Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Siklofosfamid merupakan obat antikanker berupa pro-drug yang diaktifkan oleh enzim sitokrom P450 menjadi 4-hidroksisiklofosfamid 4-OHCP. Kadar 4-OHCP dalam tubuh dapat menggambarkan pembentukan fosforamid mustar yang dapat mengalkilasi DNA dan memberikan efek sitotoksik terhadap sel kanker. Analisis siklofosfamid dan 4-OHCP dilakukan pada Dried Blood Spot DBS 17 pasien kanker Rumah Sakit Kanker Dharmais yang diberikan rejimen siklofosfamid secara KCKUT-SM/SM sebagai upaya pemantauan terapi obat. Pengambilan darah dilakukan pada jam ke-2 dan ke-4 setelah pemberian kemoterapi melalui ujung jari. Hasil validasi metode bioanalisis parsial menghasilkan akurasi dan presisi intra hari dengan diff dan koefisien variasi KV tidak lebih dari 15 dan tidak lebih dari 20 pada konsentrasi LLOQ. Kurva kalibrasi yang linear didapat pada rentang 50-30.000 ng/mL untuk siklofosfamid dan 10-1000 ng/mL untuk 4- OHCP. Metode ini telah memenuhi syarat akurasi dan presisi intrahari sesuai European Medicines Agency EMEA tahun 2011. Hasil analisis pada 17 pasien kanker menunjukkan kadar siklofosfamid berkisar antara 6045,980 ng/mL hingga 37024,403 ng/mL dan 4-OHCP berkisar antara 33,155 ng/mL hingga 246,362 ng/mL. Hasil yang diperoleh dapat menjadi salah satu parameter pemantauan terapi siklofosfamid.

---

Cyclophosphamide is an anticancer in the form of prodrug activated by cytochrome P450 enzyme into 4 hydroxycyclophosphamide 4 OHCP. 4 OHCP levels in the body can describe formation of phosphoramide mustard that can alkylate DNA and give cytotoxic effects to cancer cells. Analysis of cyclophosphamide and 4 OHCP was performed on 17 Dried Blood Spots DBS of cancer patients who received cyclophosphamide as chemotherapy regiment from Dharmais Cancer Hospital by KCKUT SM SM for therapeutic drug monitoring. Samples were taken at 2nd and 4th hours after drug administration with finger prick method.

The results of partial validation method produced intra day accuracy and intra day precision with diff and coefficient of variation CV were not more than 15 and not more than 20 in LLOQ concentration. Linear calibration curves were obtained in the range of 50 ndash 30,000 ng mL for cyclophosphamide and 10 1000 ng mL for 4 OHCP. This method has been fulfilled for intra day accuracy and precision according to European Medicines Agency EMEA Guidelines, 2011. The results of the 4 OHCP concentration analysis in 17 cancer patients showed that cyclophosphamide levels ranging from 6045.980 ng mL to 37024.403 ng mL and 4 OHCP was in the range of 33.155 ng mL to 246.362 ng mL. The results could be one of the monitoring parameters of cyclophosphamide therapy."

"Tamoksifen merupakan obat golongan Selective Estrogen Receptor Modulator SERM yang digunakan sebagai terapi adjuvan kanker payudara ER. Setelah administrasi, tamoksifen dimetabolisme menjadi dua metabolit utama: endoksifen yang dapat memberikan efek terapi, dan 4-hidroksitamoksifen yang menurut beberapa penelitian dapat meningkatkan risiko terjadinya kanker endometrium. Efektivitas terapi tamoksifen yang diterima pasien dapat ditinjau melalui pencapaian kadar ambang batas dari endoksifen, dimana pasien yang memiliki kadar endoksifen > 3,3 ng/mL memiliki kemungkinan kekambuhan 26 lebih rendah. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan analisis tamoksifen, endoksifen dan 4-hidroksitamoksifen dalam sampel dried blood spot DBS dari 14 orang pasien kanker payudara yang mendapatkan tamoksifen sebagai terapi adjuvan, sebagai bentuk aplikasi klinis metode analisis senyawa dan untuk mengevaluasi efektivitas terapi tamoksifen yang diterima pasien. Sampel DBS diekstraksi dengan metode pengendapan protein dan dianalisis menggunakan kromatografi cair kinerja ultra tinggi-tandem spektrometri massa KCKUT-SM/SM. Metode ini telah divalidasi parsial dan linear pada rentang 5 ndash; 200 ng/mL untuk tamoksifen, 1 ndash; 40 ng/mL untuk endoksifen dan 0,5-20 ng/mL untuk 4-hidroksitamoksifen. Pada sampel DBS dari 14 pasien kanker payudara yang dianalisis, kadar tamoksifen terukur berkisar antara 58,27 ng/mL hingga 183,53 ng/mL, kadar endoksifen terukur berkisar antara 4,55 ng/mL hingga 28,77 ng/mL, kadar 4-hidroksitamoksifen terukur berkisar antara 0,72 ng/mL hingga 8,19 ng/mL. Seluruh pasien memiliki kadar endoksifen di atas ambang batas 3,3 ng/mL.

