replication was calculated using the Focus Forming Unit (FFU). IC50 was obtained using focus assay, while CC50 was calculated using MTT assay. The selectivity index (SI) value is determined as the ratio of CC50 to IC50. Isobutyl gallate showed a slight cytotoxic effect on Huh cells with a CC50 value of 167.19 g/mL and strong anti-inflammatory activity (IC50=4.45 g/mL) and a significant SI value of 25.69. Isobutyl error has potential as a good dengue antiviral. However, further studies are needed to examine the inhibitory activity of isobutyl gallate against DENV in vivo."

"Dengue berdarah dengue (DBD) di Indonesia adalah salah satu penyakit utama sejak 47 tahun yang lalu, yang terus meningkat hingga sekarang. Saat ini belum tersedia pengobatan spesifik Dengue Virus (DENV) yang efektif dan tersedia secara komersial, melainkan hanya sebatas terapi suportif. Penggunaan antivirus dapat menurunkan tingginya angka morbiditas dan mortalitas yang disebabkan dari infeksi DENV, di mana senyawa murni terus berkembang menjadi salah satu kandidatnya. Piperine adalah senyawa murni yang dapat ditemukan di beragam herbal yang tergolong dalam famili Piperaceae. Penelitian ini ialah studi eksperimental mengenai efektivitas Piperine sebagai antivirus terhadap DENV-2 galur New Guinea C pada galur sel manusia, Huh7it-1. Efektivitas didapat melalui perhitungan indeks selektivitas, melalui perbandingan nilai CC₅₀ dengan IC₅₀ Piperine. CC₅₀ dan IC₅₀ secara berurutan diuji menggunakan uji MTT assay dan focus assay. Berdasarkan penelitian ini, nilai CC₅₀ dan IC₅₀ yang didapat ialah 227,096 µg/ml dan 10,708 µg/ml, menghasilkan 21,208 indeks selektivitas. Tingginya CC₅₀ dan rendahnya IC 50 menghasilkan indeks selektivitas yang tinggi, sehingga membuktikan bahwa Piperine memiliki aktivitas penghambatan DENV yang tinggi dengan memiliki efek toksisitas yang rendah pada Huh7it-1. Dapat disimpulkan bahwa Piperine adalah senyawa murni yang dapat menjadi kandidat dalam antivirus DENV di kemudian hari.

---

Dengue hemorrhagic fever (DHF) in Indonesia has been one of the major health problems since 47 years ago, which continuously increasing until now. There is no effective and commercially available antiviral drug specific to DENV, but they are now only limited to supportive therapies. The use of antiviral can decrease the morbidity and mortality rates caused by DENV infection, where pure compounds of many herbs are currently developing to become antiviral candidate. Piperine is an alkaloid found in various plants belonging to Piperaceae family. This is an experimental study regarding the effectivity of Piperine as antiviral against DENV-2 strain New Guinea C in human cell line, Huh7it-1. The effectivity of Piperine is measured through selectivity index (SI), obtained from the ratio between the half-cytotoxic concentration of Piperine (CC₅₀) and its half-inhibitory concentration (IC₅₀). CC₅₀ and IC₅₀ were measured respectively through MTT assay and focus assay techniques. From this experiment, CC₅₀ and IC₅₀ obtained were 227.096 µg/ml and 10.708 µg/ml, respectively - thus resulting 21.208 as its SI. The high CC 50 and low IC 50 , that create high SI indicates that Piperine has high antiviral activity against DENV with low toxicity in human cell line Huh7it-1. Therefore, the conclusion drawn is that Piperine is an effective candidate for antiviral against DENV-2 in the future. "