---

Tamoxifen is a Selective Estrogen Receptor Modulator SERM that is used as an adjuvant therapy for ER breast cancer. Upon administration, tamoxifen is metabolized to two main metabolites endoxifen which is responsible for its therapeutic effect and 4 OHT which can increase the risk of endometrial cancer according to some researches. Efficacy of tamoxifen therapy can be assessed from clinical threshold of endoxifen, in which patients with endoxifen level above 3,3 ng mL have a 26 lower recurrence rate. This research aims to analyze tamoxifen, endoxifen and 4 hydroxytamoxifen in dried blood spots from 14 breast cancer patients who received tamoxifen as an adjuvant therapy, as clinical application of developed method and to evaluate the effectivity of the therapy received by patients. DBS samples are extracted by protein precipitation method and are analyzed using UPLC MS MS. This method is partially validated and linear within range of 5 ndash 200 ng mL for tamoxifen, 1 ndash 40 ng mL for endoxifen, and 0,5 ndash 20 ng mL for 4 hydroxytamoxifen. The result on 14 breast cancer patients showed that tamoxifen levels were in the range of 58,27 ng mL to 183,53 ng mL, endoxifen 4,55 ng mL to 28,77 ng mL, and 4 hydroxytamoxifen 0,72 ng mL to 8,19 ng mL. All patients showed endoxifen level above the clinical threshold 3,3 ng mL."

"Risperidon (RIS) merupakan obat golongan antipsikotik generasi kedua yang bekerja dengan cara memblok reseptor serotonin (5-HT2A) dan dopamin (D2). RIS dan metabolit aktifnya, yaitu 9-Hidroksirisperidon (9-OH-RIS), menunjukkan tingkat variabilitas berdasarkan polimorfisme CYP2D6, sehingga berdampak pada variabilitas efektivitas terapi dan efek samping obat. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh metode analisis yang optimum dan tervalidasi terhadap RIS dan 9-OH-RIS dalam Dried Blood Spot menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Ultra Tinggi – Tandem Spektrometri Massa. Preparasi sampel dilakukan dengan larutan pengekstraksi metanol–asetonitril dengan metode ekstraksi sonicated-assisted extraction. Pemisahan dilakukan dengan fase gerak asam format 0,1%–metanol 15:85, elusi isokratik, dan laju alir 0,1 mL/menit. Analisis kuantitatif menggunakan spektrometri massa dengan ESI positif serta mode analisis MRM. Deteksi RIS, 9-OH-RIS, dan Clozapin berturut-turut adalah 411,16 --> 191,12; 427,16 --> 207,11; dan 327,10 --> 270,10. Nilai LLOQ RIS dan 9-OH-RIS didapatkan sebesar 2,0 ng/mL. Nilai %KV dan %diff pada within run dan between run tidak lebih dari 15% pada QC dan tidak lebih dari 20% pada LLOQ. Hasil validasi menunjukkan hasil yang sensitif, selektif, dan valid untuk bioanalisis kadar RIS dan 9-OH-RIS dalam darah sesuai guideline FDA tahun 2018.

---

isperidone (RIS) is a secondary generation antipsychotics drug that works by blocking serotonin (5-HT2A) and dopamine (D2) receptors. RIS and its active metabolite, 9-Hydroxyrisperidone (9-OH-RIS) showed a variability based on the CYP2D6 polymorphism, thus impacting variability in therapeutics efficacy and drug side-effects. This study aimed to obtain an optimum and validated analytical method for RIS and 9-OH-RIS in Dried Blood Spot using Ultra High Performance Liquid Chromatography – Tandem Mass Spectrometry. Sample preparation was carried out using methanol–acetonitrile extraction solution by sonicated-assisted extraction method. Separation was carried out using a mobile phase consist of 0.1% formic acid– methanol 15:85, isocratic eluti,on and flow rate of 0.1 mL/minute. Quantitative analysis was carried out using mass spectrometry with ESI positive and MRM analysis mode. Detection of RIS, 9-OH-RIS, and Clozapine were 411.16 --> 191.12; 427.16 --> 207.11; and 327.10 --> 270.10. The LLOQ of RIS and 9-OH-RIS was the same, 2.0 ng/mL . The value of %CV and %diff at within-run and between-run were no more than 15% for QC and not more than 20% at LLOQ. The validated result performed sensitive, selective, and valid for bioanalysis of RIS and 9-OH-RIS levels in the blood according to the 2018 FDA guidelines."