"Latar Belakang: Infeksi virus dengue (DENV) masih endemis di Indonesia dan di banyak negara tropis. Hingga saat ini belum ada antivirus terhadap DENV. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan antivirus dari tanaman Cassia alata Linn (CA) terhadap DENV-2 secara in vitro, in vivo, dan in silico.Metode: Penelitian ini dilakukan dilakukan di Laboratorium LIPI dan Departemen Mikrobiologi FKUI, 2017-2019. Penelitian in vitro menggunakan DENV serotipe 2 strain New Guinea C (NGC) dan sel Huh 7it-1. DENV diberi perlakuan ekstrak CA dan fraksi dan senyawa murni hasil isolasi dengan bebagai dan konsentrasi untuk menentukan nilai IC₅₀ dan CC₅₀. Penentuan nilai IC₅₀ dan CC₅₀ melalui uji fokus dan MTT secara berurutan. Selanjutnya dilakukan percobaan untuk menentukan mekanisme penghambatan pada tahapan reseptor, pre, post dan pre/post infeksi dari ektrak CA dan fraksinya. Uji efikasi ekstrak CA in vivo dilakukan pada model mencit Balb/c dengan melakukan pengukuran titer virus dengue, jumlah trombosit, leukosit, IL-6 dan IL-10 yang dilanjutkan dengan uji  toksisitas akut  ekstrak CA.  Dilakukan juga uji in silico untuk mengetahui interaksi antara senyawa dengan  protein DENVmenggunakan software Autodock 1.5.6.Hasil: Uji in vitro menunjukkan nilai IC₅₀ ekstrak CA, fraksi heksan, etil asetat, butanol, dan air berturut-turut adalah 0,026; 0,004; 0,0013; 4,6; dan 2,5 mg/ml dengan nilai CC₅₀ berturut-turut adalah 208,9; 47,46; 57,2; 753,8; 311,33 mg/ml. Hasil uji mekanisme pada dosis 10 mg/ml, ekstrak CA, fraksi heksan dan etil asetat menunjukkan hambatan pada tahapan reseptor, pre, post dan pre/post infeksi yang lebih baik dibandingkan fraksi butanol dan etil asetat. Ekstrak CA dapat menghambat keempat mekanisme di atas dengan nilai >95%. Fraksi heksan dan etil asetat menghambat 100% pada post dan pre/post infeksi. Hasil uji in vivo dengan pemberian ekstrak 1 hari setelah infeksi menunjukkan bahwa ekstrak CA dosis 0,2; 0,4; 1 g/kg bb menurunkan titer virus DENV-2 dan menaikkan hitung trombosit  secara bermakna dibandingkan dengan kelompok DENV-2 tanpa ekstrak . Ekstrak CA tidak  memberikan efek terhadap jumlah leukosit dan kadar sitokin IL-6 dan IL-10. LD₅₀ semu ekstrak CA > 15 g/kg bb. Aloe-emodin diisolasi dari ekstrak CA dengan metode kolom kromaografi. IC₅₀ senyawa kaempferol, emodin dan aloe-emodin  terhadap DENV-2 berturut-turut adalah  22,24; 42,47; 7,51 mg/ml, dan CC₅₀ terhadap Huh7-it 1 berturut-turut 68,28; 74,19; 68,28 mg/ml. Uji in silico  ketiga senyawa menunjukkan bahwa mekanisme penghambatan ekstrak CA yang paling stabil adalah terhadap protein NS5 (IL9K4) dimana diperoleh tingkat energi bebas (DG) terendah.Kesimpulan: Ekstrak CA menghambat DENV-2 secara in vitro dan in vivo. Selain menurunkan titer virus dengue, ekstrak CA juga  meningkatkan hitung trombosit, dengan mekanisme penghambatan in vitro >95% pada tahap pre, post, pre/post dan reseptor. Mekanisme penghambatan fraksi heksan dan EA terbaik pada post dan pre/post infeksi sebesar 100%. Ikatan paling stabil senyawa yang terdapat didalam ekstrak CA adalah ikatan dengan protein NS5.