"Siklofosfamid adalah kemoterapi yang bekerja sebagai agen pengalkilasi dan merupakan prodrug sehingga membutuhkan aktivasi oleh enzim sitokrom P450 untuk berubah menjadi metabolit aktifnya, yaitu 4-hidroksisiklofosfamid 4-OHCP. Tujuan penelitian ini adalah untuk memperoleh metode optimum dan tervalidasi untuk analisis siklofosfamid dan 4-OHCP dalam dried blood spot menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Ultra Tinggi-Tandem Spektrometri Massa KCKUT-SM/SM. Penelitian siklofosfamid dan 4-hidroksisiklofosfamid secara simultan ini dikembangkan pertama kalinya dalam sampel dried blood spot. Metabolit 4-OHCP bersifat tidak stabil dalam cairan biologis, sehingga prosedur derivatisasi dilakukan sebelum analisis, yaitu menggunakan semikarbazid hidroklorida. Pemisahan dilakukan pada kolom UPLC Class BEH C18 menggunakan fase gerak asam format 0,01 dalam air-metanol 50:50 dengan mode elusi isokratik pada laju alir 0,3 mL/menit selama 4 menit. Deteksi massa dilakukan pada Waters Xevo TQD dengan Electrospray Ionization positif untuk siklofosfamid, 4-OHCP, dan heksametilfosforamid sebagai baku dalam dengan nilai m/z berturut-turut adalah 260,968 > 139,976; 338,011 > 224,979; dan 180,17 > 92,08. Ekstraksi dilakukan menggunakan metode pengendapan protein dengan pelarut metanol ? ?asetonitril 2:1. Metode ini linear pada rentang 50-30.000 ng/mL untuk siklofosfamid dan 10-1.000 ng/mL untuk 4-OHCP dengan r berturut-turut adalah 0,9972 dan 0,9984. Nilai LLOQ untuk siklofosfamid dan 4-OHCP berturut-turut adalah 50 ng/mL dan 10 ng/mL. Nilai diff dan KV untuk akurasi dan presisi intra hari dan antar hari tidak melebihi 15 dan tidak melebihi 20 pada konsentrasi LLOQ. Secara keseluruhan metode ini telah memenuhi persyaratan validasi yang mengacu pada European Medicines Agency Guidelines 2011.

---

Cyclophosphamide is a chemotherapy that acts as an alkylating agent and a prodrug that requires activation by the cytochrome P450 enzyme to convert into its active metabolite, 4 hydroxycycrophosphamide 4 OHCP. The purpose of this research is to obtain the optimum and validated method for the analysis of cyclophosphamide and 4 OHCP in dried blood spots using Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry UPLC MS MS. This simultaneous cyclophosphamide and 4 OHCP study was developed for the first time in dried blood spot sample. The 4 OHCP metabolite is unstable in biological fluids, so the derivatization procedure was performed prior to analysis, using semicarbazide hydrochloride. The separation was performed on UPLC Class BEH C18 column using mobile phase of 0.01 formic acid in water methanol 50 50 with isocratic elution mode at 0.3 mL minute for 4 min. Mass detection was performed on Waters Xevo TQD with Positive Electrospray Ionization for cyclophosphamide, 4 OHCP, and hexamethylphosphoramide as internal standard with m z values respectively are 260.968 139.976 338.011 224.979 and 180.17 92.08. Extraction was performed using protein precipitation method with methanol acetonitrile 2 1. This method was linear in the range of 50 30,000 ng mL for cyclophosphamide and 10 1,000 ng mL for 4 OHCP with r respectively are 0.9972 and 0.9984. The LLOQ values for cyclophosphamide and 4 OHCP were 50 ng mL and 10 ng mL. The value of diff and CV for accuracy and precision intra days and between days did not exceed 15 and did not exceed 20 of LLOQ concentrations. Overall this method has met the validation requirements that refer to European Medicines Agency Guidelines 2011."

"6-Merkaptopurin (6-MP) merupakan agen kemoterapi kanker yang termasuk dalam golongan antimetabolit antagonis purin. 6-Merkaptopurin harus melalui jalur metabolisme oleh tiopurin S-metiltransferase (TPMT) untuk menjadi metabolit inaktifnya, yaitu 6-metilmerkaptopurin (6-MMP) untuk mengurangi efek sitotoksik dari 6-MP yang dapat menyebabkan mielosupresi. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh metode optimum dan tervalidasi dalam menganalisis 6-MP dan 6- MMP secara simultan dalam sampel Dried Blood Spot menggunakan kromatografi cair kinerja ultra tinggi tandem spektrometri massa. Larutan kontrol kualitas dan kurva kalibrasi dibuat dengan menotolkan masing-masing sebanyak 40 μL pada kertas CAMAG DBS dan dikeringkan selama 3 jam. Kertas DBS dipotong dengan diameter 8 mm dan diekstraksi dengan larutan asetonitril-metanol (1:3) yang mengandung baku 5-fluorourasil (5-FU). Pemisahan dilakukan dengan kolom Waters Acquity UPLC Class BEH C18 1,7 μm (2,1 x 100 mm) dengan fase gerak berupa asam format 0,1% dalam air - asam format 0,1% dalam asetonitril dengan gradient elusi dan laju alir 0,2 mL/menit. Deteksi massa dilakukan dengan Waters Xevo TQD dengan Electrospray Ionization (ESI) positif untuk 6-MP dan 6-MMP dan ESI negative untuk 5-FU pada mode Multiple Reaction Monitoring. Deteksi 6- MP, 6-MMP, 5-FU berturut-turut adalah 153,09 > 119,09; 167,17 > 126,03; 129,09 > 42,05. Metode ini linear dalam rentang 26 ? 1000 ng/mL untuk 6-MP dan 13 - 500 ng/mL untuk 6-MMP dengan r berturut-turut adalah ≥ 0,998 dan ≥ 0,999. Nilai % diff dan koefisien variasi (KV) untuk akurasi dan presisi intra hari dan antar hari tidak lebih dari 15% dan tidak lebih dari 20% pada konsentrasi LLOQ. Metode ini memenuhi persyaratan selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, carry-over, dan efek matriks yang mengacu pada EMEA Guidelines.

---

6-Mercaptopurine (6-MP) is a cancer chemotherapeutic agent that belongs to a class of purine antagonist antimetabolite. 6-Mercaptopurine has to go through the metabolic pathway by thiopurine S-methyltransferase (TPMT) to become its inactive metabolite, 6-methylmercaptopurine (6-MMP) to reduce the cytotoxic effect of 6-MP which can cause myelosuppression. This study aimed to obtain an optimum and validated method in analyzing 6-MP and 6-MMP simultaneously in Dried Blood Spot samples using ultra high-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. The quality control and calibration curves solutions were made by respectively spot 40 μL at DBS CAMAG paper and dried for 3 hours. DBS papers were cut with a diameter of 8 mm and extracted with acetonitrilemethanol (1:3) containing internal standard 5-fluorouracil (5-FU). Separation was performed with Waters Acquity UPLC BEH C18 column Class 1.7 μm (2.1 x 100 mm) with a mobile phase consists of 0.1% formic acid in water ? 0.1% formic acid in acetonitrile with gradient elution and flow rate 0.2 mL/minute. Mass detection was done using Waters Xevo TQD with positive electrospray ionization (ESI) for 6-MP and 6-MMP and negative ESI for 5-FU in Multiple Reaction Monitoring mode. Detection of 6-MP, 6-MMP, 5-FU respectively was 153.09> 119.09; 167.17> 126.03; 129.09> 42.05. This method is linear with the range 26-1000 ng / mL for 6-MP and 13 to 500 ng / mL for 6-MMP with consecutive r value is ≥ 0,998 and ≥ 0,999. % Diff value and coefficient of variation (CV) for accuracy and precision of intra-day and inter-day are not more than 15% and not more than 20% at a concentration LLOQ. This method fulfilled the requirements of selectivity, linearity, accuracy, precision, carry-over, and matrix effects which refers to the EMEA Guidelines."