---

Background: Dengue virus infection (DENV) is still endemic in Indonesia and in many tropical countries. Until now there is no anti viral available against dengue virus. This study aimed to investigate the antiviral effects of Cassia alata Linn (CA) leaves on DENV in vitro, in vivo, and in silico.Methods: This research was carried out at Laboratories of LIPI, Department of Microbiology  FMUI, 2017-2019. In vitro tests of CA extract,fractions and isolated compound were carried out to determine the IC₅₀, CC₅₀  and the inhibition mechanism  at receptor, pre, post and pre/post infection stages. In vivo efficacy  of CA extract was tested in mice Balb/c model. Dengue virus titers, platelet, leukocytes and IL-6 and IL-10 in bloods were measured. Acute oral toxicity test was carried out to determine the LD₅₀ of CA extract.  Isolation of compounds was carried out  from CA extract. In silico test was carried out to know interaction test compound with DENV protein using Autodock 1.5.6 software.Results: The results of the in vitro test showed that  the IC₅₀ of CA extract, hexane, ethyl acetate, butanol, and water fraction  against DENV-2 were 0.026; 0,004; 0.0013; 4.6; and 2.5 mg/ml and the CC₅₀ to Huh 7 it-1 were 208.9; 47.46; 57.2; 753,8; 311.33 mg/ ml, respectively. The results of the  mechanism study showed that at a dose of 10 mg/ml, CA extract, the hexane and ethyl acetate fractions  inhibited DENV-2 at the receptor stage, pre, post and pre/post infection which were better than the butanol and ethyl acetate fractions. CA extract inhibited the four mechanisms above by more than 95%.  Hexane and ethyl acetate fractions inhibited DENV-2 100% at post and pre-post infection stages. In vivo test showed that  the administration of CA extract at doses of 0.2; 0.4; 1 g/kg bw 1 day after DENV-2 infection  significantly reduced virus titers and increased platelet counts compared to DENV-2 infected group only. CA extract did not affect the number of leukocytes and  cytokines of IL-6 and IL-10 back to normal which had been altered in  the DENV-2 group. LD₅₀ of CA extract was more than 15 g/kg bw. Aloe-emodin was isolated from CA extract used column chromatography. The IC₅₀ of  kaempferol, emodin and aloe emodin to Huh7-it 1, respectively were 22.24; 42,47; 7.51 mg ml, and the CC₅₀ respectively were 68.28; 74,19; 68.28 mg/ml. In silico study of the three compounds showed that the most stable inhibition mechanism of CA extract was on protein NS5 (IL9K4) which had the lowest free energy (DG) level.Conclusion: CA extracts have high inhibitory activity against DENV-2 in vitro and in vivo. In addition to reducing dengue virus titers, CA extract also increased platelet count, with in vitro inhibition mechanism >95% at the pre, post, pre/post and receptor stages. Hexane and ethyl acetate fractions inhibit DENV-2 100% at post and pre/post infections. The most stable bond of the compounds contained in CA extract is the bond with NS5 protein."

"Pendahuluan: Infeksi virus dengue merupakan infeksi yang paling banyak terjadi di Indonesia. Terapi infeksi dengue umumnya bersifat suportif berupa terapi cairan dan simptomatik. Berdasarkan penelitian sebelumnya, quercetin diketahui memiliki potensi sebagai antiviral dengue. Namun, mekanisme penghambatannya belum diketahui. Penelitian ini bertujuan untuk menilai persentase hambatan quercetin pada mekanisme penghambatan reseptor dan penempelan virus dengue serotipe 2 (DENV-2), persentase viabilitas sel terhadap quercetin, serta ikatan energi antara quercetin dengan protein E pada DENV secara in silico. Metode: Senyawa diuji secara in vitro terhadap DENV-2 menggunakan sel Vero. Dilakukan dua jenis pengujian, yaitu uji penghambatan reseptor dan penempelan virus melalui uji fokus dan uji viabilitas sel melalui uji MTT. Konsentrasi quercetin yang digunakan sebagai uji adalah sebesar 2 kali IC50 (36,81 µg/ml). Pengujian hambatan secara in silico dengan menggunakan software Autodock Tools - 1.5.6. Hasil: Nilai persentase penghambatan pada reseptor dan penempelan DENV dengan quercetin adalah 23,53% dan 45%. Persentase viabilitas sel vero terhadap quercetin pada penghambatan tahap pra-infeksi adalah 109,82%. Interaksi antara quercetin dan protein E DENV memiliki nilai ikatan energi dan konstanta inhibisi pada konformasi terbaik sebesar -4,89 kkal/mol dan 0,26 mM. Kesimpulan: Quercetin berpotensi sebagai antiviral dengue melalui mekanisme penghambatan pada tahap pra-infeksi, terutama penghambatan penempelan virus

---

Introduction: Viral dengue infection is the most common infection in Indonesi. Nowadays, management of DHF is only supportive care, i.e, fluid and symptomatic therapy. Based on previous research, quercetin has potency as antiviral dengue, but the mechanism is still unknown. Thus, the purpose of this research is to evaluate the percentage of reseptor inhibition and dengue serotype 2 virus (DENV-2) attachments inhibition with quercetin, cell viability percentage against quercetin, and energy bond between quercetin and protein E DENV in silico. Method: The compound was tested in vitro against DENV-2 using Vero Cells. There were 2 type of tests, receptor and DENV attachment inhibitory test using focus assay and viability test using MTT assay. The quercetin concentration was 2 times IC50 (36,81µg/ml). In silico study was conducted using Autodock Tools – 1.5.6. Results: Inbitory percentage of reseptor and DENV attachment with quercetin were 23,53% and 45%. Vero cell viability against quercetin in pre-infection step was 109,82%. Energy bond and inhibition constanta between quercetin and protein E DENV were -4,89 kkal/mol and 0,26 mM. Conclusion: This study shows that quercetin has potency as antiviral dengue through DENV attachment inhibition.

"