"Skripsi ini membahas pelaksanaan pengetatan remisi narapidana korupsi di Lapas Sukamiskin Bandung pasca uji materiil Peraturan Pemerintah No. 99 Tahun 2012 tentang Perubahan Kedua Atas Peraturan Pemerintah Nomor 32 Tahun 1999 tentang Syarat dan Tata Cara Pelaksanaan Hak Warga Binaan Pemasyarakatan di Mahkamah Agung dan uji materiil Undang-Undang No. 12 Tahun 1995 tentang Pemasyarakatan di Mahkamah Konstitusi yang diajukan narapidana korupsi.Penelitian ini adalah penelitian yuridis normatif dengan pendekatan kualitatif untuk menganalisis pelaksanaan pengetatan remisi narapidana korupsi di Lapas Sukamiskin Bandung pasca uji materiil di Mahkamah Agung dan Mahkamah Konstitusi. Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan, pengetatan remisi narapidana korupsi yang diatur dalam PP 99 Tahun 2012 oleh narapidana korupsi dinilai bertentangan dengan hak-hak narapidana yang diatur dalam UU Pemasyarakatan. Setelah langkah uji materiil dilakukan narapidana korupsi di Mahkamah Agung dan Mahkamah Konstitusi ditolak, maka pelaksanaan pengetatan remisi narapidana korupsi di Lapas Sukamiskin Bandung dilakukan berdasarkan aturan perundang-undangan yang berlaku. Dari 366 narapidana korupsi di Lapas Sukamiskin, hanya 36 orang narapidana yang mendapatkan remisi. Sebanyak 30 orang mendapatkan remisi sebelum keluarnya PP 99 Tahun 2012 sehingga mereka tidak dikenai pengetatan syarat remisi. Sedangkan hanya 6 orang yang mendapatkan remisi pasca pengetatan yang diatur dalam PP. 99 Tahun2012 yaitu memenuhi syarat menjadi justice collaborator dan membayar lunas denda dan uang pengganti.

---

This thesis discuss the implementation of the tightening of remission for corruption prisoners at Sukamiskin Prison after material review in the Supreme Court against Government Regulation Number 99 Year 2012 on the Second Amendment of Government Regulation Number 32 Year 1999 on Conditions and Mechanisms for the Implementation of the Rights of Prisoners (PP 99 Year 2012) and another material review submitted by corruption prisoners in the Constitutional Court against Law Number 12 Year 19995 on Correction (Correction Law). The nature of the research is normative juridical with qualitative approve to analyze the implementation of tightening remission for remission for corruption prisoners at Sukamiskin Prison after those material reviews in the Supreme Court and the Constitutional Court. The result of this research shows that in the view of corruption prisoners the policy to tighten remission for corruption prisoners regulated in PP 99 Year 2012 contradicts with the rights of the prisoners regulated in the Correction Law. After both material reviews in the Supreme Court and in the Constitutional Court has failed, the policy of the tightening remission for corruption prisoners at Sukamiskin Prison in Bandung is implemented according to the applied rules and regulations. Out of 366 corruption prisoners at Sukamiskin Prison, there are only 36 prisoners who have received remission. However, 30 prisoners received the remission before PP 99 Year 2012 being issued so that the tightening remission policy was not applied for them. Meanwhile, only 6 prisoners were able to receive remission after the tightening policy in PP 99 Year 2012 was implemented, because they were qualified as justice collaborators and has paid fine penalties as well as fine replacements."

"Asap rokok adalah sumber utama paparan akrilamida setelah makanan. Akrilamida diklasifikasikan sebagai senyawa berpotensi karsinogenik pada manusia (Grup 2A). Akrilamida dimetabolisme oleh enzim CYP2E1 menjadi glisidamida yang sangat reaktif terhadap DNA dan dapat membentuk DNA adduct sehingga menyebabkan efek karsinogenik pada manusia. Kadar akrilamida dalam asap rokok berkisar 1,000–7,991 μg/rokok yang dipengaruhi perbedaan merek rokok. Paparan akrilamida pada perokok 2,2–4,6 kali lebih tinggi daripada non perokok dan glisidamida 1,1–3,8 kali lebih tinggi daripada non perokok. Kadar akrilamida dan glisidamida dalam sampel Dried Blood Spot (DBS) belum diketahui. Keunggulan DBS yaitu nyaman bagi subjek, volume sampel kecil, analit lebih stabil, penyimpanan dan transportasi mudah, serta preparasi sampel sederhana. Aplikasi volumetrik menggunakan pipet volumetrik atau perangkat modern seperti microfluidic DBS dapat mengatasi efek hematokrit darah. Metode KCKUT-SM/SM dapat mengkuantifikasi sejumlah kecil analit karena menghasilkan pemisahan yang baik, waktu retensi cepat, sensitivitas dan selektivitas tinggi. Validasi metode serta analisis akrilamida dan glisidamida dalam sampel DBS perokok secara KCKUT-SM/SM penting dilakukan untuk mengukur risiko paparan akrilamida melalui asap rokok. Metode analisis menggunakan KCKUT-SM/SM dengan kolom Acquity® UPLC BEH C18; fase gerak asam formiat 0,1% dalam air-asetonitril (40:60 v/v) dengan elusi gradien; laju alir 0,20 mL/menit; deteksi massa menggunakan penganalisis massa triple quadrupole dengan mode Electrospray Source Ionization (ESI) positif tipe Multiple Reaction Monitoring (MRM); nilai m/z 71,99>55,0; 87,9>44,2; 75>58,0 untuk akrilamida, glisidamida, dan d3-akrilamida. Preparasi sampel dengan pengendapan protein menggunakan larutan pengekstraksi metanol.

---

Cigarette smoke is the major source of acrylamide exposure after food. Acrylamide is classified as a probably carcinogenic to humans (Group 2A). Acrylamide is metabolized by CYP2E1 enzyme into glycidamide that very reactive to DNA and can form DNA adducts causing carcinogenic effects in humans. Acrylamide level in cigarette smoke is around 1.000–7.991 μg/cigarette caused by different cigarette brands. Acrylamide exposure in smokers is 2.2–4.6 times higher than non-smokers and glycidamide exposure 1.1–3.8 times higher than non-smokers. The levels of acrylamide and glycidamide in Dried Blood Spot (DBS) sample are still unknown. Advantages of DBS are convenient for subjects, small sample volumes, analytes are more stable, easy storage and transport, and simple sample preparation. Volumetric application by using volumetric pipettes or modern devices such as microfluidic DBS are used to overcome blood hematocrit effect. UHPLC-MS/MS method can quantify small amounts of analytes due to good separation, fast retention time, high sensitivity and selectivity. Method validation and analysis of acrylamide and glycidamide in DBS smokers by UHPLC-MS/MS is important to measure the risk of acrylamide exposure through cigarette smoke. Analysis method using UHPLC-MS/MS with Acquity® UPLC BEH C18 column; mobile phase was 0.1% of formic acid in water and acetonitrile (40:60 v/v) with gradien elution; flow rate was 0.20 mL/min; mass detection using triple quadrupole mass analyzer with positive Electrospray Source Ionization (ESI) and Multiple Reaction Monitoring (MRM) type; m/z values were 71.99>55.0; 87.9>44.2; 75>58.0 for acrylamide, glycidamide, and acrylamide-d3. Sample preparation with protein precipitation using methanol as extraction solvent."

"Siklofosfamid merupakan antineoplastik golongan agen pengalkilasi yang banyak digunakan dalam kemoterapi kanker. Siklofofamid bekerja dengan mengalkilasi basa DNA pada posisi N7 guanin menghasilkan N7-metilguanin. Siklofosfamid bersifat tidak selektif dan dapat mengalkilasi gugus nukleofil lain pada DNA yaitu O6 guanin menghasilkan O6-metilguanin yang berpotensi menyebabkan mutasi yang dapat memicu kanker sekunder. Pendeteksian O6-metilguanin sebagai salah satu contoh alkilguanin dapat menjadi salah satu cara monitoring terapi untuk menghindari risiko kanker sekunder pada pasien kanker yang diberikan siklofosfamid. Pada penelitian ini dilakukan analisis O6-metilguanin dalam darah pasien kanker. DNA sampel diisolasi menggunakan QIAgen DNA Mini Kits, lalu dihidrolisis menggunakan asam format. Hasil hidrolisis diinjeksikan ke KCKUTSM/ SM dengan kolom C18 Acquity UPLC BEH (1,7 μm, 2,1×100 mm) menggunakan elusi isokratik, fase gerak asam asetat 0,05% dalam aquabidestasetonitril (95:5), laju alir 0,3 mL/menit, metode ionisasi ESI+, kuantitasi MRM 166,1>149,1 dan 166,1>134,1, volume injeksi 10,0 μL. O6-metilguanin muncul pada 1,46 menit. Perhitungan menurut kurva kalibrasi memberikan batas deteksi 1,05 ng/mL dan batas kuantitasi 3,50 ng/mL. Dari 72 sampel yang dianalisis, O6-metilguanin terdeteksi pada 17 sampel, dan dapat dikuantitasi pada 1 sampel dengan kadar 5,8680 ng/mL.

---

Cyclophosphamide is one of the alkylating agents that widely used in cancer chemotherapy. It alkylates N7-guanine on DNA as major target, forming N7- methylguanine. Cyclophosphamide is not selective and can alkylate other nucleophilic groups such as O6-guanine forming O6-methylguanine which is potencial to causes mutation leading to secondary cancer in patients who administered it. O6-methylguanine detection as one of alkylguanine can be one way to monitor chemotherapy, therefore secondary cancer risk can be avoided. This research analyzes O6-methylguanine in cancer patients? blood. DNA samples were isolated by QIAgen DNA Mini Kits, and hydrolyzed using formic acid. The hydrolysate was injected to UPLC-MS/MS, column C18 Acquity UPLC BEH (1.7 μm, 2.1×100 mm), isocratic elution in 3 minutes, mobile phase consisted of acetic acid 0.05% in aquabidest - acetonitrile (95:5), flow rate 0,3 mL/min, ionization method ESI+, quantification traces 166.1>149.1 and 166.1>134.1, injection volume 10,0 mL. O6-methylguanine?s peak showed in 1,46 min. Extrapolation from calibration curve data gave limit of detection 1.05 ng/mL and limit of quantitation 3,50 ng/mL. Among 72 analyzed samples, O6-methylguanine was detected on 17 samples, and could be quantified on 1 sample at concentration 5.8680 ng/mL."

"Akrilamida merupakan senyawa karsinogen yang dapat ditemukan pada makanan, kopi, dan asap rokok. Ketika masuk ke dalam tubuh manusia, akrilamida akan dimetabolisme oleh CYP2E1 menjadi glisidamida yang kemudian dapat bereaksi dengan DNA membentuk DNA adduct. Analisis akrilamida dan glisidamida secara simultan dalam darah, teknik biosampling yang biasa digunakan adalah venipuncture yang bersifat invasif dan membutuhkan keahlian khusus. Pada penelitian ini, teknik biosampling yang digunakan adalah dried blood spot (DBS) yang mudah dan tidak invasif. Metode untuk menganalisis akrilamida dan glisidamida secara simultan menggunakan DBS belum pernah dilakukan pada penelitian sebelumnya. Maka, penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan metode analisis akrilamida dan glisidamida secara simultan yang optimal dan tervalidasi dengan menggunakan propanamida sebagai standar internal. Sampel dipreparasi dengan pengendapan protein menggunakan metanol dan air (1:1). Pemisahan senyawa menggunakan kromatografi fase terbalik dengan kolom Acquity® UPLC BEH C18 (1,7 μm; 2,1 mm x 100 mm), dielusi dengan laju alir 0,20 mL/min dengan kondisi gradien dengan fase gerak 0,2% asam formiat dalam air dan asetonitril selama 5 menit. Deteksi analit dilakukan menggunakan spektrometri massa triple quadrupole dengan mode electrospray ionization positif dan multiple reaction monitoring (MRM) diatur pada m/z 72,0 > 55,02 untuk akrilamida, 88,1 > 44,0 untuk glisidamida, dan 74,01 > 57,1 untuk propanamida. Batas kuantitasi terendah yang diperoleh adalah 1 µg/ml untuk akrilamida dan glisidamida. Rentang konsentrasi linier antara 1 - 40 µg/ml. Metode analisis tervalidasi sesuai pedoman FDA 2018.

---

Acrylamide is a carcinogenic compound that can be found in food, coffee, and cigarette smoke. When it enters the human body, acrylamide will be metabolized by CYP2E1 to glycidamide which can then react with DNA to form DNA adducts. To analyze acrylamide and glycidamide simultaneously in the blood, the biosampling technique commonly used is venipuncture which is invasive and requires special expertise. In this study, the biosampling technique used is dried blood spot (DBS) which is easy and non-invasive. Methods for analyzing acrylamide and glycidamide simultaneously using DBS have not been carried out in previous studies. Therefore, this study aims to obtain an optimal and validated method of acrylamide and glycidamide simultaneous analysis using propanamide as an internal standard. Samples were prepared by protein precipitation using methanol and water (1: 1). Separation of compounds used reverse phase chromatography with the Acquity® UPLC BEH C18 column (1.7 μm, 2.1 mm x 100 mm), eluted at a flow rate of 0.20 mL/min under gradient conditions with a mobile phase of 0.2% formic acid in water and acetonitrile for 5 minutes. Quantification was performed using triple quadrupole mass spectrometry with positive electrospray ionization and multiple reaction monitoring (MRM) mode set at m / z 72.0> 55.02 for acrylamide, 88.1> 44.0 for glycidamide, and 74.01> 57.1 for propanamide. The lowest limit of quantification is obtained at 1 μg / ml for both acrylamide and glycidamide. The range of linear concentration is between 1 - 40 µg / ml. The analysis method is validated according to FDA 2018 guidelines."

"Siklofosfamid merupakan salah satu obat golongan agen pengalkilasi nitrogen mustaryang sering digunakan dalam kemoterapi kanker. Namun demikian, penggunaansiklofosfamid dengan dosis yang tinggi dan jangka waktu yang panjang telah terbuktidapat meningkatkan risiko terjadinya kanker sekunder. Hal ini dapat ditandai denganterbentuknya DNA adduct yang mutagen, seperti N5-Nitrogen mustarformamidopirimidin(NM-Fapy-G). Oleh karena itu, adduct tersebut dapat dijadikansalah satu biomarker terjadinya kanker sekunder pada pasien yang menerimasiklofosfamid. Beberapa peneliti telah mengembangkan metode untuk menganalisis NMFapy-G dengan menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Ultra Tinggi – TandemSpektrometri Massa (KCKUT-SM/SM). Namun demikian, seluruh penelitian tersebutmasih menggunakan sel atau jaringan sebagai biospesimennya sehingga tidak aplikatifapabila ingin diimplementasikan kepada pasien. Oleh karena itu, tulisan ini dibuat untukmemaparkan gagasan terkait kesesuaian penggunaan Dried Blood Spot (DBS) sebagaimetode biosampling darah; metode ekstraksi dan hidrolisis DNA yang tepat untukmemperoleh adduct NM-Fapy-G; dan metode analisis yang sesuai untuk menganalisisNM-Fapy-G. Berdasarkan studi literatur yang telah dilakukan, maka DBS telah terbuktidapat digunakan dalam penelitian ini; QIAamp DNA Mini Kit dapat digunakan untukmengekstraksi DNA dari kertas DBS; metode yang telah dikembangkan oleh Gruppi etal., (2015) dapat digunakan untuk hidrolisis DNA; dan analisis dapat dilakukan denganmenggunakan kondisi analisis yang telah dikembangkan Chen et al., (2020) dengansedikit modifikasi. Metode yang diajukan diharapkan dapat digunakan dalam penelitianNM-Fapy-G selanjutnya. Apabila hasil yang didapatkan positif, diharapkan dapat segeradiimplementasikan untuk menganalisis NM-Fapy-G pada pasien kanker yang menerimasiklofosfamid sehingga kemungkinan tejadinya kanker sekunder dapat diprediksi

---

Cyclophosphamide is one of the alkylating nitrogen mustard agents that is frequently used

for cancer chemotherapy. Nevertheless, long-term use of high dosage cyclophosphamide

has been proven to increase the risk of secondary cancer. This can be traced by the

mutagenic DNA adduct formation, for instance, N5-Nitrogen mustardformamidopyrimidine

(NM-Fapy-G). Consequently, it may serve as one of the secondary

cancer biomarkers in cancer patients who are receiving cyclophosphamide treatment.

There are already several NM-Fapy-G analysis methods employing Liquid

Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) developed by experts.

However, cells and tissues are still utilized as the biospecimens, thus it is discovered not

applicative and hard to be performed in patients. Therefore, this summary is presented to

emphasize the idea of adopting Dried Blood Spot as the blood's biosampling method;

DNA extraction and hydrolysis method that is suitable for enriching NM-Fapy-

G adduct; and method that is proper for NM-Fapy-G analysis. Based on the literature

study, DBS has been proven beneficial for this analysis; DNA can be extracted from the

DBS cards by using QIAamp DNA Mini Kit; DNA hydrolysis can be executed according

to the method that has been developed by Gruppi et al., (2015); and method from Chen

et al., (2020) research with a little bit of adjustment can be applied for NM-Fapy-G

analysis. Hopefully, the proposed idea will be accepted in future NM-Fapy-G analysis,

so it can soon be implemented for NM-Fapy-G analysis in cancer patients who have been

administered cyclophosphamide. Hence, the possibility of secondary cancer may be

predicted."